Pour l’imagerie confocale, connectez d’abord un cathéter de 10 centimètres à une aiguille à insuline. À l’aide d’une seringue Hamilton munie d’une aiguille de calibre 29, préparez cinq microlitres de bêta-amyloïde fluorescente pour la perfusion dans le cathéter. Après avoir fixé la main de la souris, connectez le cathéter à l’aide d’une aiguille au cathéter chronique implanté.
Connectez le cathéter à un micro-injecteur et placez la souris dans une boîte individuelle. Réglez le taux d’injection à 0,1 microlitre par minute dans le menu des micro-injecteurs, et appuyez sur le bouton Démarrer pour injecter FA bêta dans le ventricule latéral droit. Après l’administration de FA bêta, effectuez la photobiomodulation, ou PBM, à l’aide d’une LED pendant 61 minutes en suivant l’algorithme.
Ensuite, injectez par voie intraveineuse tout traceur pour marquer les vaisseaux cérébraux via la queue. Après l’euthanasie, utilisez des ciseaux droits tranchants pour faire une petite incision transversale dans la peau le long de la trachée, en tenant la peau avec une pince à épiler droite non tranchante. Ensuite, avec des ciseaux droits, faites une incision longitudinale sur toute la longueur du cou.
À l’aide d’une pince à épiler incurvée, prenez les glandes salivaires et séparez-les soigneusement du tissu conjonctif. Placez un écarteur de plaie sur la partie ouverte de l’incision et fixez-le pour repousser les tissus environnants. Utilisez deux pinces à épiler incurvées des deux côtés du cou pour examiner la zone entre la trachée et le muscle cléido-mastoïdien.
Avec une pince à épiler droite aux extrémités émoussées, retirez le ganglion lymphatique cervical profond de chaque côté et coupez-le du tissu conjonctif. Enfin, placez les nœuds dans une boîte de Pétri avec une solution saline et couvrez-les d’un verre de couverture orienté horizontalement pour effectuer une microscopie confocale. Des doses légères de 30 joules par centimètre carré ont montré l’effet le plus significatif pour favoriser l’élimination lymphatique de l’AF bêta du cerveau de souris mâles adultes éveillées.
Le mode d’impulsion à 1050 nanomètres s’est avéré le plus efficace pour améliorer l’élimination de FA bêta par rapport aux autres longueurs d’onde et au mode continu à la même longueur d’onde. Un traitement transcrânien de 10 jours pendant le sommeil NREM a considérablement réduit les niveaux de FA bêta soluble chez les souris âgées, les alignant sur les niveaux trouvés chez les souris adultes plus jeunes. Cet effet n’a pas été observé lorsque le traitement a été appliqué pendant l’éveil.
