Pour commencer, placez une harpe en platine dans une barque près de la plate-forme MEA. Couvrez ensuite la harpe avec environ trois millilitres d’aCSF pour réduire ses tendances hydrophobes. Utilisez des ciseaux pour couper environ 1,5 pouce de la pointe étroite d’une pipette de transfert.
Ensuite, utilisez la pipette modifiée pour prélever une tranche de cerveau dans la chambre de maintien de la tranche. Versez doucement la tranche de cerveau et toute solution contenue dans la pipette dans le puits de la puce. Pour positionner correctement la tranche, utilisez un pinceau doux pour créer un courant dans la solution qui pousse la tranche de cerveau sur des électrodes d’enregistrement.
À l’aide d’une pince, placez délicatement la harpe sur la tranche de cerveau avec les fils vers le bas pour appuyer la tranche sur les électrodes d’enregistrement. Orientez la harpe de manière à ce que le côté sans cadre soit orienté vers l’aiguille d’entrée et que le cadre de la harpe n’entre en contact avec aucune des électrodes d’enregistrement. Prenez maintenant une pipette de rechange et retirez l’excès de LCR.
Ensuite, prenez une lingette antistatique, tournez un coin pour créer une pointe et utilisez-la pour absorber l’aCSF restant entourant les électrodes d’enregistrement sans toucher les électrodes d’enregistrement, la tranche de cerveau ou la harpe. À l’aide d’une pipette désignée pour le LCR, ajoutez rapidement environ deux millilitres de LCRFa carbogéné pour couvrir la tranche de cerveau. Remplissez le puits d’environ trois millilitres de carbogéné aCSF jusqu’à ce qu’il soit rempli aux trois quarts.
Ensuite, utilisez un microscope ou une caméra pour prendre une photo haute résolution de la tranche de cerveau sur la puce MEA. Placez les tubes d’entrée et de sortie dans le bécher rempli d’aCSF. Placez l’aiguille d’entrée près du bas du puits de la puce, juste à l’extérieur des électrodes d’enregistrement.
Placez ensuite l’aiguille de sortie près du haut du puits de copeaux, vers le bord, de sorte que le liquide monte presque jusqu’au bord du puits de copeaux, environ quatre millilitres. Réglez maintenant le débit de perfusion à cinq millilitres par minute et le débit de perfusion à sept millilitres par minute. Activez l’entrée et la sortie.
Retirez l’aiguille d’entrée du puits de la copeau jusqu’à ce qu’elle commence à sortir de la solution au lieu de l’air. Après cela, remettez l’aiguille à l’intérieur du puits de chips. Utilisez ensuite un réchauffeur de solution pour maintenir la solution à une température physiologique ou proche, environ 34 à 37 degrés Celsius.
Laissez le LCR perfuser sur le cerveau pendant 10 minutes. Une fois que 10 minutes se sont écoulées, déplacez le tube de sortie vers le bécher de jet. Déplacez ensuite le tube d’entrée dans le bécher contenant la solution pro-convulsivante.
Laisser le LCRa non convulsivant être évacué du système de perfusion dans le bécher pendant 10 minutes. Enfin, transférez le tube d’évacuation dans le bécher contenant la solution pro-convulsivante et laissez-le fonctionner jusqu’à la fin de l’expérience. Une puissante activité électrographique semblable à une crise a été fréquemment observée dans les régions néocorticales sous les paradigmes zéro magnésium et 4-aminopyridine.
Les régions de l’hippocampe présentaient une plus grande variabilité entre les tranches de cerveau, certaines présentant une activité semblable à une crise et d’autres montrant des décharges transitoires. L’activité néocorticale sous le paradigme du magnésium zéro a montré une puissance plus élevée dans plusieurs bandes de fréquences par rapport au paradigme de la 4-aminopyridine. L’activité hippocampique dans le paradigme du magnésium zéro a démontré une puissance plus élevée dans les bandes de fréquences gamma élevées par rapport au néocortex et aux deux régions du cerveau dans le paradigme de la 4-aminopyridine.
