Lyse des globules rouges dans des échantillons de tumeurs digérées pour le séquençage de l’ARN unicellulaire

Pour commencer, obtenez l’échantillon de tumeur filtré et digéré. Centrifugez l’échantillon à 450 G pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius. Aspirez le milieu sans déranger le granule et remettez le granule en suspension dans le tampon de lyse ACK pour éliminer les globules rouges et enregistrer le volume utilisé.

Répétez les étapes de centrifugation et de lyse jusqu’à ce que la pastille d’échantillon n’ait plus de couleur rouge visible après la centrifugation. Ensuite, mettez à nouveau en suspension la pastille d’échantillon dans un milieu frais. Mélangez 10 microlitres de trypan et de bleu et les cellules dissociées dans un tube de 1,5 millilitre.

Chargez 10 microlitres de chaque côté d’un hémocytomètre. pour compter les cellules. Enregistrez la concentration cellulaire.

Pourcentage total de viabilité du nombre de cellules vivantes et volume final des supports après comptage.