Pour commencer, placez le couvercle de détection sur une plaque réceptrice vide de 96 puits et placez-la dans l’incubateur de culture cellulaire. Alignez et montez l’appareil sur le couvercle de détection et connectez-le au hub via le câble USB fourni, créant ainsi un sandwich Recypher. Rendez-vous maintenant sur le site Web de Lucid Lab et cliquez sur le bouton « nouvelle expérience » dans le coin supérieur droit pour créer une nouvelle expérience.
Nommez le titre de l’expérience et saisissez les notes d’expérience pertinentes pour l’étude. Ensuite, créez de bonnes conditions dans les groupes de traitement. Par exemple, si vous testez les effets de différentes concentrations sériques dans les milieux sur le taux de consommation d’oxygène, sélectionnez sérum dans le nom de groupe Concentrations sériques intermédiaires à utiliser et ajoutez d’autres valeurs de pourcentage sérique en cliquant sur le bouton plus.
Attribuez ensuite les puits qui recevront un pourcentage sérique particulier et sélectionnez un motif de couleur pour ces puits. Cliquez sur le bouton Ajouter un groupe pour ajouter d’autres groupes si nécessaire. Ensuite, définissez la configuration de la plaque et sélectionnez l’appareil et le style de plaque correspondants.
Pour ce faire, cliquez sur le bouton Ajouter une plaque, choisissez l’appareil et sélectionnez le type de plaque. Sélectionnez le traitement et cliquez sur le puits correspondant. Maintenant, cliquez sur le bouton Démarrer maintenant pour démarrer l’expérience.
Vérifiez que le voyant sur le site Web et la diode électroluminescente sur le hub sont verts fixes. Laissez le système fonctionner pendant 15 à 60 minutes pour permettre de vérifier que chaque capteur est bien calibré et détecte l’oxygène atmosphérique. Ensuite, retirez l’appareil du couvercle de détection et placez-le à l’envers dans l’incubateur pour permettre au moteur de l’appareil de se réinitialiser.
Maintenant, remettez la plaque avec le couvercle de détection dans le capot de culture cellulaire, avec une plaque à 96 puits contenant les cultures RPE. Changez le milieu de la plaque avec les cultures EPR pour le même milieu et le même volume pour tous les puits afin d’obtenir des valeurs de base du taux de consommation d’oxygène pour chaque puits. Transférez ensuite le couvercle de détection sur la plaque contenant les cultures cellulaires et placez le couvercle standard sur la plaque contenant les cultures cellulaires jusqu’à la plaque réceptrice vide à 96 puits, afin de maintenir la stérilité du couvercle standard.
Remettez la plaque contenant les cultures cellulaires et le couvercle de détection dans l’incubateur de culture cellulaire. Alignez et montez l’appareil sur le couvercle de détection et connectez-le au hub via le câble USB fourni. Vérifiez que les indicateurs de l’interface du site Web et du hub sont tous verts fixes.
Laissez l’appareil mesurer les taux de consommation d’oxygène ou l’OCR sur chaque puits pendant au moins 12 à 24 heures pour capturer un OCR de base. Après l’expérience, plongez le couvercle de détection dans de l’éthanol à 70 % pendant 10 minutes dans une hotte de culture cellulaire pour le stériliser. Une fois que l’éthanol et l’eau se sont totalement évaporés, placez le couvercle de détection sur une nouvelle plaque réceptrice à 96 puits.
