Mesure des changements dans le métabolisme mitochondrial dans l’EPR hypoxique à l’aide du système Resipher

Pour commencer, assemblez le couvercle de détection avec la plaque de culture cellulaire dans le capot et transférez-les dans la chambre d’hypoxie. Installez le sandwich dans la chambre d’hypoxie. Après cela, placez une boîte de Pétri avec de l’eau stérile dans la chambre d’hypoxie pour aider à maintenir l’humidité.

Enfin, placez un capteur d’oxygène portable dans la chambre d’hypoxie. Ensuite, scellez la chambre d’hypoxie. Assurez-vous que le câble USB sort de la chambre d’hypoxie et que le trou d’où le câble sort est scellé avec du mastic ou de la graisse de silicone.

Connectez la chambre d’hypoxie à une bouteille de gaz avec une concentration hypoxique d’oxygène et une concentration standard de dioxyde de carbone dans une culture cellulaire. Échangez lentement l’air de la chambre d’hypoxie avec l’air de 1 % d’oxygène et de dioxyde de carbone 5 % de la bouteille jusqu’à ce que le capteur d’oxygène indique la concentration d’oxygène souhaitée, généralement entre 1 % et 10 %. Maintenant, fermez les vannes d’entrée et de sortie de la chambre d’hypoxie et transférez toute la chambre dans l’incubateur. Ensuite, configurez et démarrez l’expérience.

Les milieux équilibrés avec l’oxygène atmosphérique ont mis plus de temps à atteindre l’équilibre à des volumes plus élevés. La chambre d’hypoxie a montré une fuite lente, ce qui a fait que les niveaux d’oxygène se sont approchés de la concentration atmosphérique au bout de 30 heures. La solubilité à l’oxygène était identique entre les milieux frais et conditionnés, ce qui indique que les changements de composition du milieu au fil du temps n’ont pas affecté la solubilité de l’oxygène.