Pour commencer, fixez une grande pointe de pipette P200 coupée à une seringue de 10 millilitres et remplissez-la de PBS. À l’aide d’une pince, insérez l’extrémité de la seringue dans l’ouverture d’un segment intestinal isolé de la souris euthanasiée. Tenez le segment intestinal sur la seringue à l’aide de la pince et rincez doucement à un rythme d’environ 50 microlitres par seconde pour retirer le contenu.
Recueillez le contenu intestinal dans un bateau de pesée vide. Posez ensuite le segment intestinal humide en ligne droite sur une bande de papier filtre en cellulose étiqueté à sec. À l’aide de ciseaux de dissection, ouvrez l’intestin longitudinalement le long de la ligne mésentérique, environ cinq millimètres à la fois.
Utilisez le bord inférieur des ciseaux ou une paire de pinces pour poser le tissu coupé à plat sur le papier filtre. Placez maintenant un autre morceau de papier filtre sur le segment intestinal pour éviter qu’il ne s’enroule ou ne se déforme lors de la fixation. Pour fixer le mouchoir en place, agrafez les bords du papier filtre tout en évitant d’agrafer le mouchoir.
Immergez les tissus dans 10% de formol tamponné normal. Retirez délicatement le morceau supérieur de papier filtre qui touche le côté luminal de l’intestin. À l’aide d’une pince, décollez soigneusement l’intestin du morceau inférieur de papier filtre avant de le jeter.
Ensuite, lavez le tissu dans du PBS trois fois pour éliminer le formol du tissu. À l’aide d’une pince à action inverse, prélevez un morceau d’intestin le long du bord court avec le côté luminal vers le haut et tournez la pince pour rouler le tissu. Placez le tissu dans un bateau de pesée sec.
Tenez le tissu en place avec une pince dans une main. Ouvrez soigneusement la pince à action inverse et relâchez le tissu, en utilisant l’autre pince pour déloger le tissu de la pince à action inverse. Insérez une goupille de dissection de taille 00 dans le tissu.
Utilisez des pinces coupantes pour retirer la pointe pointue de la goupille. Une fois que tous les échantillons ont été roulés, placez les quatre rouleaux de tissu dans la même cassette et insérez la cassette dans un processeur de tissu. À une station d’enrobage, placez une petite quantité de paraffine dans un moule.
Retirez les quatre rouleaux suisses de la cassette et placez-les dans un moule individuel, en les posant aussi à plat que possible. Ajoutez plus de paraffine pour remplir le moule. Déplacez le moule sur la plaque froide et assurez-vous que tous les rouleaux suisses sont à plat au fond du moule.
Placez un petit couvercle de cassette étiqueté sur le moule. Une fois la cire solidifiée, retirez le bloc du moule.
