Coloration au bleu d’aniline pour visualiser les plasmodesmes dans les feuilles de plantes agroinfiltrées à l’aide de la microscopie confocale

Pour commencer, obtenez des feuilles de Nicotiana benthamiana infiltrées avec les cellules d’agrobacterium tumefacien hébergeant les vecteurs souhaités. Pour visualiser les plasmodesmes, ajoutez une aliquote de 200 microlitres de bleu d’aniline à 1 % sur une lame de microscope. Ensuite, à l’aide d’une lame, excisez la zone foliaire infiltrée loin de la veine et transférez-la dans la solution de bleu d’aniline sur la lame avec le côté abaxial vers le haut.

Assurez-vous que l’échantillon de tissu foliaire est complètement immergé avant de le recouvrir d’un verre de protection. Placez la lame avec l’échantillon dans un dessiccateur fixé à une pompe à vide. Évacuer pendant deux minutes à moins de 0,8 pascal.

Ensuite, relâchez lentement la pression et incubez la lame dans l’obscurité pendant 30 minutes à température ambiante. Maintenant, visualisez le signal fluorescent du bleu d’aniline sous un microscope confocal à balayage laser.