Pour commencer, obtenez une culture cellulaire PANC-1 et lavez les cellules avec neuf millilitres de solution saline équilibrée de Hank par incréments de trois millilitres. Incuber les cellules avec deux millilitres de trypsine pendant environ 10 minutes. Pour neutraliser la suspension, ajoutez trois millilitres de DMEM complété par 10%FBS.
Après avoir lavé les cellules sept fois avec des incréments d’un millilitre de média, prélevez chaque aliquote neutralisée dans un tube de 15 millilitres. De même, obtenir des cellules stellaires pancréatiques humaines trypsinisées, ou HPaSteC, en utilisant une solution de neutralisation de la trypsine et des milieux cellulaires stellaires. Mélangez la quantité requise des deux suspensions cellulaires dans 11 millilitres de DMEM avec 10% de FBS en évitant la formation de mousse.
Versez doucement 100 microlitres de mélange de suspension cellulaire dans la plaque de culture et incubez à 37 degrés Celsius avec 5 % de dioxyde de carbone. Le troisième jour, ajoutez 50 microlitres de DMEM avec 10% FBS dans chaque puits sur le côté du puits. Le jour 10 ou 11, aspirez le média usagé sans perturber la solution près du halo et ajoutez 100 microlitres de média frais sur le côté de chaque puits.
Le 14e ou le 17e jour, à l’aide d’une pipette d’un millilitre, retirez le milieu de chaque puits jusqu’à ce que le halo soit atteint. Alignez la plaque sur l’arrière-plan de la hotte pour localiser les sphéroïdes en bas. Pipetez doucement environ 50 microlitres de média près des sphéroïdes pour le perturber pour l’accumulation de morceaux.
Les sphéroïdes obtenus le jour 14 ont atteint un volume moyen de 0,048 millimètre cube.
