Essai de migration par égratignure des cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine (HUVEC) pour l’étude de l’angiogenèse in vitro

Pour commencer, ensemencez 100 microlitres de cellules HUVEC dans les puits d’une plaque de 96 puits. Placez la plaque dans un incubateur de culture cellulaire à 37 degrés Celsius sous 5 % de dioxyde de carbone pendant six heures pour faciliter la décantation cellulaire. Ensuite, remplacez le milieu dans chaque puits par 100 microlitres de milieu basal de croissance des cellules endothéliales, contenant 2 % de FBS, et incubez à nouveau.

Le lendemain, positionnez la plaque dans un outil de fabrication de 96 puits enroulés. Appuyez sur le levier de l’appareil pour générer une rayure. Soulevez avec précaution le couvercle de l’outil de fabrication de plaies avant de relâcher le levier pour éviter les doubles rayures.

Lavez les puits deux fois avec 200 microlitres de milieu basal de croissance des cellules endothéliales supplémenté en FBS. Après avoir confirmé l’élimination totale des débris, pipetez 100 microlitres des solutions de stimulation ou de contrôle préparées dans chaque puits. Utilisez un microscope d’imagerie sur cellules vivantes pour acquérir des images toutes les heures pendant 24 heures.

Le témoin positif a montré une migration réussie dans la zone rayée d’origine. Des problèmes techniques ont été observés comme une croissance cellulaire inégale, un double grattage ou des vagues dans les bordures de grattage. Une augmentation de 25 % de la distance relative de la plaie a été considérée comme optimale.

Une séparation incorrecte des commandes positive et négative indiquait une faible plage dynamique.