Le mélangeur à jet d’impact confiné dirige deux flux à grand nombre de Reynolds l’un vers l’autre à l’intérieur d’une chambre de mélange plus grande. La quantité de mouvement linéaire de chaque jet est dissipée dans la formation de tourbillons turbulents à l’échelle du micron qui provoquent un mélange rapide et uniforme des flux de solvant et d’antisolvant. Pour commencer à formuler les nanoparticules lipidiques, remplissez deux seringues de cinq millilitres d’éthanol et verrouillez chacune d’entre elles dans un orifice d’entrée du mélangeur à jet d’impact confiné, ou CIJ.
Enfoncez rapidement les seringues et collectez l’effluent du mélangeur comme déchet. Retirez les seringues à rinçage à l’éthanol du CIJ. Soufflez un flux d’azote sec à travers les adaptateurs d’entrée pour sécher les canaux internes du CIJ.
Mélangez les solutions mères de lipides et diluez-les avec de l’éthanol dans un tube de microcentrifugation de 1,5 millilitre. Diluer un matériau tampon d’acétate de pH 4 de 100 millimolaires à 10 millimolaires dans un volume total de quatre millilitres. Pour préparer le flux d’antisolvant, mélangez l’ARN avec un tampon d’acétate dans un tube de 1,5 millilitre.
Préparez 500 microlitres de solution dans une seringue d’un millilitre. Retournez la seringue et expulsez l’air du jet aqueux d’antisolvant. De même, prélever 500 microlitres de solution lipidique dans une seringue d’un millilitre.
Ensuite, retournez la seringue pour expulser l’air du flux de solvant éthanoïque. Placez le mélangeur CIJ propre sur le flacon du bain de trempe. Accouplez les deux seringues aux orifices d’entrée du mélangeur CIJ.
Appuyez rapidement sur les deux seringues pour mélanger les flux de solvant et d’antisolvant et collectez les nanoparticules lipidiques dans le bain de trempe. Retirez le mélangeur CIJ du bain de trempe avec les seringues toujours attachées. Tenez le CIJ au-dessus d’un conteneur à déchets et retirez les seringues, permettant au volume de rétention résiduel de s’écouler dans le conteneur à déchets.
Fermez maintenant le bain de trempe contenant une dispersion de nanoparticules lipidiques et faites tourner doucement le flacon.
