Isolement de cellules épithéliales primaires de la surface de l’ovaire humain pour l’obtention d’organoïdes pour des études tissulaires in vitro

Pour commencer, transportez les ovaires humains au laboratoire dans du chlorure de sodium à 0,9 % ou une solution saline stérile similaire sur de la glace. Rincer les ovaires avec une solution saline fraîche et froide dans une boîte de Pétri. Transférez chaque ovaire dans un tube conique de 50 millilitres et ajoutez deux à trois millilitres de milieu de digestion pour couvrir l’ovaire.

Placez le tube dans un bain de billes, tempéré à 37 degrés Celsius pendant 30 minutes. Transférez ensuite soigneusement l’ovaire dans une boîte de Pétri de 60 millimètres contenant 10 millilitres de milieu de collecte. À l’aide d’un grattoir cellulaire, grattez doucement la surface de l’ovaire contenant les cellules épithéliales de la surface de l’ovaire humain.

Lavez le grattoir dans le milieu avant de gratter au moins deux fois de plus. Transférez les cellules épithéliales de la surface de l’ovaire humain dans le milieu de collecte dans un tube de 15 millilitres. Faites tourner les cellules à 240G pendant cinq minutes.

Si la pastille présente une couleur rouge indiquant une contamination par des globules rouges, remettez la pastille en suspension dans un millilitre de tampon de lyse des globules rouges. Ensuite, ajoutez quatre millilitres de PBS avec du calcium et du magnésium, et centrifugez à 240G pendant cinq minutes. Cryo-préserver la pastille de cellules épithéliales de surface de l’ovaire humain pour une utilisation future en culture.