Pour commencer, appliquez un contour rectangulaire de vernis à ongles transparent sur la lame de verre. Préparez plusieurs de ces lames de transplantation. Pour monter l’animal anesthésié, utilisez une pipette Pasteur et une pompe pour le transférer de la RPT à l’agarose à bas point de fusion ou LMA.
Ensuite, transférez l’animal dans une petite goutte de LMA sur la lame à l’intérieur du contour du vernis à ongles. Avant que le LMA ne se solidifie, utilisez un poussoir d’embryons pour orienter l’animal verticalement, avec le site d’insertion de l’aiguille prévu à droite. Et laissez l’agarose prendre complètement pendant environ cinq minutes.
À l’aide d’un scalpel, coupez une tranche verticale droite à travers la goutte d’agarose juste à droite de l’animal monté. Essuyez l’agarose en vrac de la lame. À l’aide d’un scalpel, découpez des coins dans l’agarose pour exposer le site d’insertion de l’aiguille.
Appliquez le RPT sur la lame jusqu’à ce que les gouttes d’agarose soient complètement immergées. Et montez la lame préparée sur le microscope de transplantation. Abaissez l’objectif 40X jusqu’à ce qu’il brise la surface du support et relevez-le pour mettre l’accent sur l’animal donneur.
Ensuite, mettez l’accent sur les cellules donneuses d’intérêt marquées par fluorescence. Déplacez la platine vers la gauche en préparation de la localisation de l’aiguille de greffe.
