Pour commencer, collectez une fois 10 à la puissance de six cellules T-ALL de poisson-zèbre marquées par fluorescence dans des tubes de microcentrifugation de 1,5 millilitre. Centrifugez les cellules à 2 500 G pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius et remettez la pastille en suspension dans un millilitre de 0,9 XPBS. Placez 250 microlitres de suspension cellulaire dans un tube de microcentrifugation.
Ensuite, ajoutez 250 microlitres de 0,9 XPBS pour porter le volume à 500 microlitres. Ajouter le volume requis de solution mère de colorant CT-FR et incuber pendant 20 minutes à 37 degrés Celsius, à l’abri de la lumière. Centrifugez les cellules à 2 500 G pendant cinq minutes à température ambiante.
Ajoutez 500 microlitres de milieu de poisson pour éliminer l’excès de colorant et centrifugez à nouveau avant de remettre le granulé en suspension dans 25 microlitres de milieu de poisson. Colorez les cellules avec du bleu trypan et examinez-les au microscope pour en vérifier la viabilité. À l’aide de la concentration CT-FR optimisée, colorez les cellules du poisson-zèbre et laissez certaines cellules tumorales non colorées.
À l’aide d’une microseringue Hamilton, injectez cinq microlitres de suspension cellulaire colorée et non colorée dans la cavité intrapéritonéale d’un poisson-zèbre anesthésié.
