Induction in vitro de cellules Th17 pathogènes dans des cellules T CD4⁺ naïves de souris

Pour commencer, retirez le PBS de la plaque pré-enduite à 24 puits. Remettre en suspension les lymphocytes T CD4+T naïfs spléniques de souris enrichis dans un milieu de culture cellulaire Th17 et distribuer dans différents puits d’une plaque à 24 puits pré-enduite d’anti-CD3. Ajouter le milieu de culture cellulaire Th0, le milieu de culture Th17 non pathogène classique et le milieu de culture pathogène Th17 classique pour le contraste dans les puits restants de la plaque.

Ajouter un microlitre de solution anti-CD28 dans chaque puits. Cultivez les cellules dans un incubateur à 5 % de dioxyde de carbone à 37 degrés Celsius pendant cinq jours. Le deuxième jour, remplacez la moitié du milieu de culture surnageant cellulaire par un milieu de culture frais.

Observez les cellules au microscope optique le cinquième jour. Collectez les surnageants cellulaires de chaque groupe et cryoconservez-les à 80 degrés Celsius. Des lymphocytes T CD4+ naïfs ont été cultivés avec un milieu Th0 et un milieu de différenciation Th17 pendant cinq jours, ce qui a permis aux lymphocytes T de se développer en grappes dans les deux milieux.

L’analyse par cytométrie en flux a révélé que 90 % des lymphocytes T CD4+ naïfs se sont différenciés avec succès en cellules pathogènes Th17 sous la stimulation d’un nouveau milieu de culture cellulaire Th17.