Pour commencer, disposez le matériel chirurgical stérile sur une plate-forme chirurgicale. Environ 72 heures après l’implantation de l’électrode électromyographique du muscle du diaphragme, ou EMG, pesez le rat. Avant d’anesthésier le rat, placez-le dans une cage de style Bowman.
Connectez soigneusement les fils, sortant du dos du rat à un préamplificateur pour enregistrer l’EMG bilatéral du muscle du diaphragme. Ensuite, placez le rat anesthésié en position couchée. Rasez les poils du cou à peu près au niveau de l’oreille et jusqu’aux omoplates.
Connectez les fils d’électrodes exposés du dos du rat à l’amplificateur. Désinfectez la peau en alternant trois fois avec du gluconate de chlorhexidine à 4 % et de l’alcool isopropylique. Couvrez le rat avec des couvertures chirurgicales stériles, à l’exception du dos supérieur.
À l’aide d’un scalpel, faites une incision rostrocaudale de quatre centimètres. Rétractez la peau et coupez le muscle acromiotrapèze. Ensuite, disséquez le muscle rhomboïde pour exposer les muscles rachidiens.
Sous un microscope chirurgical, retirez la colonne vertébrale de C1 à C3. Ensuite, utilisez rongeur pour effectuer soigneusement une laminectomie à C2 sans endommager les artères ou les nerfs majeurs. Coupez et retirez la dure-mère à C2. Tout en surveillant l’EMG du muscle du diaphragme, insérez le couteau de dissection d’angle juste en dessous du point où la racine dorsale entre dans la moelle épinière et sectionnez jusqu’au milieu de la surface ventrale. Enregistrez ensuite l’activité EMG du diaphragme ipsilatéral eupnéique sur le rat anesthésié avec une hémisection vertébrale C2 effectuée.
Suturez les muscles de la moelle épinière avec des sutures 3-0, puis fermez l’incision cutanée. Pour maintenir l’hydratation, injectez par voie sous-cutanée un millilitre de solution saline pour 50 grammes de masse animale. Placez le rat dans une cage propre avec un coussin chauffant pour la récupération.
Réglez le filtre passe-bande haute du préamplificateur sur 100 hertz et le filtre passe-bas sur 1000 hertz. Après avoir recueilli une à deux minutes d’enregistrement EMG eupnéique des hémidiaphragmes gauche et droit, enregistrez la date dans un format approprié pour des analyses plus approfondies. Un exemple réussi d’hémisection spinale C2 a montré l’absence d’activité EMG du diaphragme ipsilatéral eupnéique sous anesthésie le troisième jour après la blessure.
L’activité EMG du muscle du diaphragme dans des conditions d’éveil a montré une réduction du diaphragme ipsilatéral eupnéique par rapport à la ligne de base d’avant la blessure. L’activité EMG du muscle diaphragme controlatéral a augmenté dans des conditions d’anesthésie et d’éveil.
