Pour commencer, prélevez des neurones cultivés dans des flacons T25 pour la co-culture. Remplacez le milieu par cinq millilitres de solution de versène contenant de la trypsine et de la Dnase I.Ajoutez 0,5 millilitre de sérum fœtal bovin pour neutraliser la trypsine et la Dnase I.Transférez les cellules dans un tube conique de 15 millilitres. Lavez une fois le flacon avec cinq millilitres de milieu neurobasal complet pour maximiser le nombre de neurones collectés.
Ensuite, centrifugez la suspension cellulaire à 300 G pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius. Après avoir éliminé le surnageant, remettez doucement en suspension la pastille cellulaire dans deux à trois millilitres de milieu neurobasal complet. Semez 100 microlitres de suspension cellulaire dans chaque puits pour obtenir 75 000 neurones par puits, entre huit et 10 jours de culture mixte de cellules gliales.
À l’aide d’une pipette de 10 millilitres, lavez délicatement les flacons T75 avec un milieu de culture gliale pour recueillir la microglie et transférez les cellules et le milieu dans un tube conique stérile de 50 millilitres. Centrifugez la collection de cellules à 300 G pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius. Une fois le surnageant retiré, remettez doucement la pastille en suspension dans deux millilitres de milieu neurobasal complet.
De la plaque de culture neuronale à 96 puits, prélevez 100 microlitres de milieu neurobasal et ajoutez 100 microlitres de 250 000 cellules par millilitre de suspension cellulaire. En co-culture, des microglies rondes et grandes ont été observées au-dessus ou entre les neurones et les processus neuritiques.
