Dissociation rapide du tissu tumoral pour obtenir de meilleures informations sur les tumeurs unicellulaires

Pour commencer la digestion de la tumeur, versez l’échantillon dans une boîte de culture tissulaire de 60 millimètres placée sur de la glace. Pipetez 420 microlitres de milieu de la boîte vers un tube de microcentrifugation de 1,5 millilitre. À l’aide d’une pince à épiler, transférez le tissu de l’échantillon dans le tube contenant le support.

Découpez l’échantillon avec des ciseaux propres en morceaux de deux à trois millimètres de diamètre. Ajoutez des volumes appropriés d’enzymes de digestion et de milieux à l’échantillon. Vortex le tube pendant cinq secondes et incubez-le dans un mélangeur thermique positionné verticalement sur le côté.

Placez un filtre à cellules de 50 micromètres sur un nouveau tube conique de 15 millilitres. Et amorcez le filtre avec un millilitre de média RPMI frais. À l’aide d’une pointe de pipette large à faible tension de 1 000 microlitres, chargez l’échantillon dans le filtre et ajoutez le média.

Ensuite, à l’aide du dos d’un piston de seringue, broyez et poussez l’échantillon sur le filtre dans un mouvement de torsion. Lavez le filtre avec cinq millilitres de média et tout média restant de la boîte contenant l’échantillon.