Les auteurs tiennent à souligner la contribution de Meritxell Romeu-Nadal à l&#39;étude chez le rat.

Une. Procédures animales <ol><li> Tous les travaux des animaux doit être effectué en conformité avec les bureaux à domicile des animaux (Scientific Procedures) Act (1986). </li><li> Compagnon de rats Wistar âgés de 10 semaines par reproduction monogame, et confirmer la grossesse par l&#39;apparition d&#39;un bouchon vaginal. Enregistrer ce que le jour 1 de la gestation, et commencer régime expérimental. Pour les femelles vierges, accueillir chaque rat individuel, et commencer régime expérimental. </li><li> Après avoir nourri les régimes expérimentaux pendant 20 jours euthanasier les rats par asphyxie au CO2, suivie par dislocation cervicale. </li><li> Utilisez une pince de dissection et ciseaux pour exposer la cavité abdominale et exciser le foie en coupant les ligaments qui relient le foie au diaphragme, paroi antérieure de l&#39;abdomen, l&#39;estomac et le duodénum. Lavez le foie dans du PBS et congeler dans l&#39;azote liquide avant de le ranger à -80 ° C. </li></ol> 2. Préparation d&#39;un lipide extrait total 9 <ol><li> Ajouter Molecultamis ar (à remplir 1/10 de récipient de solvant) à tous les solvants pour créer solvants «sèches». Effectuer tous les travaux solvant dans une hotte. </li><li> Couper environ 100 mg foie congelé et peser. Placez le tissu dans un tube dans un seau à glace et ajouter 0,8 ml de glace froide NaCl à 0,9%. Homogénéiser le tissu. </li><li> Ajouter étalons internes dissous dans 1 ml / mg de chloroforme anhydre et de methanol (2:1, v / v) contenant de l&#39;hydroxytoluène butylé (BHT, 50 mg / l) comme anti-oxydant. Pour 100 mg de foie de rat ajouter 100 ug de la norme CE (Cholesteryl heptadécanoate 17:00) Attention:. Chloroforme et le BHT sont dangereux. </li><li> Ajouter 5,0 ml de chloroforme sec: méthanol (2:1, v / v) contenant du BHT (50 mg / L). </li><li> Ajouter 1,0 ml de NaCl 1 M, bien mélanger au vortex jusqu&#39;à ce que le mélange ressemble uniforme. Les échantillons peuvent être bouchés et conservés à -20 ° C, à ce stade pendant une semaine. </li><li> Centrifuger à 1000 g pendant 10 min, bas frein à la température ambiante. </li><li> Recueillir inférieurephase en utilisant une pipette Pasteur en verre, transférer dans un nouveau tube en verre avec bouchon à vis et sec sous azote à 40 ° C. Les échantillons peuvent être bouchés et conservés à -20 ° C, à ce stade pendant une semaine. </li></ol> 3. La séparation des classes de lipides par extraction en phase solide (SPE) 10 <ol><li> Connecter le réservoir SPE à une pompe à vide et placer aminopropyl cartouche de silice SPE sur le réservoir. </li><li> Placer le nouveau tube de verre à bouchon à vis TAG marqué CE et dans le rack de réservoir dans la colonne de recueillir première fraction. </li><li> Dissoudre l&#39;extrait total de lipides dans 1,0 ml de chloroforme sec et vortex. </li><li> Appliquer l&#39;échantillon à la colonne à l&#39;aide d&#39;une pipette Pasteur en verre et laisser couler à travers dans le tube à bouchon à vis par gravité. Si d&#39;autres gouttes tombent, retirer le liquide restant sous vide. </li><li> Éluer la fraction de TAG et CE sous vide, laver la colonne avec 2 x 1,0 ml lavages de chloroforme sec. </li><li> Lorsque tout le liquide est retiré, sécher le TAG et CE fractionnementn sous azote à 40 ° C. Les échantillons peuvent être bouchés et conservés à -20 ° C, à ce stade pendant une semaine. </li><li> Placer le nouveau bouchon à vis tube de verre PC marqué dans le bac du réservoir sous la colonne. </li><li> Éluer la fraction de PC sous vide avec addition de 2 x 1,0 ml de chloroforme sec: methanol (60:40, v / v) jusqu&#39;à ce que tout le liquide est enlevé de la colonne. </li><li> Retirez et fraction de PC sec sous azote à 40 ° C. Les échantillons peuvent être bouchés et conservés à -20 ° C, à ce stade pendant une semaine. </li><li> Placez un nouveau bouchon à vis tube de verre PE marqué dans le bac de réservoir et éluer la fraction de PE avec l&#39;addition de 1,0 ml de méthanol sec sous vide. </li><li> Retirez et fraction de PE sec sous azote à 40 ° C. Les échantillons peuvent être bouchés et conservés à -20 ° C, à ce stade pendant une semaine. </li><li> Placer le nouveau tube de verre à bouchon vissé marqué AGNE dans le bac de réservoir et éluer la fraction AGNE sous vide par l&#39;addition de 2 x 1,0 ml lavages de chloroforme sec: méthanol: acide acétique glacial. (100:2:2, v / v / v) Attention: L&#39;acide acétique glacial est dangereux. </li><li> Retirer fraction recueillie AGNE et sec sous azote à 40 ° C. Les échantillons peuvent être bouchés et conservés à -20 ° C, à ce stade pendant une semaine. </li><li> Placez une nouvelle cartouche SPE de silice aminopropylé sur le réservoir de SPE et placer un tube de verre à bouchon vissé dans le bac du réservoir sous la cartouche de collecte des déchets. </li><li> Laver la colonne avec 3 lavages d&#39;hexane sec sous vide, puis un lavage de 1,0 ml finale par gravité. Ne laissez pas la cartouche à devenir sec (tourner les chaînes de la colonne de la cartouche à une position fermée lorsque le niveau de l&#39;hexane est proche de la matrice de la cartouche). Attention: L&#39;hexane est dangereux. </li><li> Remplacer le tube de déchets avec le tube de verre nouvelle vis-bouchon de marquage CE. </li><li> Dissoudre le TAG et CE fraction séchée (préparé à l&#39;étape 3.6) dans 1,0 ml d&#39;hexane sec et vortex. Appliquer à la colonne en utilisant une pipette Pasteur en verre et laisser s&#39;égoutter à travers sous gravity. </li><li> Si d&#39;autres gouttes tombent, retirer le liquide restant sous vide. </li><li> Sous vide, laver la colonne avec 2 x 1,0 ml d&#39;hexane sec lavages pour éluer CE et fraction recueillie sec sous azote à 40 ° C. Les échantillons peuvent être bouchés et conservés à -20 ° C, à ce stade pendant une semaine. </li><li> Placer le nouveau tube de verre à bouchon à vis TAG marqué dans le bac de réservoir et élution TAG avec l&#39;ajout de 2 x 1,0 ml d&#39;hexane sec lavages: méthanol: acétate d&#39;éthyle (100:5:5) sous vide. </li><li> Fraction recueillie à sec sous azote à 40 ° C. Les échantillons peuvent être bouchés et conservés à -20 ° C à ce stade pour une semaine. Attention: l&#39;acétate d&#39;éthyle est dangereux. </li></ol> 4. Préparation de FAME de CE 10 <ol><li> Ajouter 0,5 ml de toluène sec à la fraction de la CE séparé (recueillies à l&#39;étape 3.19) et vortex. Attention: Le toluène est dangereux. </li><li> Préparer le réactif de méthylation (méthanol sec avec 2% (v/ V) de H 2 SO 4), dont 1,0 ml est requis par échantillon. Distribuer le volume de méthanol sec en verre ou en matière plastique adéquate avec couvercle et ajouter la quantité requise de H 2 SO 4, goutte à goutte, puis mélanger par inversion. Attention: L&#39;acide sulfurique est dangereux. </li><li> Ajouter 1,0 ml de réactif de méthylation pour les échantillons dissous dans du toluène sec, boucher les tubes en toute sécurité, et mélanger doucement. </li><li> Chauffer les échantillons pendant 2 heures à 50 ° C. </li><li> Après 2 h retirer les tubes de la chaleur. Une fois ajouter fraîche 1,0 ml de solution (0,25 M KHCO3 0.5MK 2 CO 3) Attention neutralisants:. Bicarbonate de potassium et de carbonate de potassium sont dangereux. </li><li> Ajouter 1,0 ml d&#39;hexane sec et vortex. </li><li> Centrifuger à 250 g pendant 2 min, faible frein à la température ambiante. </li><li> Recueillir la phase supérieure, qui contient le FAME, et transférer dans un nouveau bouchon à vis tube non de verre jetable. </li><li> Sécher le FAME recueillis en vertu del&#39;azote à 40 ° C. Les échantillons peuvent être bouchés et conservés à -20 ° C, à ce stade pendant une semaine. </li></ol> 5. Retrait du cholestérol libre contamination de FAME CE 14 (Sans cholestérol peut contaminer l&#39;échantillon; voir la figure 1 pour les traces exemple de chromatographie avec et sans enlèvement de cholestérol). <ol><li> Placer un tube de déchets dans le réservoir de SPE et de placer une cartouche SPE de gel de silice sur le réservoir. </li><li> Laver la colonne avec 3 x 1 ml d&#39;hexane sec lavages sous vide et 1 x 1 ml par gravité. </li><li> Retirer lavages de déchets et ajouter nouveau tube de déchets dans le réservoir. </li><li> Dissoudre FAME CE dans 1 ml d&#39;hexane sec, vortex. </li><li> Appliquer à la colonne en utilisant une pipette Pasteur en verre et laisser s&#39;égoutter par gravité à travers. </li><li> Laver la colonne avec 3 x 1 ml d&#39;hexane lavages sous vide. </li><li> Retirer lavages de déchets et placez nouveau tube non bouchon à vis en réservoir de l&#39;étiquette FAME CE. </li><li> Éluer l&#39;FAME CE avec 2 x 1 ml d&#39;hexane sec: l&#39;éther éthylique (95:5 v / v) lavages. </li><li> Sécher sous azote à 40 ° C. Les échantillons peuvent être bouchés et conservés à -20 ° C à ce stade pour une semaine. Attention: l&#39;éther de diéthyle est dangereux. </li></ol> 6. Transfert de FAME en GC Auto Sampler Vial <ol><li> Ajouter 75 ul hexane sec à déguster, vortex, et de les transférer à un GC échantillon automatique flacon. </li><li> Ajouter un autre 75 pi hexane sec à déguster, vortex et transférer à la même GC échantillon automatique flacon. Les échantillons peuvent être bouchés et conservés à -20 ° C, à ce stade pendant un mois. </li></ol> 7. Analyse utilisant la chromatographie en phase gazeuse 14 <ol><li> Analyser FAME sur un chromatographe en phase gazeuse. Exemple mis en place: 30 mx 0,25 um x 0,25 mm BPX-70 fusionné colonne capillaire de silice avec un protocole de température: Température initiale de 115 ° C, maintenez 2 min, rampe de 10 ° C / min à 200 ° C, maintenez 18,5 min, rampe de 60 ° C / min à 245 ° C, hde 4 min. Colonne: hélium gaz, le taux de 1,0 débit, la pression et la vitesse de 14,6 29. Injecteur: Température = 300 ° C. Détecteur: flux d&#39;hydrogène 40.0, flux d&#39;air 184,0, maquillage hélium de gaz, débit 45,0, température = 300 ° C. </li><li> Réglez rapport de division, le cas échéant (par exemple 25:1 pour l&#39;analyse des FAME CE). </li><li> Déterminer l&#39;aire de chaque pic en utilisant un logiciel approprié et d&#39;identifier les points de gloire en comparaison avec les normes. Voir la figure 2 par exemple des chromatogrammes. </li><li> Utiliser l&#39;aire sous les pics de données pour calculer la contribution des acides gras individuels en tant que pourcentage des acides gras totaux. </li><li> Calculer les concentrations absolues des acides gras en divisant la surface de référence interne par la quantité ajoutée. Diviser la superficie de chaque acide gras par ce résultat pour obtenir des concentrations absolues de chaque acide gras à l&#39;intérieur de la quantité de tissu utilisé. </li></ol>

<ol>
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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+erythrocyte+membrane+Trans+and+marine+fatty+acids+between+1999+and+2006+in+older+Americans.">Changes in erythrocyte membrane Trans and marine fatty acids between 1999 and 2006 in older Americans.</a> J. Nutr. 142 (7), 1297-1303 (2012).</li><li>Roberts, L. D., McCombie, G., Titman, C. M., Griffin, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+matter+of+fat:+An+introduction+to+lipidomic+profiling+method.">A matter of fat: An introduction to lipidomic profiling method.</a> J. Chromatogr. B. 871 (2), 174-181 (2008).</li></ol>

Les auteurs déclarent aucun intérêt financier concurrents.

Chromatographie en phase gazeuse est une technique exacte à utiliser pour l&#39;analyse d&#39;acide gras, et sa reproductibilité élevée juge cette technique convient pour les analyses cliniques. Colonnes de CPG appropriées doivent être utilisées pour permettre l&#39;identification d&#39;acides gras d&#39;intérêt, avec des colonnes disponibles présentant des variations de la polarité de la phase stationnaire, la longueur de la colonne et le diamètre intérieur. L&#39;utilisation d&#39;une colonne capillaire e...

chromatographie en phase gazeuse (GC) est une technique bien établie utilisée pour identifier et quantifier l&#39;incorporation des acides gras dans les piscines de lipides et les membranes cellulaires 1,2 dans des conditions de supplémentation ou physiologiques tels que l&#39;obésité (et maladies apparentées telles que le diabète) ou la grossesse 3 - 5. Il est également adapté pour analyser les types et les quantités de matières grasses dans les aliments. Ceci est utile lors de la caractérisation des régimes expérimentaux, ainsi que veiller à ce que l&#39;industrie alimentaire conforme à la réglementation. Par exemple, GC peut être utilisée pour confirmer l&#39;identité et la quantité des acides gras dans un produit comme un complément alimentaire pour garantir que le marquage est correct et réglementations sont respectées à 6,7. Analyse des acides gras peut fournir des indications précieuses sur le métabolisme des lipides dans la santé et la maladie, l&#39;impact de la modification du régime alimentaire, et l&#39;effet des changements dans l&#39;état physiologique 8. L&#39;utilisation de GC à étudier des échantillons durant la grossesse a fourni importantedes informations sur les changements dans l&#39;acide gras et l&#39;homéostasie lipidique complexe 3. Avant la séparation chromatographique, les lipides sont généralement extraits de l&#39;échantillon en utilisant la solubilité des lipides dans des mélanges de solvants de chloroforme et de méthanol. Le chlorure de sodium est ajouté pour faciliter la séparation du mélange en lipides aqueuse et organique contenant 9,10 phases. Classes de lipides complexes d&#39;intérêt peuvent être séparées de l&#39;extrait lipidique total d&#39;une extraction en phase solide (SPE). Cette technique de séparation élue classes de lipides en fonction de leur polarité ou affinité de liaison. Triacylglycérols (TAG) et des esters de cholestérol (CE) sont éluées en premier en tant que fraction combinée, d&#39;autres catégories, la phosphatidylcholine (PC), la phosphatidyléthanolamine (PE), et les acides gras non estérifiés (AGNE) sont éluées en augmentant la polarité du solvant d&#39;élution . La séparation des TAG de CE exploite la liaison de TAG seulement à une SPE cartri fraisdge, permettant CE pour être élue. TAG peut ensuite être éluée en augmentant la polarité du solvant d&#39;élution 9,10. Cette méthode permet à plusieurs échantillons à séparer simultanément avec un rendement plus élevé que ce qui est réalisé par chromatographie sur couche mince, ce qui signifie que la taille des échantillons relativement petits (par exemple &lt;100 ul de plasma ou de sérum, &lt;100 mg de tissus) peuvent être analysées 11,12. GC est une technique bien établie décrite dans la première des années 1950, il a été suggéré que la phase mobile dans les systèmes ensuite liquide-liquide peut être remplacé par de la vapeur. Il a d&#39;abord été utilisée pour l&#39;analyse de pétrole mais s&#39;est rapidement développée dans d&#39;autres domaines tels que l&#39;analyse des acides aminés et la biochimie des lipides, qui est toujours d&#39;un grand intérêt. Les progrès de l&#39;équipement et de la technologie GC tels que le développement de colonnes capillaires des colonnes garnies utilisés précédemment a conduit à nos techniques actuelles dans laquelle les acides gras sont en mesure d&#39;êtreséparés de manière plus efficace à des températures inférieures résultant en GC est couramment utilisé pour identifier et quantifier les acides gras dans un large éventail d&#39;enquêtes 13. GC nécessite des acides gras pour être dérivé afin qu&#39;ils puissent devenir suffisamment volatil pour être élue à des températures raisonnables sans décomposition thermique. Cela implique généralement la substitution d&#39;un groupe fonctionnel contenant de l&#39;hydrogène pour former des esters, des thioesters ou amides d&#39;analyse. Les esters méthyliques sont couramment étudiés dérivés, qui sont produites par méthylation. Dans ce procédé, les liaisons ester dans les lipides complexes sont hydrolysés pour libérer les acides gras libres, qui sont transmethylated pour former des esters gras méthyliques d&#39;acide (EMAG). Le profil résultant de FAME, déterminé par CPG, est désigné comme la composition en acides gras et peut être aisément comparé entre les différents groupes expérimentaux 9,10. La technique permet à la fois les proportions des indiLes acides gras UAL et leurs concentrations à mesurer. En plus de l&#39;utilisation de CG pour la détermination des acides gras dans les études de nutrition et de l&#39;industrie alimentaire, la technique peut être utilisée dans une large gamme de domaines d&#39;analyse. Par exemple, les analyses environnementales par GC comprennent la mesure de la contamination des eaux par les insecticides et les analyses de sol mesurer la teneur en chlorobenzène. En toxicologie, GC a également été utilisé pour identifier les substances illicites dans l&#39;urine et des échantillons de sang de personnes; une telle performance sportive amplificateurs 12 et la capacité à séparer des mélanges complexes d&#39;hydrocarbures rend cette technique populaire dans l&#39;industrie pétrolière pour l&#39;analyse de la pétrochimie 12. La grossesse est associée à des modifications importantes à la composition en acides gras des tissus maternels, en particulier dans la teneur en acides gras oméga-3 (n-3) et les acides gras oméga-6 (n-6) aci gras polyinsaturéds (AGPI) 3. Dans la présente étude, nous illustrons l&#39;utilisation de GC dans la mesure des acides gras en décrivant leur utilisation dans l&#39;analyse de la composition en acides gras des tissus du foie prélevé sur des rats vierges et enceintes recevant une ration faible et élevée de graisse avec différentes sources de pétrole. Les rations expérimentales fournies ici sont une base d&#39;huile bas régime de soja gras, un régime riche en graisses de soja à base d&#39;huile (130,9 g Lipides totaux / kg de matière grasse totale) ou un régime à base d&#39;huile de lin riche en graisses (130,9 g Lipides totaux / kg régime), prévue à 20 jours. La composition de ces régimes acide gras complet nutritif et ont été décrites précédemment 14. Les régimes alimentaires d&#39;huile de soja sont riches en acide linoléique (18:2 n-6) et contiennent un peu d&#39;acide α-linolénique (18:3 n-3) tandis que l&#39;alimentation de l&#39;huile de lin est riche en acide α-linolénique. Ces régimes riches en gras représentent les différentes rations de linoléiques à α-linolénique (rations de 08h01 et 01h01, respectivement). La méthode d&#39;isolement des classes de lipides individuels et l&#39;analyse par GC est nousll établi et validé, et a été publié antérieurement 10 mais sans la description technique détaillée trouvé ici.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Methanol:</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M/4056/17</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Fumes - HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform:</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C/4966/17</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Fumes - HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BHT:</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>W218405</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Dust fumes - Anhydrous</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td>Anhydrous</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexane</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>H/0406/17</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Fumes - HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glacial acetic acid</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>695084</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Burns - 99.85%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfuric acid</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>339741</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Burns - 99.999%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium carbonate</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>209619</td>
			<td>99% ACS Reagent grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium bicarbonate</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>237205</td>
			<td>99.7% ACS Reasgent grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10204340</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Fumes - 99+% GLC SpeciFied</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluene</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>T/2300/15</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Fumes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diethyl ether</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>309966</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Fumes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrogen (oxygen free) cylinder</td>
			<td>BOC</td>
			<td>44-w</td>
			<td>&#39;CAUTION&#39; Compressed gas - explosion risk</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aminopropyl silica SPE cartridges</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>12102014</td>
			<td>Cartridge - Bead mass 100mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica gel SPE cartidges</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>14102010</td>
			<td>Cartridge - Bead mass 100mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular seives</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>334324</td>
			<td>Pellets, AW-300, 1.6mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass pasteur pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB50251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate glass test tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB59527</td>
			<td>Non-screw cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw thread glass test tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB59555</td>
			<td>13mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caps for screw thread test tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB51353</td>
			<td>To fit 13mm tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solida phase extraction (SPE) tank</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td>VacElut 20 Manifold</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer stopcocks for SPE tank</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>12131005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum pump</td>
			<td>Sigma- Aldrich</td>
			<td>2656-194GB-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GC vials</td>
			<td>Kinesis</td>
			<td>STV 12-03TS</td>
			<td>Short thread 9mm, TPX 0.2ml fused glass insert</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GC vial lids</td>
			<td>Kinesis</td>
			<td>SCC09-0.2B</td>
			<td>Short thread 9mm blue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GC inlet liners</td>
			<td>SGE Analytical science</td>
			<td>092002</td>
			<td>Split/splitless Focus liner ID 4mm, OD 6.3mm length 78.5mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GC septa</td>
			<td>SGE Analytical science</td>
			<td>041856</td>
			<td>11mm, MN material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GC column</td>
			<td>SGE Analytical science</td>
			<td>054612</td>
			<td>Length 30m, ID 0.22mm, Film thickness 0.25&#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas chromatograph</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>HP 6890 series</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the use of gas chromatography to analyze compositional changes of fatty acids in rat liver tissue during pregnancy

chromatographie en phase gazeuse (GC) est une méthode très sensible utilisée pour identifier et quantifier la teneur en acides gras des lipides des tissus, de cellules et de plasma / sérum, donnant des résultats avec une grande précision et une reproductibilité élevée. Dans les études métaboliques et nutrition GC permet l&#39;évaluation des changements dans les concentrations d&#39;acides gras suivants interventions ou lors des changements de l&#39;état physiologique comme la grossesse. Extraction en phase solide (SPE) à l&#39;aide aminopropyliques cartouches de silice permet la séparation des principales classes de lipides, y compris les triglycérides, différents phospholipides et esters de cholestérol (CE). GC combinés avec SPE a été utilisé pour analyser les variations de la composition en acides gras de la fraction CE dans le foie des rats gravides vierges et qui avaient été nourris avec des régimes différents de haute et basse en matières grasses. Il ya des effets d&#39;interaction alimentation / grossesse importantes sur la teneur en acides gras oméga-3 et oméga-6 gras de foie CE, indiquant que les femmes enceintes ont une réponse différente à manipula alimentaireion de s&#39;observe chez les femelles vierges.

Le succès de ce procédé dépend de la suite du protocole de précision et de nettoyage utilisant des solvants et des réactifs de façon à réduire le «bruit» et la contamination qui peut apparaître sur un chromatogramme. Les échantillons contaminés sont plus difficiles à analyser, ce qui réduit la précision de l&#39;aire sous la courbe de calculs. Si le protocole est suivi avec succès un chromatogramme avec des pics symétriques, claires et bien définies, avec un bruit de fond minimal doit être obtenue, ...

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The Use of Gas Chromatography to Analyze Compositional Changes of Fatty Acids in Rat Liver Tissue during Pregnancy

Grossesse conduit à d&#39;importants changements à la composition en acides gras des tissus maternels. profils lipidiques peuvent être obtenus par chromatographie en phase gazeuse pour permettre l&#39;identification et la quantification des acides gras dans les classes de lipides individuels entre les rats nourris avec des régimes différents de graisse haute et basse pendant la grossesse.

L&#39;utilisation de la chromatographie en phase gazeuse pour l&#39;analyse compositionnelle modifications des acides gras dans les tissus de foie de rat pendant la grossesse

Gas chromatography (GC) is a highly sensitive method used to identify and quantify the fatty acid content of lipids from tissues, cells, and plasma/serum, ...

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Research

JoVE Journal

Chemistry

29.9K vues.  University of Southampton.  Grossesse conduit à d'importants changements à la composition en acides gras des tissus maternels. profils lipidiques peuvent être obtenus par chromatographie en phase gazeuse pour permettre l'identification et la quantification des acides gras dans les classes de lipides individuels entre les rats nourris avec des régimes différents de graisse haute et basse pendant la grossesse. 

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Determination of the Gas-phase Acidities of Oligopeptides

Amino acid residues located at different positions in folded proteins often exhibit different degrees of acidities. For example, a cysteine residue located at or near the N-terminus of a helix is often more acidic than that at or near the C-terminus 1-6. Although extensive experimental studies on the acid-base properties of peptides have been carried out in the condensed phase, in particular in aqueous solutions 6-8, the results are often complicated by solvent effects 7. In fact, most of the active sites in proteins are located near the interior region where solvent effects have been minimized 9,10. In order to understand intrinsic acid-base properties of peptides and proteins, it is important to perform the studies in a solvent-free environment.
We present a method to measure the acidities of oligopeptides in the gas-phase. We use a cysteine-containing oligopeptide, Ala3CysNH2 (A3CH), as the model compound. The measurements are based on the well-established extended Cooks kinetic method (Figure 1) 11-16. The experiments are carried out using a triple-quadrupole mass spectrometer interfaced with an electrospray ionization (ESI) ion source (Figure 2). For each peptide sample, several reference acids are selected. The reference acids are structurally similar organic compounds with known gas-phase acidities. A solution of the mixture of the peptide and a reference acid is introduced into the mass spectrometer, and a gas-phase proton-bound anionic cluster of peptide-reference acid is formed. The proton-bound cluster is mass isolated and subsequently fragmented via collision-induced dissociation (CID) experiments. The resulting fragment ion abundances are analyzed using a relationship between the acidities and the cluster ion dissociation kinetics. The gas-phase acidity of the peptide is then obtained by linear regression of the thermo-kinetic plots 17,18.
The method can be applied to a variety of molecular systems, including organic compounds, amino acids and their derivatives, oligonucleotides, and oligopeptides. By comparing the gas-phase acidities measured experimentally with those values calculated for different conformers, conformational effects on the acidities can be evaluated.

The determination of the gas-phase acidities of cysteine-containing oligopeptides is described. The experiments are performed using a triple quadrupole mass spectrometer. The relative acidities of the peptides are measured using collision-induced dissociation experiments, and the quantitative acidities are determined using the extended Cooks kinetic method.

Détermination des acidités en phase gazeuse d&#39;oligopeptides

Amino acid residues located at different positions in folded proteins often exhibit different degrees of acidities. For example, a cysteine residue ...

Recherche

Chimie

Isolation and Preparation of Bacterial Cell Walls for Compositional Analysis by Ultra Performance Liquid Chromatography

The bacterial cell wall is critical for the determination of cell shape during growth and division, and maintains the mechanical integrity of cells in the face of turgor pressures several atmospheres in magnitude. Across the diverse shapes and sizes of the bacterial kingdom, the cell wall is composed of peptidoglycan, a macromolecular network of sugar strands crosslinked by short peptides. Peptidoglycan&#8217;s central importance to bacterial physiology underlies its use as an antibiotic target and has motivated genetic, structural, and cell biological studies of how it is robustly assembled during growth and division. Nonetheless, extensive investigations are still required to fully characterize the key enzymatic activities in peptidoglycan synthesis and the chemical composition of bacterial cell walls. High Performance Liquid Chromatography (HPLC) is a powerful analytical method for quantifying differences in the chemical composition of the walls of bacteria grown under a variety of environmental and genetic conditions, but its throughput is often limited. Here, we present a straightforward procedure for the isolation and preparation of bacterial cell walls for biological analyses of peptidoglycan via HPLC and Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC), an extension of HPLC that utilizes pumps to deliver ultra-high pressures of up to 15,000 psi, compared with 6,000 psi for HPLC. In combination with the preparation of bacterial cell walls presented here, the low-volume sample injectors, detectors with high sampling rates, smaller sample volumes, and shorter run times of UPLC will enable high resolution and throughput for novel discoveries of peptidoglycan composition and fundamental bacterial cell biology in most biological laboratories with access to an ultracentrifuge and UPLC.

The bacterial cell wall is composed of peptidoglycan, a macromolecular network of sugar strands crosslinked by peptides. Ultra Performance Liquid Chromatography provides high resolution and throughput for novel discoveries of peptidoglycan composition. We present a procedure for the isolation of cell walls (sacculi) and their subsequent preparation for analysis via UPLC.

Isolement et préparation de parois cellulaires bactériennes pour l’analyse de composition par chromatographie liquide ultra-performante

The bacterial cell wall is critical for the determination of cell shape during growth and division, and maintains the mechanical integrity of cells in the ...

Quantitative Detection of Trace Explosive Vapors by Programmed Temperature Desorption Gas Chromatography-Electron Capture Detector

The direct liquid deposition of solution standards onto sorbent-filled thermal desorption tubes is used for the quantitative analysis of trace explosive vapor samples. The direct liquid deposition method yields a higher fidelity between the analysis of vapor samples and the analysis of solution standards than using separate injection methods for vapors and solutions, i.e., samples collected on vapor collection tubes and standards prepared in solution vials. Additionally, the method can account for instrumentation losses, which makes it ideal for minimizing variability and quantitative trace chemical detection. Gas chromatography with an electron capture detector is an instrumentation configuration sensitive to nitro-energetics, such as TNT and RDX, due to their relatively high electron affinity. However, vapor quantitation of these compounds is difficult without viable vapor standards. Thus, we eliminate the requirement for vapor standards by combining the sensitivity of the instrumentation with a direct liquid deposition protocol to analyze trace explosive vapor samples.

Trace explosive vapors of TNT and RDX collected on sorbent-filled thermal desorption tubes were analyzed using a programmed temperature desorption system coupled to GC with an electron capture detector. The instrumental analysis is combined with direct liquid deposition method to reduce sample variability and account for instrumentation drift and losses.

Détection quantitative des traces de vapeurs explosives par désorption à température programmée gaz Détecteur à capture d&#39;électrons-chromatographie

The direct liquid deposition of solution standards onto sorbent-filled thermal desorption tubes is used for the quantitative analysis of trace explosive ...

Use of Stopped-Flow Fluorescence and Labeled Nucleotides to Analyze the ATP Turnover Cycle of Kinesins

The kinesin superfamily of microtubule associated motor proteins share a characteristic motor domain which both hydrolyses ATP and binds microtubules. Kinesins display differences across the superfamily both in ATP turnover and in microtubule interaction. These differences tailor specific kinesins to various functions such as cargo transport, microtubule sliding, microtubule depolymerization and microtubule stabilization. To understand the mechanism of action of a kinesin it is important to understand how the chemical cycle of ATP turnover is coupled to the mechanical cycle of microtubule interaction. To dissect the ATP turnover cycle, one approach is to utilize fluorescently labeled nucleotides to visualize individual steps in the cycle. Determining the kinetics of each nucleotide transition in the ATP turnover cycle allows the rate-limiting step or steps for the complete cycle to be identified. For a kinesin, it is important to know the rate-limiting step, in the absence of microtubules, as this step is generally accelerated several thousand fold when the kinesin interacts with microtubules. The cycle in the absence of microtubules is then compared to that in the presence of microtubules to fully understand a kinesin&#8217;s ATP turnover cycle. The kinetics of individual nucleotide transitions are generally too fast to observe by manually mixing reactants, particularly in the presence of microtubules. A rapid mixing device, such as a stopped-flow fluorimeter, which allows kinetics to be observed on timescales of as little as a few milliseconds, can be used to monitor such transitions. Here, we describe protocols in which rapid mixing of reagents by stopped-flow is used in conjunction with fluorescently labeled nucleotides to dissect the ATP turnover cycle of a kinesin.

Kinesins are characterized by nucleotide-dependent interaction with microtubules: a cycle of ATP turnover coupled to a cycle of microtubule interaction. Here, we describe protocols to analyze the kinetics of individual nucleotide transitions in the ATP turnover cycle of a kinesin using fluorescently labeled nucleotides and stopped-flow fluorescence.

L&#39;utilisation de nucléotides stopped-flow fluorescence et marqués d&#39;analyser les Chiffre d&#39;affaires Cycle ATP de kinésines

The kinesin superfamily of microtubule associated motor proteins share a characteristic motor domain which both hydrolyses ATP and binds microtubules. ...

Radiolabeling and Quantification of Cellular Levels of Phosphoinositides by High Performance Liquid Chromatography-coupled Flow Scintillation

Phosphoinositides (PtdInsPs) are essential signaling lipids responsible for recruiting specific effectors and conferring organelles with molecular identity and function. Each of the seven PtdInsPs varies in their distribution and abundance, which are tightly regulated by specific kinases and phosphatases. The abundance of PtdInsPs can change abruptly in response to various signaling events or disturbance of the regulatory machinery. To understand how these events lead to changes in the amount of PtdInsPs and their resulting impact, it is important to quantify PtdInsP levels before and after a signaling event or between control and abnormal conditions. However, due to their low abundance and similarity, quantifying the relative amounts of each PtdInsP can be challenging. This article describes a method for quantifying PtdInsP levels by metabolically labeling cells with 3H-myo-inositol, which is incorporated into PtdInsPs. Phospholipids are then precipitated and deacylated. The resulting soluble 3H-glycero-inositides are further extracted, separated by high-performance liquid chromatography (HPLC), and detected by flow scintillation. The labeling and processing of yeast samples is described in detail, as well as the instrumental setup for the HPLC and flow scintillator. Despite losing structural information regarding acyl chain content, this method is sensitive and can be optimized to concurrently quantify all seven PtdInsPs in cells.

Phosphoinositides are signaling lipids whose relative abundance rapidly changes in response to various stimuli. This article describes a method to measure the abundance of phosphoinositides by metabolically labeling cells with 3H-myo-inositol, followed by extraction and deacylation. Extracted glycero-inositides are then separated by high-performance liquid chromatography and quantified by flow scintillation.

Radiomarquage et la quantification des niveaux cellulaires de phosphoinositides par chromatographie liquide haute performance couplée flux scintillation

Phosphoinositides (PtdInsPs) are essential signaling lipids responsible for recruiting specific effectors and conferring organelles with molecular ...

Facile Preparation of 4-Substituted Quinazoline Derivatives

Reported in this paper is a very simple method for direct preparation of 4-substituted quinazoline derivatives from a reaction between substituted 2-aminobenzophenones and thiourea in the presence of dimethyl sulfoxide (DMSO). This is a unique complementary reaction system in which thiourea undergoes thermal decomposition to form carbodiimide and hydrogen sulfide, where the former reacts with 2-aminobenzophenone to form 4-phenylquinazolin-2(1H)-imine intermediate, whilst hydrogen sulfide reacts with DMSO to give methanethiol or other sulfur-containing molecule which then functions as a complementary reducing agent to reduce 4-phenylquinazolin-2(1H)-imine intermediate into 4-phenyl-1,2-dihydroquinazolin-2-amine. Subsequently, the elimination of ammonia from 4-phenyl-1,2-dihydroquinazolin-2-amine affords substituted quinazoline derivative. This reaction usually gives quinazoline derivative as a single product arising from 2-aminobenzophenone as monitored by GC/MS analysis, along with small amount of sulfur-containing molecules such as dimethyl disulfide, dimethyl trisulfide, etc. The reaction usually completes in 4-6 hr at 160 &#186;C in small scale but may last over 24 hr when carried out in large scale. The reaction product can be easily purified by means of washing off DMSO with water followed by column chromatography or thin layer chromatography.

A protocol for facile preparation of 4-substituted quinazoline derivatives from 2-aminobenzophenones, thiourea and dimethyl sulfoxide is presented.

Préparation Facile de dérivés quinazoline 4-substitué

Reported in this paper is a very simple method for direct preparation of 4-substituted quinazoline derivatives from a reaction between substituted ...

Using Capillary Electrophoresis to Quantify Organic Acids from Plant Tissue: A Test Case Examining Coffea arabica Seeds

Carboxylic acids are organic acids containing one or more terminal carboxyl (COOH) functional groups. Short chain carboxylic acids (SCCAs; carboxylic acids containing three to six carbons), such as malate and citrate, are critical to the proper functioning of many biological systems, where they function in cellular respiration and can serve as indicators of cell health. In foods, organic acid content can have significant impact on taste, with increased SCCA levels resulting in a sour or &#34;acid&#34; taste. Because of this, methods for the rapid analysis of organic acid levels are of particular interest to the food and beverage industries. Unfortunately, however, most methods used for SCCA quantification are dependent on time-consuming protocols requiring the derivatization of samples with hazardous reagents, followed by costly chromatographic and/or mass spectrometric analyses. This method details an alternate method for the detection and quantification of organic acids from plant material and food samples using free zonal capillary electrophoresis (CZE), sometimes simply referred to as capillary electrophoresis (CE). CZE provides a cost-effective method for measuring SCCAs with a low limit of detection (0.005 mg/ml). This article details the extraction and quantification of SCCAs from plant samples. While the method provided focuses on measurement of SCCAs from coffee beans, the method provided can be applied to multiple plant-based food materials.

Using Capillary Electrophoresis to Quantify Organic Acids from Plant Tissue: A Test Case Examining Coffea arabica Seeds

This article presents a method for the detection and quantification of organic acids from plant material using free zonal capillary electrophoresis. An example of the potential application of this method, determining the effects of a secondary fermentation on organic acid levels in coffee seeds, is provided.

Utilisation de l&#39;électrophorèse capillaire à Quantifier acides organiques à partir de tissus végétaux: Un cas de test d&#39;examen<em&gt; Coffea Arabica</em&gt; Graines

Carboxylic acids are organic acids containing one or more terminal carboxyl (COOH) functional groups. Short chain carboxylic acids (SCCAs; carboxylic ...

Raman and IR Spectroelectrochemical Methods as Tools to Analyze Conjugated Organic Compounds

In the presented work, two spectroelectrochemical techniques are discussed as tools for the analysis of the structural changes occurring in the molecule on the vibrational level of energy. Raman and IR spectroelectrochemistry can be used for advanced characterization of the structural changes in the organic electroactive compounds. Here, the step-by-step analysis by means of Raman and IR spectroelectrochemistry is shown. Raman and IR spectroelectrochemical techniques provide complementary information about structural changes occurring during an electrochemical process, i.e. allows for the investigation of redox processes and their products. The examples of IR and Raman spectroelectrochemical analysis are presented, in which the products of the redox reactions, both in solution and solid state, are identified.

A protocol of step-by-step Raman and IR spectroelectrochemical analysis is presented.

Raman et IR spectroélectrochimiques méthodes comme outils pour analyser les composés organiques conjugués

In the presented work, two spectroelectrochemical techniques are discussed as tools for the analysis of the structural changes occurring in the molecule ...

A Two-Step Pyrolysis-Gas Chromatography Method with Mass Spectrometric Detection for Identification of Tattoo Ink Ingredients and Counterfeit Products

Tattoo inks are complex mixtures of ingredients. Each of them possesses different chemical properties which have to be addressed upon chemical analysis. In this method for two-step pyrolysis online coupled to gas chromatography mass spectrometry (py-GC-MS) volatile compounds are analyzed during a first desorption run. In the second run, the same dried sample is pyrolyzed for analysis of non-volatile compounds such as pigments and polymers. These can be identified by their specific decomposition patterns. Additionally, this method can be used to differentiate original from counterfeit inks. Easy screening methods for data evaluation using the average mass spectra and self-made pyrolysis libraries are applied to speed up substance identification. Using specialized evaluation software for pyrolysis GS-MS data, a fast and reliable comparison of the full chromatogram can be achieved. Since GC-MS is used as separation technique, the method is limited to volatile substances upon desorption and after pyrolysis of the sample. The method can be applied for quick substance screening in market control surveys since it requires no sample preparation steps.

This method for two-step pyrolysis online coupled to gas chromatography with mass spectrometric detection and data evaluation protocol can be used for multi-component analysis of tattoo inks and discrimination of counterfeit products.

Méthode de chromatographie en phase gazeuse en deux étapes avec détection spectrométrique de masse pour l’identification des ingrédients d’encre de tatouage et des produits contrefaits

Tattoo inks are complex mixtures of ingredients. Each of them possesses different chemical properties which have to be addressed upon chemical analysis. ...

Nitrogen Compound Characterization in Fuels by Multidimensional Gas Chromatography

Certain nitrogen-containing compounds can contribute to fuel instability during storage. Hence, detection and characterization of these compounds is crucial. There are significant challenges to overcome when measuring trace compounds in a complex matrix such as fuels. Background interferences and matrix effects can create limitations to routine analytical instrumentation, such as GC-MS. In order to facilitate specific and quantitative measurements of trace nitrogen compounds in fuels, a nitrogen-specific detector is ideal. In this method, a nitrogen chemiluminescence detector (NCD) is used to detect nitrogen compounds in fuels. NCD utilizes a nitrogen-specific reaction that does not involve the hydrocarbon background. Two-dimensional (GCxGC) gas chromatography is a powerful characterization technique as it provides superior separation capabilities to one-dimensional gas chromatography methods. When GCxGC is paired with a NCD, the problematic nitrogen compounds found in fuels can be extensively characterized without background interference. The method presented in this manuscript details the process for measuring different nitrogen-containing compound classes in fuels with little sample preparation. Overall, this GCxGC-NCD method has been shown to be a valuable tool to enhance the understanding of the chemical composition of nitrogen-containing compounds in fuels and their impact on fuel stability. The % RSD for this method is &#60;5% for intraday and &#60;10% for interday analyses; the LOD is 1.7 ppm and the LOQ is 5.5 ppm.

Here, we present a method utilizing two-dimensional gas chromatography and nitrogen chemiluminescence detection (GCxGC-NCD) to extensively characterize the different classes of nitrogen-containing compounds in diesel and jet fuels.

Caractérisation des composés azotés dans les carburants par chromatographie multidimensionnelle du gaz

Certain nitrogen-containing compounds can contribute to fuel instability during storage. Hence, detection and characterization of these compounds is ...