Pour commencer, insérez une micropipette dans l’extracteur de micropipette et tirez une aiguille de micro-injection. Alignez la pointe de l’aiguille avec les divisions du micromètre de la platine sous une lunette de dissection. Avec le micromètre comme guide de mesure, utilisez une paire de pinces aiguisées pour casser l’aiguille à une taille d’alésage légèrement supérieure au diamètre de la cellule.
À l’aide d’une seringue de 50 millilitres équipée d’une remplisseuse de pipette, remplissez complètement l’aiguille avec l’huile minérale. Sur l’appareil de transplantation, tournez le robinet d’arrêt à trois voies de manière à ce que son bras long fasse face à la pompe à microseringue. Appuyez sur le piston de la seringue du réservoir pour évacuer toutes les bulles d’air de la conduite hydraulique.
En maintenant une légère pression sur le piston, tournez le robinet d’arrêt à trois voies de sorte que le bras long fasse maintenant face à la seringue à réservoir. Insérez ensuite l’aiguille dans le support sans introduire de bulles d’air. Ajustez l’aiguille de manière à ce qu’elle soit orientée directement vers la gauche à un angle de 10 à 15 degrés par rapport à l’horizontale.
À l’aide des micromanipulateurs grossiers et fins, manœuvrez la pointe de l’aiguille sous l’objectif du microscope pour la mettre au point. Si le liquide s’écoule à l’intérieur ou à l’extérieur de la pointe de l’aiguille, ajustez la pression à l’aide du pousse-seringue jusqu’à ce qu’un ménisque stable entre l’huile et le RPT soit observé. S’il reste une bulle d’huile, déplacez l’aiguille vers la droite pour retirer son extrémité du RPT, puis revenez vers la gauche pour la repositionner.
Déplacez la platine vers la droite jusqu’à ce que l’animal donneur soit de nouveau visible. Recentrez et concentrez-vous sur les cellules à transplanter, en alignant l’aiguille avec les cellules situées juste à l’extérieur de l’animal. Ensuite, insérez l’aiguille dans l’animal donneur et, si nécessaire, restabilisez le ménisque d’huile dans la pointe de l’aiguille avec la pompe à microseringue.
Positionnez la pointe de l’aiguille contre les cellules d’intérêt et appliquez une aspiration douce avec la pompe à microseringue. Après avoir prélevé les cellules adéquates, retirez l’aiguille du donneur et restabilisez le matériel dans la pointe de l’aiguille. Repositionnez la platine pour amener le premier animal hôte en vue/centre et concentrez-vous sur la zone dans laquelle les cellules doivent être placées et alignez l’aiguille avec cette région juste à l’extérieur de l’animal.
Insérez ensuite l’aiguille dans l’animal hôte et restabilisez le ménisque d’huile dans la pointe de l’aiguille. Positionnez la pointe de l’aiguille dans le site de dépôt et appliquez une légère pression avec le tire-microseringue jusqu’à ce que le bon nombre de cellules donneuses soit libéré de l’aiguille. Enfin, retirez l’aiguille de l’hôte.
12 heures après la transplantation, un neurone donneur a été observé avec succès dans la région antérieure du noyau moteur vague de l’hôte, montrant des signes de protubérances de neurites saines. Deux jours après la transplantation, le neurone transplanté était non seulement correctement positionné, mais avait également commencé à étendre un nouvel axone vers le quatrième arc pharyngé, indiquant une intégration réussie au sein de l’hôte.
