Pour commencer, placez le tissu pulmonaire de la souris dans 4% de paraformaldéhyde, soit 10 fois le volume du tissu. Après trois heures de fixation, séparez les cinq lobes pulmonaires et encastrez séparément les lobes crânien, moyen et accessoire du poumon droit, en vous orientant dans la direction de la connexion verticale lobe-bronche. Ensuite, coupez le lobe caudal du poumon droit en deux morceaux à quatre millimètres de gauche à droite dans la direction perpendiculaire à la connexion poumon-lobe-bronche, et intégrez les tranches dans un bloc de cire, avec la surface coupée vers le haut.
Pour faire trois incisions dans le lobe pulmonaire gauche, coupez transversalement au-dessus de la jonction bronchique principale, deux millimètres en dessous du haut. Faites la deuxième coupe transversalement au-dessus de la jonction bronchique principale, cinq millimètres en dessous du haut. Faites la troisième coupe à l’extrémité du lobe, à huit millimètres sous le haut.
Après avoir jeté le morceau de tissu le plus élevé, enfermez les trois morceaux restants dans un bloc de cire, la surface coupée vers le haut. Après la refixation, rincez le bloc de tissu sous l’eau courante pendant 15 minutes. Immergez séquentiellement le tissu dans les concentrations croissantes d’éthanol, suivi de xylène et de cire molle.
Remplissez un moule avec une quantité appropriée de paraffine liquide et, à l’aide d’une pince, positionnez le tissu dans le cadre d’enrobage au centre. Placez le moule et le tissu dans la zone de congélation de la machine d’enrobage. Lorsque la paraffine commence à blanchir légèrement, positionnez rapidement le cadre d’enrobage découvert sur le dessus du moule et effectuez la deuxième injection de cire, en scellant les trous au bas du cadre d’enrobage.
Transférez ensuite l’ensemble du moule sur la table de congélation. Après avoir fixé le bloc de cire sur la trancheuse, coupez le bloc pour révéler une surface de coupe lisse et plate. Tournez la manivelle du microtome pour couper des tranches d’une épaisseur de quatre micromètres.
Placez en douceur les sections retirées à la surface de l’eau de manière séquentielle. Une fois les sections complètement déployées, séparez les morceaux cassés aux jonctions entre chaque section. Inclinez une glissière en verre sous la section et, au contact, soulevez lentement et uniformément la glissière hors de la surface de l’eau dans un mouvement vertical.
