Pour commencer, extrayez l’ADN d’échantillons de mouches à l’aide d’un kit d’extraction d’ADN. Ensuite, utilisez un lecteur de microplaques pour déterminer les valeurs de OD260 et OD280 afin de comparer la pureté de l’ADN et la concentration en acides nucléiques. Ensuite, préparez des solutions standard de fluorimètre en ajoutant 190 microlitres de solution de travail dans deux tubes à centrifuger de 0,5 millilitre.
Ajoutez ensuite 10 microlitres de la norme un et de la norme deux aux solutions de travail. Gardez les tubes à l’abri de la lumière pendant au moins 15 minutes. Mélangez deux microlitres d’ADN de test avec 198 microlitres de solution de travail dans un tube à centrifuger de 0,5 millilitre et maintenez le mélange dans l’obscurité pendant au moins 15 minutes.
Après 15 minutes, allumez le fluorimètre et sélectionnez la mesure de la concentration d’ADNdb, réglage longue portée. Testez la norme un et la norme deux pour obtenir la courbe standard. Placez ensuite les échantillons à tester dans les puits d’essai.
Ajustez le volume de pointe d’ADN à deux microlitres et effectuez la mesure. Pour visualiser l’ADN, mettez d’abord en place 20 microlitres de la réaction d’amplification de la PCR. Placez les tubes dans un thermocycleur et exécutez les cycles PCR.
Après PCR, soumettre les produits à une électrophorèse sur gel d’agarose à 2 %. Placez ensuite le gel sur un système d’imagerie sur gel pour l’analyse photo. L’évaluation de la pureté de l’ADN extrait par lecteur de microplaques a montré que tous les échantillons frais et le premier échantillon ancien avaient des rapports OD260 à OD280 supérieurs à deux.
En revanche, l’ancien échantillon deux présentait un rapport plus faible. La concentration d’ADN dérivée des lectures OD260 était la plus élevée dans les échantillons frais, suivis de l’ancien échantillon un et la plus faible dans l’ancien échantillon deux. L’analyse électrophorétique a révélé des bandes de l’ordre de 250 à 400 paires de bases, qui étaient plus prononcées dans les échantillons frais, par rapport aux anciens.
