Pour commencer, placez un milieu cellulaire Sf1Ep préchauffé fraîchement préparé et des cellules Sf1Ep décongelées dans un flacon cryogénique sur une plate-forme de travail. Ajoutez un millilitre de milieu cellulaire Sf1Ep dans le flacon cryogénique et mélangez délicatement. Transférez le mélange dans un tube à centrifuger conique stérile de 15 millilitres contenant cinq millilitres de milieu cellulaire Sf1Ep, et mélangez délicatement.
Centrifuger la suspension cellulaire à 100 G pendant sept minutes et jeter le surnageant avant de remettre la pastille en suspension dans 15 millilitres de milieu cellulaire Sf1Ep frais. Transférez la suspension cellulaire dans un flacon de culture tissulaire T75 et placez-la dans un incubateur de culture tissulaire humidifié standard pendant une semaine. Après l’incubation, aspirez le milieu du ballon et rincez la couche cellulaire avec cinq millilitres de PBS stérile.
Après avoir aspiré le PBS, ajoutez 2,5 millilitres de trypsine-EDTA dans le ballon et fermez le bouchon. Incuber la fiole à 37 degrés Celsius pendant cinq minutes. Tapotez doucement le ballon pour déloger les cellules et observez au microscope inversé pour confirmer la dispersion des cellules.
Ajouter cinq millilitres de milieu de culture Sf1Ep et secouer le ballon pour le mélanger avec la trypsine-EDTA. Transférez la suspension cellulaire dans un tube conique et quantifiez les cellules à l’aide d’un hémocytomètre ou d’un compteur de cellules automatisé. Pour congeler les cellules Sf1Ep, faites tourner les cellules à 100 G pendant sept minutes et remettez la pastille en suspension dans un milieu Sf1Ep complété par 10 % de DMSO.
Répartissez un millilitre de suspension cellulaire dans chaque flacon cryogénique et congelez toute la nuit à moins 70 à moins 80 degrés Celsius.
