Pour commencer, téléchargez les programmes d’impulsions RMN dans le répertoire de l’ordinateur qui utilise le spectromètre RMN et ajustez la version TopSpin. Téléchargez les impulsions en forme de RMN dans le répertoire et vérifiez que la version TopSpin est mise à jour en conséquence. Après avoir déterminé les largeurs spectrales et les temps d’acquisition appropriés, tapez edc dans le logiciel TopSpin dans un nouveau répertoire pour copier l’expérience HSQC.
Pour ouvrir les paramètres de séquence d’impulsions de type ased, cliquez sur les trois points à côté du paramètre PULPROG pour changer le programme d’impulsions en expérience d’azote-15 R1 rho. Double-cliquez sur le programme d’impulsions, cliquez sur Définir PULPROG sur l’ensemble de données et confirmez avec OK. Tapez ased pour ouvrir les paramètres de séquence d’impulsions. Entrez toutes les intensités et longueurs de gradient manquantes telles qu’elles sont indiquées dans la séquence d’impulsions.
Ensuite, entrez pour le compteur de boucle L3 la moitié de l’entrée TD d’azote 15 dans la fenêtre des paramètres d’acquisition. Entrez pour le compteur de boucles L6 le nombre de points de données de relaxation enregistrés pour l’ajustement de la courbe de relaxation. Réglez le TanhTan_half adiabatique.
nl pulse comme la forme de l’impulsion d’azote-15 SP8. Réglez ensuite le TanhTan_half2nd adiabatique. nl pulse comme la forme de l’impulsion d’azote-15 SP9.
Assurez-vous que les longueurs d’impulsion sont suffisamment longues pour l’adiabaticité avec P8 réglé sur 3 000 microsecondes. Réglez ensuite le délai de récupération entre les balayages, D1, sur au moins deux secondes ou plus. Réglez le nombre de balayages factices sur au moins 64.
Comme point de départ, fixez le nombre de balayages à quatre et utilisez des multiples de quatre si le rapport signal/bruit est trop faible. Réglez l’O1 sur la fréquence porteuse étalonnée, l’O2P sur 176 parties par million, et copiez l’O3P de l’expérience HSQC proton-azote-15. Maintenant, réglez la longueur d’impulsion P7 sur la longueur d’impulsion de 90 degrés calibrée précédemment.
Copiez ensuite le niveau de puissance d’impulsion de l’impulsion à 90 degrés sur PLW3 et PLW7. Ensuite, réglez les longueurs d’impulsion P1 et P19 sur la longueur d’impulsion de proton de 90 degrés. Définissez le nombre d’incréments dans la dimension indirecte, TD est égal à L3 par deux par L6. Ensuite, réglez l’impulsion en forme SP5 sur une forme I-BURP2 et la durée d’impulsion P15 sur 2 000 microsecondes.
Ouvrez ensuite l’affichage de l’outil Forme en cliquant sur le E à côté de l’impulsion en forme d’I-BURP2 dans la fenêtre de paramètre de séquence d’impulsions TopSpin. Pour simuler l’impulsion façonnée, cliquez sur le bouton Démarrer la simulation RMN. Vérifiez la longueur d’impulsion en forme et l’angle de rotation dans la fenêtre de simulation et cliquez sur Démarrer la carte SIM RMN pour continuer.
Vérifiez la plage d’excitation dans la simulation et sélectionnez la longueur d’impulsion I-BURP2 appropriée pour couvrir la dispersion spectrale des protons tout en évitant l’excitation de l’eau. Réglez P15 sur la longueur d’impulsion façonnée à partir de la fenêtre de simulation avec la meilleure impulsion I-BURP2. Maintenant, réglez SPOFFS5 pour ajuster la fréquence porteuse de l’impulsion I-BURP2, en décalant la plage d’excitation vers la gauche ou la droite pour éviter les perturbations de l’aimantation de l’eau.
Ouvrez ensuite l’outil Forme Bruker et cliquez sur Démarrer la simulation RMN pour déterminer le niveau de puissance approprié de l’impulsion façonnée. Réglez la longueur d’impulsion I-BURP2 sur la longueur d’impulsion façonnée et notez la longueur d’impulsion de proton rectangulaire molle de 90 degrés affichée dans la fenêtre de simulation. Tapez calcpowlev pour calculer la différence de niveau de puissance en décibels entre l’impulsion de protons dure de 90 degrés et l’impulsion de protons rectangulaire molle de 90 degrés.
Copiez le niveau de puissance de l’impulsion de proton dure de 90 degrés sur SPW5 et ajustez en ajoutant la différence mémorisée en décibels. Pour déterminer le niveau de puissance du verrou de spin, calculez la longueur d’impulsion d’azote 15 correspondante à 90 degrés. Utilisez calcpowlev pour calculer la différence de puissance en décibels entre la puissance de verrouillage de spin et l’impulsion dure d’azote 15 à 90 degrés.
Copiez le niveau de puissance de l’impulsion dure d’azote-15 à 90 degrés sur PLW7 et ajustez le niveau de puissance de verrouillage par rotation PLW8 en ajoutant la différence de puissance calculée. Copiez le niveau de puissance du verrou rotatif PLW8 dans les niveaux de puissance SPW8 et SPW9. Pour déterminer le niveau de puissance du découplage de l’azote 15, utilisez calcpowlev pour calculer la différence de puissance entre la puissance de l’impulsion de découplage de l’azote 15 à 90 degrés et l’impulsion dure de l’azote 15 à 90 degrés.
Copiez le niveau de puissance de l’impulsion dure à l’azote 15 à 90 degrés PLW7 sur le niveau de puissance de découplage PLW31 et ajustez en ajoutant la différence de puissance calculée en décibels. Pour la compensation de température, inclure la ligne define TEMP_ dans le programme d’impulsions. Réglez P18 sur la durée maximale du spin-lock utilisé dans l’expérience rho de l’azote 15 R1.
Dans le cas de l’azote 15, les échantillons marqués au carbone 13 incluent la ligne définie LABEL_CN dans le programme d’impulsions. Réglez P4 sur la longueur d’impulsion calculée. Utilisez calcpowlev pour calculer la différence de puissance en décibels entre P4 et l’impulsion dure au carbone 13.
Copiez le niveau de puissance de l’impulsion dure au carbone 13 sur PLW4 et ajoutez la différence de puissance calculée en décibels. Copiez PLW4 dans PLW2. Pour déterminer les délais de relaxation appropriés pour l’échantillonnage, exécutez les huit premières désintégrations à induction libre, ou FID, et traitez-les.
Choisissez les entrées vplist où l’intensité maximale de l’expérience de retard le plus long diminue à au moins un sur e, mais pas inférieure à 25 % par rapport à l’expérience de retard le plus court. Tapez rga dans la ligne de commande pour déterminer le gain du récepteur. Lancez un test de l’expérience azote-15 R1 rho en tapant zg dans la ligne de commande.
Vérifiez que le signal d’eau est supprimé pour tous les retards. Vérifiez également l’incrément neuf, le deuxième incrément du schéma de détection en quadrature.
