Pour commencer, incubez les plaques de bombardement biolistique de levure à 30 degrés Celsius pendant cinq à sept nuits. Inoculer la souche testeur du type d’accouplement opposé dans deux millilitres de milieu YPD pendant la nuit. Le lendemain, transférez 150 microlitres de la culture de la souche testrice sur une plaque YPD.
À l’aide d’une poignée en verre stérile, étalez uniformément le testeur sur la surface de la plaque et laissez-le sécher à l’air. Utilisez des tampons réplicatifs en velours et un tampon de réplicateur pour faire une réplique sur plaque maîtresse du marqueur d’auxotrophie plasmidique transformé sur une plaque moyenne de décrochage. Ensuite, répétez sur la plaque YPD contenant la pelouse du testeur et incuber.
Après 48 heures, répliquer la plaque contenant le testeur sur un milieu sélectif pour détecter la présence du gène mitochondrial d’intérêt. Comparez la plaque maîtresse et les colonies correspondantes pour identifier les colonies positives. Striez les colonies positives de la plaque maîtresse sur une deuxième plaque de chute sélective.
La pelouse d’essai et les cellules transformantes se sont accouplées et ont donné des mitochondries perfusées. Des rho-colonies synthétiques positives purifiées ont été obtenues à partir de plaques URA. Certaines rho-colonies synthétiques positives ont perdu la construction mitochondriale.
