Nous sommes redevables à Nancy R. Sturm, Département d&#39;immunologie, de microbiologie et de biologie moléculaire, David Geffen School of Medicine, Université de Californie à Los Angeles, pour la lecture critique du manuscrit. Le Conseil national de la recherche-CNPq, et la Fondation pour la recherche développement-FAPDF, le Brésil, a soutenu l&#39;étude. Nous remercions l&#39;aide technique de Alessandro O. Souza, Maria C. Guimaro, Ciro Cordeiro, Ana de Cassia Rosa, Alves Roseneide, et Rafael Andrade, de l&#39;Université de Brasilia, Brésil.

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Pas de conflits d&#39;intérêt déclarés.

En revanche pour les mammifères sensibles à la vie tout au long de T. infections cruzi, les poulets sont réfractaires à T. l&#39;infection cruzi. L&#39;avantage majeur du système de modèle de poulet est l&#39;élimination de l&#39;infection précoce dans le développement du système immunitaire embryonnaire. Ainsi, l&#39;ADN du parasite ne reste dans le corps du poulet est intégré à plusieurs loci. Utilisation de la quantité optimale de virulente T. cruzi trypomastigotes pour inoculer oeuf fertile est l&#39;étape cruciale vers l&#39;obtention de l&#39;intégration de l&#39;minicercles ADNk dans le génome d&#39;embryons de poulet. Le taux d&#39;éclosion des poussins en direct à partir d&#39;œufs inoculés avec 100 trypomastigotes est de quatre fois plus élevée que celle obtenue avec 500 parasites. Des précautions doivent être prises pour inoculer la suspension des parasites dans 10 uL de milieu de culture dans la chambre à air oeuf. Il devrait y avoir aucune fuite de blanc d&#39;oeuf. Dans des conditions optimales, l&#39;infection parasitaire intracellulaire a lieu wimince, quelques heures après la multiplication d&#39;incubation et le parasite à l&#39;intérieur des cellules hôtes les produits pendant une semaine, après quoi l&#39;infection est éliminée par l&#39;immunité innée. L&#39;intégration nécessite une infection ADNk vivre, et l&#39;inoculation de minicercles nues dans des œufs au début d&#39;embryon de poulet n&#39;entraîne pas l&#39;intégration. Les embryons ADNk-positifs et les contrôles doivent être logés dans des conditions contrôlées à 37,5 ° C et une humidité de 65%. Les poussins sont gardés dans des cages pour les deux semaines à 33 ° C température ambiante. Par la suite, les poulets sont élevés dans des cages sur des étagères suspendues séparés par des allées de 1,5 mètre de largeur dans une pièce à 22 ° C avec de l&#39;air filtré et la pression positive en vertu de l&#39;épuisement constant d&#39;assurer des conditions de protection des animaux. Les adultes sont nourris de poulet-chow et de boire l&#39;eau potable en cours d&#39;exécution pour atteindre pleine croissance et la maturité, ponte moins cinq mois d&#39;âge. Entretien des procédures d&#39;hygiène sont essentielles pour la reproductibilité des résultats lorsque l&#39;on travaille avec T. cruzi inoculédans des oeufs de poulet fertiles. Dans le modèle de système de poulet du T. infections cruzi sont éradiquées après le développement du système immunitaire dans la période précoce de la croissance de l&#39;embryon. En outre d&#39;être l&#39;infection libre, les poussins qui éclosent à partir de T. cruzi inoculé oeufs, en l&#39;absence d&#39;anticorps spécifiques, sont tolérants aux antigènes parasitaires. Le rejet des cellules cardiaques cibles par les lymphocytes cytotoxiques (unité de rejet minime, Figure 3) est vu dans les poulets ADNk-mutés montrant modifications du génotype et de dégradation de la surveillance immunologique 3. Les génotypiquement modifiés cellules T présenter rejet accéléré de tissus dans le corps auto. Le site de la lésion principale est le cœur, qui est une caractéristique de la maladie de Chagas. Le passage d&#39;une physiologique (la surveillance) à un état ​​physiopathologique est vu dans le poulet ADNk muté montrant clonage prolifération des lymphocytes cytotoxiques 3. Tson système modèle transkingdom montre un parasite induite, génétiquement axée maladie auto-immune (Figure 6), résultant de modifications du génome par le T. cruzi ADNk minicercle intégrations. Ces modifications ne sont pas considérés dans les poussins issus d&#39;œufs Lb-inoculées. Ce phénomène suggère que le traitement expérimental de la cardiomyopathie inflammatoire auto-immune dans ADNk mutées poulets peut exiger la suppression de drogue de progéniteurs de moelle osseuse de cellules T spécifiques de phénotype infiltrant le myocarde, et de la transplantation de moelle osseuse saine histocompatible pour prévenir le rejet de soi-tissu.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Taq Polymérase d&#39;ADN recombinant </td><td> Invitrogen </td><td> 11615-010 </td><td></td></tr><tr><td> ADN polymérase Taq Platinum </td><td> Invitrogen </td><td> 10966-030 </td><td></td></tr><tr><td> Au hasard du système amorces de marquage d&#39;ADN </td><td> Invitrogen </td><td> 18187-013 </td><td></td></tr><tr><td> Eco RI </td><td> Invitrogen </td><td> 15202-021 </td><td></td></tr><tr><td> Mbo I </td><td> Invitrogen </td><td> 15248-016 </td><td></td></tr><tr><td> Set dNTP, Solutions 100mm </td><td&gt; GE Healthcare </td><td> 28-4065-51 </td><td></td></tr><tr><td> Amersham Hybond - N + - Cat n. </td><td> GE Healthcare </td><td> RPN303B </td><td></td></tr><tr><td> PlasmidPrep Mini Spin kit </td><td> GE Healthcare </td><td> 28-9042-70 </td><td></td></tr><tr><td> Nsi I </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> R5884 1KU </td><td></td></tr><tr><td> L&#39;ADN, sel de sodium de poisson sperme </td><td> AMRESCO </td><td> 0644-10G </td><td></td></tr><tr><td> Souris anti-poulet Bu-1b </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8370-02 </td><td></td></tr><tr><td> Souris anti-CD45 de poulet </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8270-08 </td><td></td></tr><tr><td>Souris anti-poulet TCRγδ </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8230-08 </td><td></td></tr><tr><td> Souris anti-poulet CD8a </td><td> SouthernBiotech </td><td> 9220-02 </td><td></td></tr><tr><td> Souris anti-poulet monocytes / macrophages </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8420-02 </td><td></td></tr><tr><td> MyCycle Termocycler </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td> 580BR 5501 </td><td></td></tr></tbody></table>

parasite induced genetically driven autoimmune chagas heart disease in the chicken model

Les infections à Trypanosoma cruzi aiguës acquises dans l&#39;enfance et l&#39;enfance semblent asymptomatiques, mais environ un tiers des cas chroniques montrent la maladie de Chagas en place de trois décennies ou plus tard. L&#39;auto-immunité et de la persistance du parasite sont des théories concurrentes pour expliquer la pathogénie de la maladie de Chagas 1, 2. Pour les rôles distincts joués par la persistance du parasite et l&#39;auto-immunité dans la maladie de Chagas, nous inoculer le T. cruzi dans la chambre à air des œufs fécondés. Le système de poulet immunitaire mature est une barrière étanche biologique contre T. cruzi et l&#39;infection est éradiquée sur le développement de son système immunitaire d&#39;ici la fin de la première semaine de la croissance 3. Les poussins sont des parasites sans à l&#39;éclosion, mais ils conservent intégrée contre les parasites mitochondrial kinétoplaste ADN (ADNk) minicercle dans leur génome qui sont transférés à leur progéniture. Documentation de l&#39;intégration ADNk minicercle dans le génome du poulet a été obtenu par un TargETED Premier QUEUE-PCR, hybridations de type Southern, le clonage et le séquençage 3, 4. Le ADNk minicercle intégrations rupture cadres ouverts de lecture de la transcription et les facteurs du système immunitaire, de la phosphatase (GTPase), l&#39;adénylate cyclase et phosphorylases (PKC, NF-Kappa B activateur, PI-3K) associée à la physiologie cellulaire, la croissance et la différenciation des 3, 5 - 7, et les fonctions des gènes d&#39;autres. Myocardite sévère due à un rejet de fibres cardiaques cibles par les lymphocytes effecteurs cytotoxiques est vu dans les poulets ADNk mutés, montrant une cardiomyopathie inflammatoire similaire à celle observée dans la maladie de Chagas humaine. Notamment, l&#39;insuffisance cardiaque et de la faiblesse du muscle squelettique sont présents chez les poulets adultes avec une rupture de l&#39;ADNk gène de la dystrophine dans le chromosome 1 8. Similaires altérations genotipic sont associés à la destruction des tissus réalisés par des effecteurs CD45 +, CD8γδ + et CD8a lymphocytes. Ainsi, cette infection protozoaire peut induire génétiquement axée sur la maladie auto-immune.

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Parasite Induced Genetically Driven Autoimmune Chagas Heart Disease in the Chicken Model

L&#39;inoculation de<em&gt; Trypanosoma cruzi</em&gt; Dans les œufs fertiles avant d&#39;incubation rend le parasite ADNk minicercle intégration dans l&#39;embryon des cellules génome. Croisement révèle le transfert vertical des mutations à la descendance. Le ADNk s&#39;intègre dans les régions codantes à plusieurs chromosomes et les poulets meurent d&#39;une maladie cardiaque inflammatoire auto-immune.

Parasite induite génétiquement Driven maladies auto-immunes coeur de Chagas dans le modèle de poulet

The Trypanosoma cruzi acute infections acquired in infancy and childhood seem asymptomatic, but approximately one third of the chronically infected cases ...

parasite-induced-genetically-driven-autoimmune-chagas-heart-disease

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

13.7K vues.  University of Brasilia. L'inoculation de Trypanosoma cruzi Dans les œufs fertiles avant d'incubation rend le parasite ADNk minicercle intégration dans l'embryon des cellules génome. Croisement révèle le transfert vertical des mutations à la descendance. Le ADNk s'intègre dans les régions codantes à plusieurs chromosomes et les poulets meurent d'une maladie cardiaque inflammatoire auto-immune.