Pour la préparation de la plaque donneuse, transférez 500 000 cellules de poisson-zèbre CG1 de type sauvage dans un tube conique de 15 millilitres. Ajoutez cinq millilitres de milieu de poisson pour diluer le stock de cellules à 100 cellules par microlitre. Versez 50 microlitres de suspension cellulaire dans chaque puits de la plaque à 96 puits et placez la plaque à quatre degrés Celsius jusqu’au tri.
Préparez des contrôles sans tache et monocolore pour la configuration de l’expérience de tri. Passez la suspension de la cellule des commandes et les échantillons à travers un capuchon filtrant de 35 microns dans un tube de télécopie sur de la glace. Centrifuger la plaque à 96 puits à 2 500 G à quatre degrés Celsius.
Retirez soigneusement 45 microlitres de surnageant de chaque puits, en laissant cinq microlitres de liquide derrière vous. Remettez les cellules en suspension à l’aide d’une pipette de 20 microlitres et, à l’aide de la micro-seringue Hamilton, injectez les suspensions cellulaires dans le nombre souhaité de poissons-zèbres CG1. Après avoir transplanté du poisson-zèbre CG1 avec des cellules triées pour l’analyse de dilution limite, les cellules élevées CT-FR avaient une fréquence de cellules souches leucémiques quatre fois plus élevée que les cellules basses CT-FR.
Des images représentatives de poissons-zèbres à 28 jours après la transplantation ont montré que 89 % des poissons-zèbres CT-FR à forte CT-FR développent une leucémie, contre 20 % dans le groupe CT-FR faible. Le poisson-zèbre CT-FR élevé avait une latence significativement plus courte que la leucémie. Le poisson zèbre CT-FR élevé avait une survie globale significativement plus faible que le poisson zèbre CT-FR faible.
