Pour commencer, étiquetez deux tubes de 14 millilitres comme A et B, un tube à centrifuger de 15 millilitres comme C et un tube à centrifuger de 15 millilitres comme déchets. Après avoir centrifugé le sang entier, prélevez et ajoutez un millilitre de la couche leucocytaire préparée dans le tube A.Ajoutez 60 microlitres d’EDTA 0,1 molaire dans le tube A.Ensuite, faites tourbillonner le tube de perle magnétique pendant 30 secondes. Pour allumer l’instrument PBMC automatisé, mettez l’appareil sous tension à l’avant de l’instrument.
Sur l’écran d’accueil de l’instrument, sélectionnez le profil et choisissez le protocole souhaité. Entrez ensuite le volume de départ et répétez l’opération pour chaque échantillon. Sélectionnez tous les quadrants qui utiliseront le même kit de réactifs.
Ensuite, chargez les consommables étiquetés, les pointes de filtre et le conteneur tampon dans chaque quadrant du carrousel de l’instrument comme indiqué sur l’écran automatisé de l’instrument PBMC. Une fois le chargement terminé, retirez les couvercles des consommables et des réactifs et sélectionnez Exécuter sur l’écran de l’instrument. Une fois l’exécution terminée, sélectionnez décharger et retirer les échantillons du carrousel de l’instrument.
Transférez 500 microlitres de cellules dans un gobelet d’échantillon pour un comptage cellulaire sans dilution. En comparant la méthode automatisée basée sur des billes à la méthode manuelle, aucune différence significative n’a été identifiée dans la viabilité cellulaire ou le nombre total de cellules. La méthode manuelle a traité huit échantillons en 43 minutes, tandis que la méthode automatisée a pris 57 minutes, dont 35 minutes de traitement sans intervention.
La viabilité cellulaire moyenne était supérieure à 90 % pour les PBMC traités dans les cinq jours et supérieure à 75 % pour ceux traités dans les 10 jours. Les rendements moyens des PBMC ont diminué de 50 % après cinq jours par rapport aux échantillons traités dans les 24 heures.
