Fibrinogen-PAGE pour l’analyse de l’agent fibrinogénolytique dans l’homogénat de ver d’arachide

Pour commencer, préparez un gel pour phage de fibrinogène et placez-le dans le réservoir d’électrophorèse avec le moule à colle. Versez 1 300 millilitres de solution d’électrophorèse dans le réservoir et retirez le peigne du gel. Mélangez 5 microlitres de tampon de charge 5x non dénaturant avec 20 microlitres chacun d’enzyme fibrinogénolytique et d’homogénat de ver d’arachide.

Chargez le mélange dans le gel préparé et lancez l’électrophorèse à 80 volts pendant 30 minutes ou à 120 volts pendant 20 minutes. Retirez le gel du moule à colle et transférez-le dans une boîte en plastique. Ajoutez Tris-HCL et Triton dans la boîte et incubez-le sur un agitateur à 60 à 70 tr/min pendant 10 minutes.

Retirez le tampon de lavage et incubez le gel avec 50 millilitres de Tris-HCL 0,05 molaire. Après avoir retiré le tampon, incubez le gel avec 50 millilitres de colorant, suivi d’une solution de décoloration à 60 à 70 tr/min pendant 30 minutes chacun. L’homogénat du ver d’arachide présentait des bandes correspondant à des poids moléculaires de 25, 33, 43 et 70 kilodaltons ou plus.