Soutenu en partie par des subventions de la National Institutes of Health (R01 et N01 NS37253 NS055167) et la National Multiple Sclerosis Society (RG 3288-A6).

1. Préparation CFA émulsionné Antigène <ol><li> Dissoudre Guinée porc MBP (préparée selon le procédé de Swanborg1 et stocké sous forme lyophilisée à 4 ° C) dans une solution tampon phosphate (PBS) à une concentration de 2 mg / ml. Si peptides synthétisés MBP (MBP 60-80, SHHAARTTHYGSLPQKSQR) 2 sont utilisés, préparer une solution de 2 mg / ml. Dresser une quantité appropriée de solution d&#39;antigène (0,1 ml par souris de se faire vacciner) dans une seringue en verre avec embout luer-lok. </li><li> Dessiner un volume de adjuvant complet de Freund H37Ra (0,1% en poids) (CFA, Difco Laboratories) égale à la solution d&#39;antigène dans une autre seringue en verre équipé avec embout luer-lok. </li><li> Connectez les deux seringues en verre avec un robinet à trois voies. Mélanger la solution MBP avec la CFA en poussant les pistons avant et en arrière. Gardez le mouvement jusqu&#39;à ce qu&#39;une émulsion se forme. </li><li> Pour tester si une émulsion se forme, appuyez sur la totalité du mélange dans une seringue. Déconnecter la seringue vide, retirez til le piston un peu en arrière et de décharger une goutte de l&#39;émulsion résiduelle dans un bécher d&#39;eau propre à température ambiante. Si la chute de émulsion reste intacte sur la surface de l&#39;eau, on forme une émulsion. Si la baisse émulsion se disperse, reconnecter les seringues et de continuer le mouvement de mélange. </li><li> Utilisez une seringue en plastique de 1 mL pour le processus de vaccination pour assurer la livraison d&#39;une dose précise de l&#39;antigène. À transférer l&#39;émulsion antigène à la seringue en plastique, retirer le piston et insérer la seringue en plastique vide dans l&#39;ouverture de robinet à trois voies, où la seringue a été déconnecté de verre précédente selon la 1,4. </li><li> Remplir la seringue en plastique à la jante en poussant le piston de la seringue en verre. Insérez le piston de la seringue en plastique en arrière et repousser émulsion en excès jusqu&#39;à atteindre la marque de 1,2 mL sur la seringue en plastique. Cette manœuvre assure qu&#39;aucune bulle d&#39;air est emprisonné à l&#39;intérieur de la seringue en plastique. </li><li> Retirez la seringue en plastique de la robinet à trois voies. Attach une aiguille de calibre 26 # à la seringue en plastique. Poussez le piston à la marque 1 mL de telle sorte que l&#39;émulsion remplit maintenant le volume de vide de l&#39;aiguille. </li></ol> 2. L&#39;immunisation des souris donneuses Remarque: Des souris femelles C57BL / 6 sont typiquement injectés avec l&#39;émulsion d&#39;antigène dans les quatre sites dans les flancs, en suivant les méthodes conçues à l&#39;origine par le groupe de McFarlin 3 à la National Institutes of Health. Pour un enquêteur expérimenté, une personne peut accomplir la tâche ensemble. Pour les débutants, l&#39;aide peut être sollicitée afin qu&#39;une personne détient la souris et l&#39;autre personne ne l&#39;injection. Sinon, la souris peut être anesthésié pour l&#39;injection. <ol><li> Maintenez la souris fermement par la peau du cou et de retenir la queue entre les doigts e 4 e et 5 telles que le thorax et l&#39;abdomen sont facilement accessibles. </li><li> Placez l&#39;aiguille de la seringue de 1 ml en plastique sur un site dans le thorax légèrement au-dessus de l&#39;aisselle droite (de la moutiliser) et d&#39;injecter 0,05 ml de l&#39;émulsion d&#39;antigène par voie sous cutanée. Un renflement peu de blanchâtre CFA peut être vu à travers la peau pâle. Répétez la même chose pour le site dans le thorax légèrement au-dessus de l&#39;aisselle gauche. </li><li> Relâchez la queue et prendre la main sur le pied droit (de la souris), tournez et maintenez-le entre le 4 e et 5 e doigts. Recherchez sur le site juste en dessous de l&#39;affaire nervure dans le flanc droit et d&#39;injecter 0,05 ml de l&#39;émulsion d&#39;antigène. </li><li> Relâchez le pied droit, tourner à la souris dans l&#39;autre sens et maintenez le pied gauche (de la souris) entre le 4 e et 5 e doigts. Recherchez sur le site juste en dessous de l&#39;affaire nervure dans le flanc gauche et injecter 0,05 ml de l&#39;émulsion d&#39;antigène. </li><li> Modification d&#39;une aiguille neuve après l&#39;injection de 10 souris, ou si l&#39;aiguille s&#39;émousse. </li></ol> 3. Isolement des cellules ganglionnaires de la culture tissulaire de 7 à 10 jours après la vaccination <ol><li> Sept à 10 jours après l&#39;immunisation, les souris sacrifieret enlever les ganglions lymphatiques drainant. La méthode préférée de l&#39;euthanasie est par inhalation de CO 2. Après le sacrifice, poser la souris sur le dos sur une planche à dissection avec les membres étirés et fixé à la carte avec des épingles. Les souris sont mouillées avec une pulvérisation d&#39;éthanol à 70%. </li><li> Coupez une fente dans la peau longitudinalement dans le milieu de l&#39;extrémité inférieure de l&#39;abdomen jusqu&#39;au menton avec des ciseaux stériles et des pinces. </li><li> Couper la peau de l&#39;abdomen de la zone de l&#39;aine vers le bas pour chaque jambe. Peler et cerner la peau, ce qui expose les ganglions inguinaux. </li><li> Couper la peau le long de la forelimbs (gauche et droite) afin que la peau peut être décollée et clouée au sol pour exposer les ganglions lymphatiques axillaires près des aisselles. </li><li> Avec deux paires de pinces qui travaillent ensemble, se détacher des tissus conjonctifs couvrant et autour des ganglions inguinaux. Lorsque les tissus conjonctifs sont effacés, placer une paire de pince sous le nœud lymphatique et se détache de l&#39;organisme. Placez leganglions lymphatiques dans un plat de 35 mm de Petri remplie de PBS stérile. </li><li> Retirez les tissus conjonctifs qui couvrent les deux ganglions lymphatiques axillaires en utilisant deux paires de pinces. Isoler les ganglions lymphatiques et les placer dans la boîte de Petri. Soyez très prudent pour ne pas casser les vaisseaux sanguins qui traversent la région comme des saignements de permettre d&#39;identifier les ganglions lymphatiques très difficile. </li><li> Après tous les ganglions lymphatiques sont collectées, déplacez la boîte de Petri à une hotte de biosécurité. Pause et taquiner les ganglions lymphatiques à part avec les deux paires de pinces, de rectification l&#39;un contre l&#39;autre. En variante, les ganglions lymphatiques peut être rompu en utilisant l&#39;extrémité plate du piston d&#39;une seringue en plastique 3 ml appui contre les ganglions lymphatiques sur le fond de la boîte de Petri. </li><li> Passez la suspension lymphatique taquiné noeud de cellules à travers une maille de nylon pour enlever les membranes et les débris. </li><li> Faire remonter la suspension de cellules du ganglion à 50 mL en utilisant PBS stérile. Centrifuger à 1000 tours par minute pendant 10 minutes. Reprendre le culot dans un milieu de culture. Faites une viable cell compte et ajuster la concentration de 4 x 10 6 cellules / ml. UseRPMI 1640 supplémenté avec 10% sérum de veau foetal, 2 mM de L-glutamine, 1 mM pyruvate de sodium MEM, 0,1 mM MEM non-acides aminés essentiels, 100 U / ml de pénicilline, 100 pg / mL de streptomycine, 10 mM de tampon Hepes et 5 x 10 -5 M de 2-ME. Préchauffer la culture avant la remise en suspension des cellules. </li><li> Culture des cellules dans des plaques de culture de 24 puits avec un volume de 2 ml par puits (concentration cellulaire finale 8 x 10 6 cellules / puits). Ajouter l&#39;antigène dans chaque puits à une concentration finale de 100 pg / mL. Placez la plaque de culture dans un incubateur à 37 ° C avec 5% de CO 2. Incuber les cellules pendant 5 jours. </li></ol> 4. La récolte de culture des cellules de ganglions lymphatiques 5 jours après le début des cultures <ol><li> Mélanger les cellules dans chaque puits par aspiration et refoulement avec une pipette Pasteur ou une pipette en verre de faible volume. Récolter les cellules à un tube de centrifugation de 50 ml. </li><li> Centrifuger les cellules à 1000 rpm pendant 10 minutes. Resussuspendre l&#39;culot cellulaire dans un petit volume de PBS. </li><li> Compter les cellules et ajuster la concentration de cellules viables à 2,5 x 10 8 cellules / ml avec du PBS stérile. Dessinez les cellules dans une seringue munie d&#39;une aiguille de calibre 26 #. </li><li> Placez une lampe chauffante sur la cage des souris receveuses pour aider dilater la veine de la queue. </li><li> Utilisation d&#39;un support de souris, étendre la queue de la souris à travers la fente dans le support. Tirez d&#39;étendre la queue. Localisez la veine. </li><li> Injecter 0,2 ml / souris de la suspension cellulaire, ce qui équivaut 5 x 10 7 cellules. </li></ol> 5. Défi antigénique des souris receveuses 20 Transfert Jours cellulaire et le développement post symptômes de la maladie <ol><li> Souris receveuses Défi ne montre aucun signe de maladie avec l&#39;antigène. Les procédures sont les mêmes que l&#39;article 2 sur les «Immunisation des souris donneuses&quot;. </li><li> Observer le développement de la maladie paralytique 7 à 10 jours après une stimulation antigénique. <ol><li> Maladie débute par une faiblesse dans la queue. La maladie est classée comme unelorsque la queue devient flasque. La maladie est classée comme 2 lorsque la souris est paralysé dans une patte arrière. La maladie est classée 3 lorsque les deux membres postérieurs sont paralysés et la souris entraîne deux membres postérieurs lors de l&#39;exploration de l&#39;avant. La maladie est classée 4 lorsque la souris perd l&#39;usage des deux pattes avant, laissant la souris totalement immobile. La maladie est classée 5 lorsque la souris est moribonde et le corps se recroqueville. La mort est marqué comme la 6e année la maladie 4. </li></ol></li><li> MBP-spécifique EAE induite chez des souris C57BL / 6 après ce protocole est monophasique. Les souris peuvent se remettre de la maladie, mais ne subissent pas de rechutes spontanées. </li></ol> 6. Les résultats représentatifs Souris qui ont reçu amorcée et dans les cellules du donneur in vitro-expansées ganglions lymphatiques n&#39;ont pas développé de symptômes de la maladie EAE, ce qui reflète leur résistance à induction de la maladie. Toutefois, une maladie grave au point après une stimulation antigénique (Tableau I), ce qui démontre la capacité de la stimulation antigéniqueà inverser le mécanisme de résistance. Deux caractéristiques particulières de la stimulation antigénique noter sont les doses d&#39;antigène et les cinétiques de défi pour provoquer la maladie. Très faible dose d&#39;antigène est nécessaire comme indiqué dans le tableau III. Étonnamment, les souris qui ont reçu les cellules du donneur un an plus tôt pourrait encore se développer une maladie grave en cas de contestation avec l&#39;antigène (Tableau IV). Ces deux observations suggèrent fortement l&#39;implication de la &quot;longue durée de vie&quot; des cellules T dans le maintien de la résistance EAE. Ce protocole est applicable à de nombreux souches de souris résistantes EAE 4. <img alt="Figure 1." src="/files/ftp_upload/3778/3778fig1.jpg" /> Diagramme Figure 1. De la conception expérimentale pour l&#39;induction de l&#39;EAE chez des souches de souris résistantes réputés. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> Clinique EAE après le transfert adoptif </td><td colspan="3"><strong&gt; clinique EAE après une stimulation antigénique </td></tr><tr><td> Souche </td><td> Antigène </td><td> incidence </td><td> Av.. année la maladie (Plage) </td><td> Av.. jour de début (Plage) </td><td> Incidence </td><td> Av.. année la maladie (Plage) </td><td> Av.. jour de début (Plage) </td></tr><tr><td> SJL </td><td> MBP </td><td> 21/21 </td><td> 4.0 (3-5) </td><td> 8.0 (6-10) </td><td> ND </td><td> ND </td><td> ND </td></tr><tr><td> C57BL / 6 </td><td> MBP </td><td> 0/10 </td><td> - </td><td> - </td><td> 7/7 </td><td> 3.85 (3-5) </td><td> 9.28 (9-10) </td></tr><tr><td> Balb / c </td><td> MBP </td><td> 0/7 </td><td> - </td><td> - </td><td> 5/5 </td><td> 3.2 (3-4) </td><td> 7.0 (7) </td></tr><tr><td> C3H/HeJ </td&gt; <td> MBP </td><td> 0/7 </td><td> - </td><td> - </td><td> 4/4 </td><td> 3.2 (3-4) </td><td> 8.0 (8) </td></tr><tr><td> C57BL / 6 </td><td> MBP 60-80 </td><td> 0/4 </td><td> - </td><td> - </td><td> 4/4 </td><td> 2.75 (2-4) </td><td> 10.2 (9-11) </td></tr></tbody></table> Le tableau I. Induction de MBP-médiation EAE chez C57BL / 6. Le transfert adoptif de l&#39;EAE amorcée et dans les cellules du donneur in vitro-expansées n&#39;a pas induit de C57BL / 6 souris. Stimulation antigénique cellule post transfert rendu les souris sensibles à l&#39;induction de la maladie. Av., En moyenne. ND, ne se fait pas. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> EAE clinique après une stimulation antigénique </td></tr><tr><td> Antigène amorçage </td><td> Défi antigène </td><td> Incidence </td><td> Av.. année la maladie (Plage)</td><td> Av.. jour de début (Plage) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> CFA seul </td><td> 0/3 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> OVA-CFA </td><td> 0/3 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> MBP-CFA </td><td> 3/3 </td><td> 4.0 (4.0) </td><td> 7.7 (7-9) </td></tr></tbody></table> Tableau II. La spécificité de stimulation antigénique. Souris receveuses ont été contestées avec l&#39;antigène d&#39;amorçage ainsi que d&#39;autres antigènes non pertinents. Seul l&#39;antigène d&#39;amorçage induit une maladie grave. OVA: l&#39;ovalbumine de poulet. Av., En moyenne. <table border="1"><tbody&gt; <tr><td></td><td></td><td colspan="3"> EAE clinique après une stimulation antigénique </td></tr><tr><td> Doses d&#39;antigène Défi (pg / souris) </td><td> Incidence </td><td> Av.. année la maladie (Plage) </td><td> Av.. jour de début (Plage) </td></tr><tr><td> 200 </td><td> 4/4 </td><td> 3.75 (3-4) </td><td> 8.25 (7-9) </td></tr><tr><td> 100 </td><td> 4/4 </td><td> 3.67 (3-4) </td><td> 7.5 (7-8) </td></tr><tr><td> 50 </td><td> 4/4 </td><td> 3.25 (3-4) </td><td> 8.25 (7-10) </td></tr><tr><td> 25 </td><td> 4/4 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 8.25 (8-9) </td></tr><tr><td> 10 </td><td> 4/4 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 8.76 (8-9) </td></tr><tr><td> 5 </td><td> 4/4 </td><td> 2.5 (2-3) </td><td> 9.75 (9-10) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 2/4 </td><td> 1.0 (1.0) </td><td&gt; 16 (14-18) </td></tr><tr><td> 0 </td><td> 0/4 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tableau III. Doses d&#39;antigène nécessaire pour l&#39;induction du Défi de la maladie. Différentes concentrations de MBP utilisés pour contester les souris receveuses ont été testés. Av., En moyenne. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> EAE clinique après une stimulation antigénique </td></tr><tr><td> Défi antigène </td><td> Journée du Challenge </td><td> Incidence </td><td> Av.. De qualité des maladies (Plage) </td><td> Av.. Journée de l&#39;apparition (Plage) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 5 </td><td> 3/4 </td><td> 1.33 (1-2) </td><td> 9.67 (9-10) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 10 </td&gt; <td> 4/4 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 8.25 (7-9) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 15 </td><td> 4/4 </td><td> 3.75 (3-4) </td><td> 7.25 (7-8) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 25 </td><td> 4/4 </td><td> 4.0 (4.0) </td><td> 8.0 (7-9) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 35 </td><td> 4/4 </td><td> 3.5 (3-4) </td><td> 7.5 (7-8) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 60 </td><td> 4/4 </td><td> 3.75 (3-4) </td><td> 9.0 (8-10) </td></tr><tr><td colspan="5"> -------------------------- </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 343 </td><td> 3/3 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 10.33 (10-11) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 445 </td><td> 3/3 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 7.0 (7.0) </td></tr></tbody></table> Tableau IV. Cinétique de stimulation antigénique. Souris receveuses ont été contestées au point de poste à temps différents adoptertransfert de cellules ive. Av., En moyenne.

<ol>
	<li>Swanborg, R. H., Sabato, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+allergic+encephalomyelitis.">Experimental allergic encephalomyelitis.</a> Methods in Enzymology. 162, 413-421 (1988).</li><li>Shaw, M. K., Kim, C., Hao, H. W., Chen, F., Tse, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+myelin+basic+protein-specific+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+C57BL/6+mice:+Mapping+of+T+cell+epitopes+and+T+cell+Vb+gene+segment+usage.">Induction of myelin basic protein-specific experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice: Mapping of T cell epitopes and T cell Vb gene segment usage.</a> J. Neuroscience Research. 45, 690-699 (1996).</li><li>McCarron, R., McFarlin, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adoptively+transferred+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+SJL/J,+PL/J,+and+(SJL/J+x+PL/J)F1+mice.+Influence+of+I-A+haplotypes+on+encephalitogenic+epitope+of+myelin+basic+protein.">Adoptively transferred experimental autoimmune encephalomyelitis in SJL/J, PL/J, and (SJL/J x PL/J)F1 mice. Influence of I-A haplotypes on encephalitogenic epitope of myelin basic protein.</a> J. Immunol. 141, 1143-1149 (1988).</li><li>Shaw, M. K., Kim, C., Ho, K. -. L., Lisak, R. P., Tse, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combination+of+adoptive+transfer+and+antigenic+challenge+induces+consistent+murine+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+C57BL/6+mice+and+other+reputed+resistant+strains.">A combination of adoptive transfer and antigenic challenge induces consistent murine experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice and other reputed resistant strains.</a> J. Neuroimmunol. 39, 139-150 (1993).</li><li>Krishnamoorthy, G., Saxena, A., Mars, L. T., Domingues, H. S., Mentele, R., Ben-Nun, A., Lassmann, H., Dornmair, K., Kurschus, F. C., Liblau, R. S., Wekerle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelin-specific+T+cells+also+recognize+neuronal+autoantigen+in+a+transgenic+mouse+model+of+multiple+sclerosis.">Myelin-specific T cells also recognize neuronal autoantigen in a transgenic mouse model of multiple sclerosis.</a> Nat. Med. 15, 626-632 (2009).</li><li>Anderson, A. C., Reddy, J., Nazareno, R., Sobel, R. A., Nicholson, L. B., Kuchroo, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-10+plays+an+important+role+in+the+homeostatic+regulation+of+the+autoreactive+reperteroire+in+na&#239;ve+mice.">IL-10 plays an important role in the homeostatic regulation of the autoreactive reperteroire in na&#239;ve mice.</a> J. Immunol. 173, 828-834 (2004).</li><li>Anderton, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treg+and+T-effector+cells+in+autoimmune+CNS+inflammation:+a+delicate+balance+easily+disturbed.">Treg and T-effector cells in autoimmune CNS inflammation: a delicate balance easily disturbed.</a> Eur. J. Immunol. 40, 332-334 (2010).</li><li>Arnon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+allergic+encephalomyelitis+-+susceptibility+and+suppression.">Experimental allergic encephalomyelitis - susceptibility and suppression.</a> Immunol. Rev. 55, 5 (1981).</li><li>Billiau, A., Heremans, H., Vandekerckhove, F., Dijkmans, R., Sobis, H., Meulepas, E., Carton, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+experimental+allergic+encephalomyelitis+in+mice+by+antibodies+against+IFN-g.">Enhancement of experimental allergic encephalomyelitis in mice by antibodies against IFN-g.</a> J. Immunol. 140, 1506-1510 (1988).</li><li>Arbomson-Leeman, S., Alexander, J., Bronson, R., Corroll, J., Southwood, S., Dorf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+autoimmune+encephalomyelitis-resistant+mice+have+highly+encephalitogenic+myelin+basic+protein+(MBP)-specific+T+cell+clones+that+recognize+a+MBP+peptide+with+high+affinity+for+MHC+class+II.">Experimental autoimmune encephalomyelitis-resistant mice have highly encephalitogenic myelin basic protein (MBP)-specific T cell clones that recognize a MBP peptide with high affinity for MHC class II.</a> J. Immunol. 154, 388-398 (1995).</li><li>Reddy, J., Illes, Z., Zhang, X., Encinas, J., Nicholson, L., Sobel, R. A., Wucherpfennig, K. W., Kuchroo, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelin+proteolipid+protein-specific+CD4+CD25++regulatory+cells+mediate+genetic+resistance+to+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">Myelin proteolipid protein-specific CD4+CD25+ regulatory cells mediate genetic resistance to experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 15434-15439 (2004).</li><li>Korn, T., Reddy, J., Gao, W., Bettelli, E., Awasthi, A., Petersen, T. R., Backstrom, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelin-+specific+regulatory+T+cells+accumulate+in+the+CNS+but+fail+to+control+autoimmune+inflammation.">Myelin- specific regulatory T cells accumulate in the CNS but fail to control autoimmune inflammation.</a> Nature Med. 13, 423-431 (2007).</li><li>Shaw, M. K., Li, J., Ho, P. P., Hao, H., Lisak, R. P., Tse, H. Y., Broglie, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+myelin+basic+protein-specific+adoptive+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+C57BL/6+mice.+Longevity+of+donor+T+cells+and+lack+of+disease+relapses.">Induction of myelin basic protein-specific adoptive experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice. Longevity of donor T cells and lack of disease relapses.</a> Neuroimmunology Research Focus. , 175-191 (2007).</li></ol>

Pas de déclarations de situation financière.

Les études de l&#39;EAE chez la souris utilisent souvent les neuroantigènes, des protéines de myéline de base (MBP), protéine protéolipidique (PLP) ou la protéine de myéline oligodendrocyte (MOG). Des études antérieures surtout utilisé MBP. PLP stimule des réponses fortes et cohérentes à partir de souris SJL. Plus récemment, MOG est la neuroantigen couramment utilisé, car les souris B6 sont sensibles à l&#39;induction de la maladie avec cet antigène. Beaucoup de souches de gènes de souris les cibles s...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Guinée porc de la moelle épinière </td><td> Rockland Immuno-chimiques, Inc Gilbertsville, PA 19525 <a href="http://www.rockland-inc.com" target="_blank">www.rockland-inc.com</a> </td><td> GP-T065 </td><td> congelés </td></tr><tr><td> Adjuvant de Freund, complet H37Ra </td><td> Difco Laboratories Detroit, MI </td><td> 231131 </td><td></td></tr><tr><td> Multifit échange-mesure seringue </td><td> BD <a href="http://www.bd.com/us" target="_blank">www.bd.com / nous</a> </td><td> 512133 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> MediatechInc Manassas, VA <a href="http://www.cellgro.com" target="_blank">www.cellgro.com</a> </td><td> 10-040-CM </td><td></td></tr><tr><td> OVA </td><td> Sigma-Aldrich <a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank">www.sigmaaldrich.com</a> </td><td> A5503 </td><td></td></tr><tr><td> Souris </td><td> Jackson Laboratory Bar Harbor, Maine </td><td> Souris B6: 0000664 </td><td></td></tr></tbody></table>

overcoming unresponsiveness in experimental autoimmune encephalomyelitis (eae) resistant mouse strains by adoptive transfer and antigenic challenge

Auto-immune expérimentale (EAE) est une maladie inflammatoire du système nerveux central (SNC) et a été utilisé comme modèle animal pour l&#39;étude de la maladie démyélinisante humaine, la sclérose en plaques (MS). EAE est caractérisée par une infiltration pathologique de cellules mononucléaires dans le SNC et par la manifestation clinique de la maladie paralytique. Similaire à MS, EAE est également sous contrôle génétique en ce que certaines souches de souris sont sensibles à induction de la maladie tandis que d&#39;autres sont résistantes. En règle générale, C57BL / 6 (H-2 b) les souris immunisées avec la protéine basique de la myéline (MBP) ne parviennent pas à développer des signes de paralysie. Cette absence de réaction n&#39;est certainement pas due à des défauts de traitement de l&#39;antigène ou la présentation des antigènes de la MBP, comme un protocole expérimental décrit ici a été utilisé pour induire l&#39;EAE sévère souris C57BL / 6 ainsi que d&#39;autres souches de souris résistantes réputés. En outre, des clones de lymphocytes T encéphalitogènes de C57BL / 6 et souris Balb / c réactives à la MBP avait été le succèsentièrement isolée et propagée. Le protocole expérimental consiste à utiliser un système de transfert cellulaire adoptive dans laquelle MBP-apprêté (200 pg / souris) C57BL / 6 cellules du donneur de ganglions lymphatiques sont isolées et cultivées pendant cinq jours avec l&#39;antigène d&#39;élargir le pool de cellules T spécifiques de MBP-. À la fin de la période de culture, 50 millions de cellules viables sont transférés dans naïfs syngéniques bénéficiaires à travers la veine de la queue. Souris receveuses ainsi traités ne développent pas normalement EAE, réaffirmant ainsi leur statut résistant, et ils peuvent rester indéfiniment normale. Dix jours de transfert cellulaire post, les souris receveuses sont mis au défi avec adjuvant complet de Freund (CFA)-émulsionnée MBP dans quatre sites dans les flancs. EAE sévère commence à se développer chez ces souris de dix à quatorze jours après la provocation. Les résultats ont montré que l&#39;induction de la maladie était spécifique antigénique comme un défi avec des antigènes non pertinents n&#39;a pas induit de signes cliniques de la maladie. De manière significative, un titrage de la dose d&#39;antigène utilisé pourcontester les souris receveuses ont montré qu&#39;il pourrait être aussi bas que 5 ug / souris. En outre, une étude cinétique de la date de stimulation antigénique a montré que défi pour provoquer la maladie a été efficace dès le 5 défi jours après antigénique et aussi longtemps que plus de 445 jours antigénique défi poste. Ces données démontrent clairement le point à l&#39;implication d&#39;un &quot;longue durée de vie&quot; population de cellules T dans le maintien de non-réponse. L&#39;implication des cellules T régulatrices (Treg) dans ce système n&#39;est pas défini.

Watch this Scientific Journal Video about Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge at JoVE.com

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Certaines souches de souris sont capables de résister à l&#39;induction de l&#39;encéphalomyélite allergique expérimentale (EAE) de myéline de base des protéines. Décrit ici est un protocole de vaccination simple qui renverse l&#39;insensibilité et induit la maladie paralytique dans plusieurs types de souris EAE taches résistantes.

Surmonter Absence de réaction dans encéphalomyélite allergique expérimentale (EAE) souches de souris résistantes par transfert adoptif et une stimulation antigénique

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

overcoming-unresponsiveness-experimental-autoimmune-encephalomyelitis

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

20.2K vues.  St. John-Providence Health System. Certaines souches de souris sont capables de résister à l'induction de l'encéphalomyélite allergique expérimentale (EAE) de myéline de base des protéines. Décrit ici est un protocole de vaccination simple qui renverse l'insensibilité et induit la maladie paralytique dans plusieurs types de souris EAE taches résistantes.

Vidéo: Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into mouse tail veins and colonize in the lungs, thereby, resembling the last steps of tumor cell spontaneous metastasis: survival in the circulation, extravasation and colonization in the distal organs. From a therapeutic point of view, the experimental metastasis model is the simplest and ideal model since the target of therapies is often the end point of metastasis: established metastatic tumor in the distal organ. In this model, tumor cells are injected i.v into mouse tail veins and allowed to colonize and grow in the lungs. Tumor-specific CTLs are then injected i.v into the metastases-bearing mouse. The number and size of the lung metastases can be controlled by the number of tumor cells to be injected and the time of tumor growth. Therefore, various stages of metastasis, from minimal metastasis to extensive metastasis, can be modeled. Lung metastases are analyzed by inflation with ink, thus allowing easier visual observation and quantification.

An experimental lung metastasis and CTL immunotherapy mouse model for analysis of tumor cells-T cell interaction in vivo.

Métastases expérimentales et CTL Modèle adoptifs souris Transfert immunothérapie

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

Recherche

Immunologie et infection

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse models allow us to study how diseases unfold, often providing a good replica of the same processes occurring in humans. For some autoimmune diseases, like type 1A diabetes, there are models (the NOD mouse) that spontaneously develop a disease similar to the human counterpart. For many other autoimmune diseases, however, the model needs to be induced experimentally. A common approach in this regard is to inject the mouse with a dominant antigen derived from the organ being studied. For example, investigators interested in autoimmune thyroiditis inject mice with thyroglobulin2, and those interested in myasthenia gravis inject them with the acetylcholine receptor3. If the autoantigen for a particular autoimmune disease is not known, investigators inject a crude protein extract from the organ targeted by the autoimmune reaction. For autoimmune hypophysitis, the pathogenic autoantigen(s) remain to be identified4, and thus a crude pituitary protein preparation is used. In this video article we demonstrate how to induce experimental autoimmune hypophysitis in SJL mice.

This video shows how to induce autoimmune hypophysitis in SJL mice and how to assess its severity by histopathology.

L&#39;induction de hypophysite auto-immune expérimentale chez la souris SJL

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Accelerated Type 1 Diabetes Induction in Mice by Adoptive Transfer of Diabetogenic CD4+ T Cells

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of human Type 1 diabetes (T1D). Cell transfer studies in irradiated recipient mice have established that T cells are pivotal in T1D pathogenesis in this model. We describe herein a simple method to rapidly induce T1D by adoptive transfer of purified, primary CD4+ T cells from pre-diabetic NOD mice transgenic for the islet-specific T cell receptor (TCR) BDC2.5 into NOD.SCID recipient mice. The major advantages of this technique are that isolation and adoptive transfer of diabetogenic T cells can be completed within the same day, irradiation of the recipients is not required, and a high incidence of T1D is elicited within 2 weeks after T cell transfer. Thus, studies of pathogenesis and therapeutic interventions in T1D can proceed at a faster rate than with methods that rely on heterogenous T cell populations or clones derived from diabetic NOD mice.

We provide a reproducible method to induce type 1 diabetes (T1D) in mice within two weeks by the adoptive transfer of islet antigen-specific, primary CD4+ T cells.

Accélération de diabète de type 1 chez la souris par induction transfert adoptif de lymphocytes CD4 + T Cells diabétogéniques

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of ...

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While the exact etiology of the disease is yet unclear, autoreactive T lymphocytes are thought to play a central role in its pathophysiology. MS therapy is only partially effective so far and research efforts continue to expand our knowledge on the pathophysiology of the disease and to develop novel treatment strategies. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the most common animal model for MS sharing many clinical and pathophysiological features. There is a broad diversity of EAE models which reflect different clinical, immunological and histological aspects of human MS. Actively-induced EAE in mice is the easiest inducible model with robust and replicable results. It is especially suited for investigating the effects of drugs or of particular genes by using transgenic mice challenged by autoimmune neuroinflammation. Therefore, mice are immunized with CNS homogenates or peptides of myelin proteins. Due to the low immunogenic potential of these peptides, strong adjuvants are used. EAE susceptibility and phenotype depends on the chosen antigen and rodent strain. C57BL/6 mice are the commonly used strain for transgenic mouse construction and respond among others to myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG). The immunogenic epitope MOG35-55 is suspended in complete Freund's adjuvant (CFA) prior to immunization and pertussis toxin is applied on the day of immunization and two days later. Mice develop a "classic" self-limited monophasic EAE with ascending flaccid paralysis within 9-14 days after immunization. Mice are evaluated daily using a clinical scoring system for 25-50 days. Special considerations for care taking of animals with EAE as well as potential applications and limitations of this model are discussed.

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an established animal model of multiple sclerosis. C57BL/6 mice are immunized with myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) peptide 35-55 (MOG35-55), resulting in an ascending flaccid paralysis caused by autoreactive immune cells in the central nervous system. Protocols for disease induction and monitoring will be discussed.

Myéline Oligodendrocyte glycoprotéine (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Induit encéphalomyélite allergique expérimentale (EAE) dans C57BL / 6

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages and disadvantages. We describe here an experimental colitis model that is initiated by adoptive transfer of syngeneic splenic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipient mice. The CD4+CD45RBhigh T cell population that largely consists of na&#239;ve effector cells is capable of inducing chronic intestinal inflammation, closely resembling key aspects of human IBD. This method can be manipulated to study aspects of disease onset and progression. Additionally it can be used to study the function of innate, adaptive, and regulatory immune cell populations, and the role of environmental exposures, i.e., the microbiota, in intestinal inflammation. In this article we illustrate the methodology for inducing colitis with a step-by-step protocol. This includes a video demonstration of key technical aspects required to successfully develop this murine model of experimental colitis for research purposes.

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Here, we present a protocol to induce colonic inflammation in mice by adoptive transfer of syngeneic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipients. Clinical and histopathological features mimic human inflammatory bowel diseases. This method allows the study of the initiation of colonic inflammation and progression of disease.

Induction de murin inflammation intestinale par transfert adoptif de effecteur CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Haute</sup&gt; T cellules dans des souris immunodéficientes

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) resulting in cognitive and motor impairment. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a useful animal model of MS, because it is also characterized by lesion formation in the CNS, motor impairment and is also driven by autoimmune and inflammatory reactions. One of the EAE models is induced with a peptide derived from the myelin oligodendrocyte protein (MOG)35-55 in mice. The EAE mice develop a progressive disease course. This course is divided into three phases: the preclinical phase (day 0 - 9), the disease onset (day 10 - 11) and the acute phase (day 12 - 14). MS and EAE are induced by autoreactive T cells that infiltrate the CNS. These T cells secrete chemokines and cytokines which lead to the recruitment of further immune cells. Therefore, the immune cell distribution in the spinal cord during the three disease phases was investigated. To highlight the time point of the disease at which the activation/proliferation/accumulation of T cells, B cells and monocytes starts, the immune cell distribution in lymph nodes, spleen and blood was also assessed. Furthermore, the levels of several cytokines (IL-1&#946;, IL-6, IL-23, TNF&#945;, IFN&#947;) in the three disease phases were determined, to gain insight into the inflammatory processes of the disease. In conclusion, the data provide an overview of the functional profile of immune cells during EAE pathology.

This manuscript describes the methods for induction and scoring of the experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) model, together with the assessment of immune cell distribution and mRNA cytokine levels in lymph nodes, spleen, blood and spinal cord using flow cytometry and quantitative PCR, respectively, at various disease phases.

Induction of Experimental encéphalomyélite allergique chez la souris et l&#39;évaluation de la distribution des maladies dépendant des cellules immunitaires dans divers tissus

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) ...

Simple and Efficient Production and Purification of Mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein for Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Studies

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses targeting myelin. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the most common animal model of CNS autoimmune disease, and is typically induced via immunization with short peptides representing immunodominant CD4+ T cell epitopes of myelin proteins. However, B cells recognize unprocessed protein directly, and immunization with short peptide does not activate B cells that recognize the native protein. As recent clinical trials of B cell-depleting therapies in MS have suggested a role for B cells in driving disease in humans, there is an urgent need for animal models that incorporate B cell-recognition of autoantigen. To this end, we have generated a new fusion protein containing the extracellular domain of the mouse version of myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) as well as N-terminal fusions of a His-tag for purification purposes and the thioredoxin protein to improve solubility (MOGtag). A tobacco etch virus (TEV) protease cleavage site was incorporated to allow the removal of all tag sequences, leaving only the pure MOG1-125 extracellular domain. Here, we describe a simple protocol using only standard laboratory equipment to produce large quantities of pure MOGtag or MOG1-125. This protocol consistently generates over 200 mg of MOGtag protein. Immunization with either MOGtag or MOG1-125 generates an autoimmune response that includes pathogenic B cells that recognize the native mouse MOG.

We describe a simple protocol using only basic lab equipment to generate and purify large quantities of a fusion protein that contains mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein. This protein can be used to induce experimental autoimmune encephalomyelitis driven by both T and B cells.

Production et purification de souris myéline oligodendrocyte glycoprotéine simple et efficace pour auto-immune expérimentale encéphalomyélite études

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses ...

Visualizing Impairment of the Endothelial and Glial Barriers of the Neurovascular Unit during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis In Vivo

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with embedded pericytes, and the glia limitans composed by the parenchymal basement membrane and astrocytic end-feed embracing the abluminal aspect of central nervous system (CNS) microvessels. In addition to maintaining CNS homeostasis the NVU controls immune cell trafficking into the CNS. During immunosurveillance of the CNS low numbers of activated lymphocytes can cross the endothelial barrier without causing BBB dysfunction or clinical disease. In contrast, during neuroinflammation such as in multiple sclerosis or its animal model experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) a large number of immune cells can cross the BBB and subsequently the glia limitans eventually reaching the CNS parenchyma leading to clinical disease. 
Immune cell migration into the CNS parenchyma is thus a two-step process that involves a sequential migration across the endothelial and glial barrier of the NVU employing distinct molecular mechanisms. If following their passage across the endothelial barrier, T cells encounter their cognate antigen on perivascular antigen-presenting cells their local reactivation will initiate subsequent mechanisms leading to the focal activation of gelatinases, which will enable the T cells to cross the glial barrier and enter the CNS parenchyma. Thus, assessing both, BBB permeability and MMP activity in spatial correlation to immune cell accumulation in the CNS during EAE allows to specify loss of integrity of the endothelial and glial barriers of the NVU. 
We here show how to induce EAE in C57BL/6 mice by active immunization and how to subsequently analyze BBB permeability in vivo using a combination of exogenous fluorescent tracers. We further show, how to visualize and localize gelatinase activity in EAE brains by in situ zymogaphy coupled to immunofluorescent stainings of BBB basement membranes and CD45+ invading immune cells.

Here, we present protocols to investigate impairment of the neurovascular unit during experimental autoimmune encephalomyelitis in vivo. We specifically address how to determine blood-brain barrier permeability and gelatinase activity involved in leukocyte migration across the glia limitans.&#160;

Visualiser l’altération des barrières endothéliales et gliales de l’unité neurovasculaire au cours de l’encéphalomyélite allergique expérimentale In Vivo

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T (iNKT) cells. Patients with active RA present fewer iNKT cells, defective cell function, and excessive polarization of Th1. In this study, an RA animal model was established using a mixture of hGPI325-339 and hGPI469-483 peptides. The iNKT cells were obtained by in vivo induction and in vitro purification, followed by infusion into RA mice for adoptive immunotherapy. The in vivo imaging system (IVIS) tracking revealed that iNKT cells were mainly distributed in the spleen and liver. On day 12 after cell therapy, the disease progression slowed down significantly, the clinical symptoms were alleviated, the abundance of iNKT cells in the thymus increased, the proportion of iNKT1 in the thymus decreased, and the levels of TNF-&#945;, IFN-&#947;, and IL-6 in the serum decreased. Adoptive immunotherapy of iNKT cells restored the balance of immune cells and corrected the excessive inflammation of the body.

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

This protocol uses G6PI mixed peptides to construct rheumatoid arthritis models that are closer to that of human rheumatoid arthritis in CD4+ T cells and cytokines. High purity invariant natural killer T cells (mainly iNKT2) with specific phenotypes and functions were obtained by in vivo induction and in vitro purification for adoptive immunotherapy.

Immunothérapie adoptive des cellules iNKT dans les souris de RA induites par l'isomérase de glucose-6-Phosphate (G6PI)

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Flow Cytometric Analysis of Lymphocyte Infiltration in Central Nervous System during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible genetic background. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a typical disease model of MS widely used for investigating the pathogenesis in which T lymphocytes specific for myelin antigens initiate an inflammatory reaction in CNS. It is very important to assess how lymphocytes in the CNS regulate the development of disease. However, the approach for measuring the quantity and quality of infiltrated lymphocytes in the CNS is very limited due to the difficulties in isolating and detecting infiltrated lymphocytes from the brain. This manuscript presents a protocol for that is useful for the isolation, identification, and characterization of infiltrated lymphocytes from the CNS and will be helpful for our understanding of how lymphocytes are involved in the development of the CNS autoimmune disease.

This manuscript presents a protocol to induce active experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in mice. A method for the isolation and characterization of the infiltrated lymphocytes in the central nervous system (CNS) is also presented to show how lymphocytes are involved in the development of CNS autoimmune disease.

Analyse cytométrique du flux de l’infiltration de lymphocytes dans le système nerveux central pendant l’encéphalomyélite autoimmune expérimentale

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible ...

Surmonter Absence de réaction dans encéphalomyélite allergique expérimentale (EAE) souches de souris résistantes par transfert adoptif et une stimulation antigénique

PLAYLIST