Aucun financement à déclarer.

La procédure de muscle squelettique comme décrit suit les lignes directrices de l&#39;Institutional Review Board Appalachian State University. NOTE: L&#39;équipe se compose d&#39;un opérateur (Ph.D. ou MD formés à la technique de biopsie), et au moins un, mais idéalement, trois ou plusieurs techniciens. L&#39;exploitant est responsable de la conduite et la supervision de tous les aspects de la procédure de biopsie de muscle squelettique. Un technicien (technicien n ° 1) est immédiatement chargé d&#39;aider l&#39;opérateur à tous les aspects de l&#39;extraction du muscle. Il doit notamment être les &quot;mains non stériles&quot; et appliquer une aspiration avec une seringue stérile. Un deuxième technicien (technicien n ° 2) engage la conversation avec le sujet et massages des jambes en face de l&#39;objet durant la procédure afin de minimiser l&#39;anxiété du sujet. Le troisième technicien (technicien 3 #) est responsable de la gestion et de traitement de l&#39;échantillon de muscle squelettique. Mesures analytiques en aval dictent combien de suppional techniciens sont nécessaires pour le traitement / la préparation de l&#39;échantillon de muscle squelettique. 1 Sous réserve Préparation <ol><li> Recueillir, préparer et organiser les matériaux spécifiés pour la procédure de biopsie musculaire (tableau 1). Décontaminer et stériliser l&#39;aiguille Bergström (de canule externe et interne trocart) et le piston selon la pratique standard 16. </li><li> Examiner le formulaire de consentement avec le sujet. La partie de la biopsie du muscle squelettique du consentement à la forme utilisée à l&#39;Appalachian State University Participer est fourni en supplément en ligne 1. <ol><li> Parlez-en à la question sur les aspects généraux de la procédure de biopsie musculaire avec un accent sur les risques possibles de la procédure, la préparation de la peau, l&#39;application de l&#39;anesthésie, des sensations typiques. Demandez au sujet de lire attentivement le consentement à participer forme et signer pour confirmer que la conception et les procédures étude sont compris. </li></ol></li><li> Assurez-vous que les sous réserve n&#39;est pas allergique à &quot;___ caine&quot; médicament de type (par exemple, la lidocaïne). </li><li> Demandez au sujet de mentir sur le dos sur une table matelassée avec la cuisse exposée. Placez deux alèses absorbantes jetables avec support en plastique sous la jambe du sujet. Placez la jambe d&#39;une manière détendue avec un petit rouleau de serviette sous le talon, de sorte que le genou est en extension complète (élevé ~ 1 cm), plaçant ainsi le vaste externe dans une position raccourcie. </li><li> Demandez à l&#39;opérateur de charger l&#39;objet de contracter momentanément le muscle de la cuisse exposés, afin que le site de la biopsie peut être visualisée. Remarque: le vastus lateralis site de biopsie est juste en avant du fascia lata (la bande illiotibial), environ un tiers de la distance entre le haut de la rotule et du grand trochanter 7. </li><li> Porter la marque de l&#39;opérateur juste en dessous (~ 0,5 cm), le site de l&#39;incision avec un marqueur permanent pointe fine. </li><li> Avez l&#39;opérateur de déterminer l&#39;épaisseur du pli cutané approximative par pinching le pli. </li><li> Avoir l&#39;opérateur et techniciens se lavent les mains avec de l&#39;eau tiède et du savon et enfiler des gants jetables. </li><li> Demandez à l&#39;opérateur enlever les poils d&#39;une région ~ 15 cm x 15 cm autour du site de la biopsie (via tondeuses). Remarque: tondre les poils du site de biopsie empêche les cheveux de pénétrer dans l&#39;incision au cours de la procédure et lors de la fermeture, et l&#39;épilation permet un meilleur contact entre les fermetures de bande et de la peau (voir 3.4). </li><li> Demandez à l&#39;opérateur stériliser la zone avec des tampons pré-imbibé d&#39;un antiseptique topique, (comme la povidone-iode ou le gluconate de chlorhexidine pour les sujets allergiques à l&#39;iode / coquillages). Commencez par le centre et travailler en cercles concentriques vers le bord extérieur de la zone rasée. Au minimum, répéter deux fois avec un nouveau coton-tige pré-imbibé chaque fois. </li></ol> 2. procédure de biopsie <ol><li> Demandez à l&#39;opérateur enlever des gants jetables, se laver les mains avec de l&#39;eau chaude et au savon, et Don gl chirurgical stérileoves utilisant une technique aseptique. </li><li> Avez-technicien n ° 1 présente le drapé fenêtré stérile à l&#39;opérateur. Avoir l&#39;opérateur, en utilisant une technique aseptique, placer le drap sur le site de la biopsie pour maintenir un champ stérile. </li><li> Avez-technicien n ° 1 présente l&#39;opérateur une seringue de 5 ml munie d&#39;une aiguille 21 G, tout en maintenant une technique aseptique. Nettoyez le dessus du flacon de lidocaïne avec un tampon imbibé d&#39;alcool. <ol><li> Demandez à l&#39;opérateur retire immédiatement 5 ml de lidocaïne. Retirez l&#39;aiguille 21 G de la seringue et jeter la seringue dans un récipient prévu à. </li><li> Avez-technicien n ° 1 présente l&#39;opérateur avec une aiguille G 1 ½ pouce 25, tout en maintenant une technique aseptique. Avoir la place de l&#39;opérateur de l&#39;aiguille de pouce de 1 ½ sur la seringue et évacuer les bulles d&#39;air de la seringue. </li></ol></li><li> Avoir le chlorure d&#39;éthyle technicien n ° 1 de pulvérisation sur le site de l&#39;incision (~ 0,5 cm au-dessus de la marque à l&#39;encre indélébile sur la peau) jusqu&#39;à ce que la peau semble «blanchir». <ol><li> Have l&#39;opérateur d&#39;insérer l&#39;aiguille à peu près horizontale à la peau dans le derme, aspirer l&#39;aiguille, puis infiltrer avec ~ 100 pi de la lidocaïne pour produire un &quot;bulle&quot; de 2-4 mm de diamètre. <ol><li> Avoir la ponction de l&#39;opérateur de l&#39;aiguille (légèrement retirer le piston de la seringue) pour confirmer que l&#39;aiguille n&#39;a pas été placé dans un vaisseau sanguin. Si du sang apparaît dans la seringue, retirer l&#39;aiguille, jetez dans un conteneur à aiguilles, et recommencer à 2,3. </li><li> Faire avancer l&#39;opérateur l&#39;aiguille dans le tissu sous-cutané, aspirer l&#39;aiguille, puis infiltrer le tissu avec ~ 1 ml de lidocaïne pour former une bulle. Une fois que la bulle a disparu, insérer l&#39;aiguille de 1 ½ pouce sur la seringue de lidocaïne chargé verticalement dans le site de l&#39;incision, l&#39;arrêt de surface du fascia lata. Remarque: Le sujet peut ressentir une légère sensation de picotement momentanée lors de l&#39;injection initiale de la lidocaïne (semblable à une piqûre d&#39;abeille). </li></ol></li><li> Assurez-vous que l&#39;opératou ne s&#39;infiltre pas le muscle avec lidocoine parce qu&#39;il est myotoxiques 17-19. </li><li> Avoir la ponction de l&#39;opérateur de l&#39;aiguille et injecter lentement les 4 ml restants de la lidocaïne tout en retirant l&#39;aiguille de la cuisse. Placer la gaze stérile sur le site d&#39;injection et laisser le sujet à se détendre tout en l&#39;anesthésique local prend effet. </li></ol></li><li> Après 2-3 min, avoir technicien n ° 1 présente l&#39;opérateur d&#39;un scalpel, tout en maintenant une technique aseptique. <ol><li> Avoir l&#39;opérateur sonder légèrement le site de la biopsie avec la pointe du scalpel pour confirmer que la zone est anesthésiée. Si nécessaire, injecter encore 3-4 ml de lidocaïne dans le site de l&#39;incision, voir 2.4.1.2. </li></ol></li><li> Demandez à l&#39;opérateur faire une ligne droite de 1 cm incision à travers la peau et des tissus sous-cutanés (~ 2-3 mm au-dessus de la marque d&#39;encre) parallèle au fémur. <ol><li> Demandez à l&#39;opérateur d&#39;insérer le scalpel profond de faire une incision à travers le fascia dans le muscle. Pour ce faire, une fois dans chaque direction<html> . Remarque: Le sujet peut se sentir un pincement ou une pression à la coupe plus profonde si la lame coupe de scalpel dans le muscle. </li><li> Avoir technicien # 2 engager le sujet dans la conversation et masser la jambe opposée. </li></ol></li><li> Avoir la place de l&#39;opérateur une quantité généreuse de gaze stérile sur le site de l&#39;incision et la biopsie et d&#39;appliquer une pression directe sur l&#39;incision pour réduire les saignements. <ol><li> Avez technicien # 1 connecter le robinet à 3 voies de métal à l&#39;jetable seringue de 60 ml et tube d&#39;extension de 30 cm (Figure 1). </li><li> Avez-technicien n ° 1 connectez une extrémité de la conique tube en plastique connecteur dans l&#39;extrémité libre du tube d&#39;extension et insérez fermement l&#39;autre extrémité de la conique tube en plastique connecteur dans la grande extrémité d&#39;une pointe de pipette 200 ul de ~ 15-18 mm de la pointe coupée. </li></ol></li></ol>jpg &quot;width =&quot; 500 &quot;/&gt; La figure 1 de l&#39;aiguille Bergström. (A) L&#39;aiguille Bergström (5 mm) est composé de (a) la canule externe et (b) un trocart interne, les composants associés comprennent (c) piston, (d) de 200 ul de la pointe de pipette avec ~ 15 à 18 mm coupé , (e) conique connecteur en plastique, (f) robinet à 3 voies de métal, (g) de la tubulure d&#39;extension de 30 cm, et (h) à usage unique de 60 ml seringue (B). L&#39;aiguille Bergström (5 mm) et des composants associés assemblé. ( C) Le trocart interne de l&#39;aiguille Bergström (5 mm) à environ 1 cm retiré ouvre la fenêtre de la canule externe. <ol start="9"><li> Après le saignement a cessé, ont technicien # 1 Ouvrir la pochette de stérilisée en autoclave et de présenter l&#39;aiguille de biopsie de 5 mm et trocart interne (Figure 1) à l&#39;opérateur tout en conservant une technique aseptique. <ol><li> Avez l&#39;opérateur monter l&#39;aiguille (canule extérieure et intérieure trocart), vérifier l&#39;alignement et de l&#39;action de glissement. </li> &lt;/ Ol&gt; </li><li> Avoir l&#39;opérateur fermement maintenir l&#39;ensemble de l&#39;aiguille (canule extérieure et intérieure trocart) avec les deux mains pour empêcher le trocart interne de tourner. Avez-technicien n ° 1 insérez fermement l&#39;embout de pipette de coupe dans le haut de la partie intérieur de trocart de l&#39;aiguille de biopsie avec un léger mouvement de rotation vers le bas. Assurez-vous que technicien n ° 1 ne touche pas l&#39;exploitant ou l&#39;aiguille de biopsie, que la pointe de la pipette. </li><li> Avoir l&#39;opérateur introduit l&#39;aiguille de biopsie dans le tissu à travers l&#39;incision. Localisez l&#39;incision dans le fascia (une «sensation» acquis) avec la pointe de l&#39;aiguille de biopsie. Avancer l&#39;aiguille juste après l&#39;angle de bord, puis l&#39;aiguille vers le bas vers le sol que l&#39;aiguille est avancé dans le muscle. Note: Les sujets peuvent ressentir une certaine gêne légère (par exemple, &quot;la pression profonde,&quot; ou légère sensation de crampes) que l&#39;incision à travers le fascia est situé à la pointe de l&#39;aiguille de biopsie et l&#39;aiguille est avancé dans le muscle. <ol> &lt;li&gt; Vous avez technicien # 2 instruire le sujet à rester «détendu» et de ne pas contracter leurs muscles de la cuisse tandis que l&#39;opérateur avance l&#39;aiguille dans le muscle. </li></ol></li><li> Une fois que l&#39;aiguille de biopsie est en position, que le signal de l&#39;opérateur N ° 1 technicien pour ouvrir la seringue jetable de 60 ml. <ol><li> Avez-technicien n ° 1 tirer rapidement le jetable seringue de 60 ml ouvert à la marque de 40-50 cc pour créer une dépression dans l&#39;aiguille de biopsie. </li><li> Demandez à l&#39;opérateur tirer le trocart interne sur environ 1 cm pour ouvrir la fenêtre de la canule externe tout en maintenant la position du trocart extérieur dans le muscle. Demandez à l&#39;opérateur de fermer rapidement le trocart interne à couper (clip) et prélever l&#39;échantillon de muscle. Que le signal de l&#39;opérateur n ° 1 technicien pour libérer aspiration. </li><li> Avez-technicien n ° 1 ouvrir le robinet de la salle de libérer l&#39;aspiration. </li><li> Avoir l&#39;opérateur tourner l&#39;aiguille de biopsie 90 ° et répéter le processus. Si nécessaire, avoir le REPEA opérateurt la procédure de rotation jusqu&#39;à 3 fois (pour un total de quatre pinces). </li></ol></li><li> Demandez à l&#39;opérateur s&#39;applique contre-pression directe sur la plaie avec de la gaze stérile tout en retirant l&#39;aiguille de biopsie de la cuisse, en faisant attention de ne pas attraper fascia ou de la peau. Si une résistance importante se fait sentir, retailler tout en appliquant un mouvement de torsion pour le trocart interne. </li><li> Lors du retrait de l&#39;aiguille de biopsie de la cuisse, l&#39;opérateur dispose tirer le trocart interne arrière 1 cm à une inspection visuelle de la lumière de la canule extérieure à estimer si une quantité suffisante de tissu a été recueilli. <ol><li> Avoir la main de l&#39;opérateur de l&#39;aiguille de biopsie au technicien n ° 1. Pour maintenir une technique aseptique s&#39;assurer que technicien n ° 1 ne touche que l&#39;aiguille, pas l&#39;opérateur. Avez-technicien n ° 1 main l&#39;aiguille de biopsie au technicien # 3. </li></ol></li><li> Avoir technicien # 3 enlever le tissu de l&#39;aiguille de biopsie. <ol><li> Avoir technicien # 3 utilisation du piston (figure 1) et une paire de pince fine pointe defaire en sorte que tout le tissu musculaire est retiré du trocart interne et la canule externe. </li><li> Avez technicien # 3 peser rapidement l&#39;échantillon pour confirmer qu&#39;une quantité adéquate de tissu musculaire ont été recueillis et placer les échantillons sur un bloc de dissection glacée. </li></ol></li><li> Vous avez technicien # 3 disséquer soigneusement le tissu conjonctif et la graisse visible à partir des échantillons de muscle. Avez-technicien n ° 3 préparer les échantillons de muscle pour le stockage selon les analyses en aval. Par exemple, placer immédiatement les échantillons dans un tube cryogénique et enclenchez gel dans de l&#39;azote liquide, monter et congeler pour l&#39;histologie, ou dans un tube cryogénique avec un inhibiteur de RNase, etc </li><li> Si nécessaire, répétez la procédure avec une deuxième aiguille de biopsie stérilisé tout en conservant une technique aseptique. </li></ol> 3. Clôture <ol><li> Demandez à l&#39;opérateur appliquer une pression directe sur le site de la biopsie avec une gaze stérile et un sac de glace pendant 10-15 min. </li><li> Une fois l&#39;hémostase, demander au conducteur de la consommation d&#39;alcool prplaquettes de ep pour enlever le sang séché de la région autour de l&#39;incision. </li><li> Avez-technicien n ° 1 présente un tube de colle chirurgicale d&#39;actualité et d&#39;application à l&#39;opérateur. Demandez à l&#39;opérateur assembler le tube de colle chirurgicale et d&#39;application sans toucher le bout de l&#39;applicateur ou de la partie supérieure du tube. </li><li> Avoir l&#39;opérateur tire l&#39;incision fermée avec une main tout en appliquant une couche unique d&#39;adhésif chirurgical sur la partie supérieure de l&#39;incision à sec avec l&#39;autre main. Après l&#39;adhésif durcit (~ 90 sec), appliquer le ruban closuresperpendicular à l&#39;incision. Sinon, fermez l&#39;incision avec deux sutures 4-0 stériles. </li><li> Demandez à l&#39;opérateur appliquer une pression directe en plaçant 3 à 4 fév &quot;x 2&quot; tampons de gaze non-stériles sur le site de l&#39;incision et le fixer avec une pellicule adhésive autocollante. </li><li> Demandez à l&#39;opérateur de fournir la matière verbale et des instructions écrites sur le soin des plaies appropriée, des réactions normales et anormales, et les lignes directrices de l&#39;activité pour les suivants de 1 à 4 jours (voir en ligne supplement 2). </li></ol>

<ol>
	<li>Duchene, G. B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recherches+sur+la+paralysie+musculaire+pseudohypertrophique+ou+paralysie+myo-sclerosique.">Recherches sur la paralysie musculaire pseudohypertrophique ou paralysie myo-sclerosique.</a> Arch Gen Med. 11 (30), (1868).</li><li>Bergstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+electrolytes+in+man.+Determined+by+neutron+activation+analysis+on+needle+biopsy+specimens.">Muscle electrolytes in man. Determined by neutron activation analysis on needle biopsy specimens.</a> Scand J Clin Lab Invest (England). 14, (1962).</li><li>Bergstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Percutaneous+needle+biopsy+of+skeletal+muscle+in+physiological+and+clinical+research).">Percutaneous needle biopsy of skeletal muscle in physiological and clinical research).</a> Scand J Clin Lab Invest. 35, 609-616 (1975).</li><li>Bergstrom, J., Hultman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+study+of+the+glycogen+metabolism+during+exercise+in+man.">A study of the glycogen metabolism during exercise in man.</a> Scand J Clin Lab Invest. 19, 218-228 (1967).</li><li>Evans, W. J., Phinney, S. D., Young, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suction+applied+to+a+muscle+biopsy+maximizes+sample+size.">Suction applied to a muscle biopsy maximizes sample size.</a> Med Sci Sports Exerc. 14, 101-102 (1982).</li><li>Hennessey, J. V., Chromiak, J. A., Della Ventura, S., Guertin, J., MacLean, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increase+in+percutaneous+muscle+biopsy+yield+with+a+suction-enhancement+technique.">Increase in percutaneous muscle biopsy yield with a suction-enhancement technique.</a> J Appl Phys. 82, 1739-1742 (1997).</li><li>Tarnopolsky, M. A., Pearce, E., Smith, K., Lach, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suction-modified+Bergstrom+muscle+biopsy+technique:+experience+with+13,500+procedures.">Suction-modified Bergstrom muscle biopsy technique: experience with 13,500 procedures.</a> Muscl., &amp; Nerve. 43, 717-725 (2011).</li><li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbohydrate+ingestion+influences+skeletal+muscle+cytokine+mRNA+and+plasma+cytokine+levels+after+a+3-h+run.">Carbohydrate ingestion influences skeletal muscle cytokine mRNA and plasma cytokine levels after a 3-h run.</a> J Appl Physiol. 94, 1917-1925 (2003).</li><li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+carbohydrate+ingestion+on+immune+changes+after+2+h+of+intensive+resistance+training.">Influence of carbohydrate ingestion on immune changes after 2 h of intensive resistance training.</a> J Appl Physiol. 96, 1292-1298 (2004).</li><li>Utter, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbohydrate+supplementation+and+perceived+exertion+during+prolonged+running.">Carbohydrate supplementation and perceived exertion during prolonged running.</a> Med Sci Sports Exerc. 36, 1036-1041 (2004).</li><li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+cytokine+mRNA+changes+after+2.5+h+of+cycling:+influence+of+carbohydrate.">Muscle cytokine mRNA changes after 2.5 h of cycling: influence of carbohydrate.</a> Med Sci Sports Exerc. 37, 1283-1290 (2005).</li><li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+quercetin+and+EGCG+on+mitochondrial+biogenesis+and+immunity.">Effects of quercetin and EGCG on mitochondrial biogenesis and immunity.</a> Med Sci Sports Exerc. 41, 1467-1475 (2009).</li><li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quercetin's+Influence+on+Exercise+Performance+and+Muscle+Mitochondrial+Biogenesis.">Quercetin's Influence on Exercise Performance and Muscle Mitochondrial Biogenesis.</a> Med Sci Sports Exerc. 42, 338-345 (2010).</li><li>Dumke, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quercetin's+effect+on+cycling+efficiency+and+substrate+utilization.">Quercetin's effect on cycling efficiency and substrate utilization.</a> Appl Physiol Nut Metab. 34, 993-1000 (2009).</li><li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quercetin's+influence+on+exercise-induced+changes+in+plasma+cytokines+and+muscle+and+leukocyte+cytokine+mRNA.">Quercetin's influence on exercise-induced changes in plasma cytokines and muscle and leukocyte cytokine mRNA.</a> J Appl Physiol. 103, 1728-1735 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guideline+for+Disinfection+and+Sterilization+in+Healthcare+Facilities.">Guideline for Disinfection and Sterilization in Healthcare Facilities.</a> http://www.cdc.gov/hicpac/Disinfection_Sterilization/toc.html. , (2008).</li><li>Faria, F. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+onset+and+duration+of+mobilization+affect+the+regeneration+in+the+rat+muscle.">The onset and duration of mobilization affect the regeneration in the rat muscle.</a> Histol Histopath. 23, 565-571 (2008).</li><li>Carlson, B. M., Shepard, B., Komorowski, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+histological+study+of+local+anesthetic-induced+muscle+degeneration+and+regeneration+in+the+monkey.">A histological study of local anesthetic-induced muscle degeneration and regeneration in the monkey.</a> J Ortho Res. 8, 485-494 (1990).</li><li>Yagiela, J. A., Benoit, P. W., Buoncristiani, R. D., Peters, M. P., Fort, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+myotoxic+effects+of+lidocaine+with+epinephrine+in+rats+and+humans.">Comparison of myotoxic effects of lidocaine with epinephrine in rats and humans.</a> Anesth Analg. 60, 471-480 (1981).</li><li>Coyle, E. F., Coggan, A. R., Hemmert, M. K., Ivy, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+glycogen+utilization+during+prolonged+strenuous+exercise+when+fed+carbohydrate.">Muscle glycogen utilization during prolonged strenuous exercise when fed carbohydrate.</a> J Appl Physiol. 61, 165-172 (1986).</li><li>Gibala, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brief+intense+interval+exercise+activates+AMPK+and+p38+MAPK+signaling+and+increases+the+expression+of+PGC-1alpha+in+human+skeletal+muscle.">Brief intense interval exercise activates AMPK and p38 MAPK signaling and increases the expression of PGC-1alpha in human skeletal muscle.</a> J Appl Physiol. 106, 929-934 (1985).</li><li>Phillips, S. M., Tipton, K. D., Ferrando, A. A., Wolfe, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistance+training+reduces+the+acute+exercise-induced+increase+in+muscle+protein+turnover.">Resistance training reduces the acute exercise-induced increase in muscle protein turnover.</a> Am J Physiol. 276, 118-124 (1999).</li><li>Davis, J. M., Murphy, E. A., Carmichael, M. D., Davis, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quercetin+increases+brain+and+muscle+mitochondrial+biogenesis+and+exercise+tolerance.">Quercetin increases brain and muscle mitochondrial biogenesis and exercise tolerance.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 296, 1071-1077 (2009).</li><li>Vissing, K., Andersen, J. L., Schjerling, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Are+exercise-induced+genes+induced+by+exercise.">Are exercise-induced genes induced by exercise.</a> FASEB J. 19, 94-96 (2005).</li><li>Lundby, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+in+human+skeletal+muscle:+alternative+normalization+method+and+effect+of+repeated+biopsies.">Gene expression in human skeletal muscle: alternative normalization method and effect of repeated biopsies.</a> Eur J Appl Physiol. 95, 351-360 (2005).</li><li>Coyle, E. F., Coggan, A. R., Hemmert, M. K., Ivy, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+glycogen+utilization+during+prolonged+strenuous+exercise+when+fed+carbohydrate.">Muscle glycogen utilization during prolonged strenuous exercise when fed carbohydrate.</a> J Appl Physiol. 61, 165-172 (1985).</li></ol>

The authors have no conflicts of interest.

Cette vidéo présente un résumé étape par étape de la procédure de biopsie de muscle squelettique utilisée au Laboratoire de performance humaine ASU. Cette procédure, avec de petites modifications, a été utilisé pour recueillir environ 1 600 biopsies musculaires au cours des 13 dernières années. Les échantillons de biopsies musculaires ont fourni des données importantes dans les enquêtes sur la base de nutrition sportive, menant à des découvertes importantes de la recherche. <p class="jove_content"...

La technique de la biopsie percutanée ou «semi-ouverte» est utilisé pour obtenir des échantillons de tissus squelettiques musculaire de patients humains et des sujets de recherche. Duchenne (1806-1875) est considéré comme le premier à construire une aiguille avec un trocart pour obtenir le muscle squelettique de sujets vivants par biopsie percutanée 1. Dans les années 1960, Bergström introduit une aiguille de biopsie percutanée similaire à celle décrite par Duchenne 4.2. Vingt ans après, Evans et al. Jour 5 la technique en appliquant une aspiration à travers le trocart de coupe de l&#39;aiguille Bergström. Cette modification peut améliorer le rendement de tissu de 3 à 5 fois 6,7 et est utilisé dans le cadre de recherches cliniques et biomédicales. Cette technique a et continuera de favoriser le diagnostic des myopathies et notre compréhension de la structure et de la fonction du muscle squelettique. La technique de biopsie musculaire percutanée est straightforward. Une fois fait correctement, dans le respect strict de la technique aseptique, les risques associés sont minimes. La procédure de biopsie musculaire est considéré comme un outil expérimental pour des projets de recherche. Certains établissements d&#39;enseignement permettent une formation des chercheurs universitaires avec un doctorat, sous la supervision directe d&#39;un médecin, d&#39;obtenir des biopsies musculaires et d&#39;autres exigent un médecin conseil certifié pour effectuer la technique. L&#39;équipe de biopsie ASU a réalisé avec succès plus de 1600 biopsies musculaires au cours des 13 dernières années 8-15. Le but de cette vidéo est de décrire l&#39;aiguille Bergström modifié muscle percutanée technique de biopsie 5 pour obtenir des échantillons de tissus du muscle squelettique de muscle vaste externe de sujets humains.

<table><tbody><tr><td>Bergstr&amp;ouml;m biopsy needle, 5 x 100 mm</td><td>Stille Surgical Inc.</td><td>119-29187-50</td><td>1 ea</td></tr><tr><td>Durasorb blue pad</td><td>Fisher</td><td>22-031-340</td><td>case of 300</td></tr><tr><td>Prep razor disposable</td><td>Moore Medical</td><td>89760</td><td>1 ea</td></tr><tr><td>Shave cream</td><td>Moore Medical</td><td>92869</td><td>1 can</td></tr><tr><td>Alcohol swab</td><td>Moore Medical</td><td>98721</td><td>box/200</td></tr><tr><td>Povidone-iodine swabsticks (3 pack)</td><td>Moore Medical</td><td>90691</td><td>pack of 50</td></tr><tr><td>Face masks</td><td>Fisher</td><td>19-039-690</td><td>case of 50</td></tr><tr><td>Sterile gloves; sz 6.5</td><td>Moore Medical</td><td>68128</td><td>box of 50 pairs</td></tr><tr><td>Sterile gloves; sz 7.0</td><td>Moore Medical</td><td>68129</td><td>box of 50 pairs</td></tr><tr><td>Sterile gloves; sz 8.5</td><td>Moore Medical</td><td>68132</td><td>box of 50 pairs</td></tr><tr><td>Fenestrated towel drape</td><td>Moore Medical</td><td>92712</td><td>case of 50</td></tr><tr><td>Lidocaine (1% HCl, w/o Epi)</td><td>Dealmed</td><td>427902</td><td>30 cc vial</td></tr><tr><td>Ethyl chloride spray</td><td>Dealmed</td><td>386020</td><td>3.5 fl. Oz. bottle</td></tr><tr><td>5 ml syringe w/ 21 G needle</td><td>Fisher</td><td>14-827-48</td><td>case of 100</td></tr><tr><td>25 G 5/8&quot; needle</td><td>Fisher</td><td>14-826AA</td><td>case of 100</td></tr><tr><td>25 G 1 1/2&quot; needle</td><td>Fisher</td><td>14-826-49</td><td>case of 100</td></tr><tr><td>Single-use scalpels w/ #11 blade</td><td>Fisher</td><td>0-8927-5B</td><td>box of 20</td></tr><tr><td>60 ml Syringe</td><td>Fisher</td><td>13-689-8</td><td>case of 40</td></tr><tr><td>~30 inch extension tubing</td><td>Fisher</td><td>14-169-7A</td><td>roll of 50 ft</td></tr><tr><td>Metal stopcock</td><td>Fisher</td><td>01-290-38</td><td>each</td></tr><tr><td>Polypropylene tubing connector w/ tapered ends, 3.2 to 5.5 mm</td><td>Fisher</td><td>15-315-28A</td><td>case of 100</td></tr><tr><td>Yellow pipette tips (1-200 &amp;micro;l)</td><td>Fisher</td><td>02-681-2</td><td>cut off ~15-18 mm of the tip</td></tr><tr><td>Topical surgical adhesive</td><td>Medline</td><td>MSC091076</td><td>case of 36 tubes</td></tr><tr><td>Topical surgical adhesive</td><td>Medline</td><td>MSC091076Z</td><td>box of 6 tubes</td></tr><tr><td>Butterfly stitches (adhesive strips) 1/2&quot; x 4&quot; (6 per pack)</td><td>Moore Medical</td><td>93050</td><td>box/300</td></tr><tr><td>Bandadge, Strip, 3/4 x 3 in.</td><td>Fisher</td><td>19-027-202</td><td>pack of 100</td></tr><tr><td>Adhesive bandage (5 m rolls)</td><td>Fisher</td><td>19-027-768</td><td>case of 36</td></tr><tr><td>1&quot; paper surgical tape</td><td>Fisher</td><td>19-027-761</td><td>case of 12</td></tr><tr><td>Sutures (4-0 reverse cutting, FS2)</td><td>Moore Medical</td><td>82926</td><td>box of 36</td></tr><tr><td>4 x 4 Sterile gauze pads</td><td>Moore Medical</td><td>66949</td><td>pkg/50</td></tr><tr><td>2 x 2 Non-sterile gauze pads</td><td>Moore Medical</td><td>37336</td><td>pkg/200</td></tr><tr><td>3 x 4 Non-adherent pads</td><td>Moore Medical</td><td>74389</td><td>bx/100</td></tr><tr><td>Autoclave bags 3.5 x 9</td><td>Moore Medical</td><td>40390</td><td>box of 200</td></tr><tr><td>Autoclave bags 5.25 x 10</td><td>Moore Medical</td><td>40391</td><td>box of 200</td></tr><tr><td>Autoclave indicator tape</td><td>Moore Medical</td><td>31608</td><td>box of 250</td></tr><tr><td>Lab coats&amp;mdash;small</td><td>Fisher</td><td>23-900-520A&amp;nbsp;</td><td>10/pk</td></tr><tr><td>Lab coats&amp;mdash;medium</td><td>Fisher</td><td>23-900-520B&amp;nbsp;</td><td>10/pk</td></tr><tr><td>Lab coats&amp;mdash;large</td><td>Fisher</td><td>23-900-520C&amp;nbsp;</td><td>10/pk</td></tr><tr><td>Germicidal Disposable Cloth Wipes</td><td>Moore Medical</td><td>62879</td><td>Can/160</td></tr></tbody></table>

human skeletal muscle biopsy procedures using the modified bergstr&#246;m technique

La technique de la biopsie percutanée permet aux chercheurs et aux cliniciens de recueillir des échantillons de tissus du muscle squelettique. La technique est sûre et très efficace. Cette vidéo décrit la technique de biopsie percutanée à l&#39;aide d&#39;une aiguille Bergström modifié pour obtenir des échantillons de tissus squelettiques musculaire du muscle vaste externe de sujets humains. L&#39;aiguille est constituée d&#39;un Bergström canule extérieure avec une petite ouverture («fenêtre») sur le côté de la pointe et un trocart intérieur avec une lame de coupe à l&#39;extrémité distale. Dans des conditions d&#39;asepsie et d&#39;anesthésie locale, l&#39;aiguille est avancée dans le muscle squelettique par une incision dans la peau, le tissu sous-cutané, et le fascia. Ensuite, l&#39;aspiration est appliquée à la trocart interne, le trocart extérieur est tiré vers l&#39;arrière, le tissu musculaire squelettique est aspiré dans la fenêtre de la canule extérieure par l&#39;aspiration, et le trocart intérieur est rapidement fermé, coupe ou clipsage l&#39;échantillon de tissu musculaire squelettique ainsi . L&#39;aiguille est tourné de 90 °60, et une autre coupe. Ce processus peut être répété trois fois de plus. Cette technique de coupe multiple produit habituellement un échantillon de 100-200 mg ou plus chez des sujets sains et peut se faire immédiatement avant, pendant, et après une période d&#39;exercice ou d&#39;une autre intervention. Après pansement post-biopsie du site de l&#39;incision, les sujets reprennent généralement leurs activités de la vie quotidienne tout de suite et puissent participer pleinement à l&#39;activité physique vigoureuse dans les 48-72 heures. Les sujets doivent éviter lourde exercice de résistance pendant 48 heures pour réduire le risque de hernie du muscle à travers l&#39;incision dans le fascia.

La biopsie musculaire tel que décrit ci-dessus permet au chercheur de recueillir rapidement et de manière cohérente des échantillons de tissu du muscle squelettique. Le rendement typique chez des sujets sains de sport est de 200 mg ou plus en une seule passe avec 3-4 clips. La procédure prend 15 à 20 min, la majeure partie est consacrée à la préparation de l&#39;incision. Dans les études à base de l&#39;exercice physique, des échantillons de muscle sont souvent prises avant et après l&#39;exercice, avec une...

Watch this Scientific Journal Video about Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified BergstrÃ¶m Technique at JoVE.com

Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified Bergstr&#246;m Technique

The purpose of this video is to present the modified Bergstr&#246;m skeletal muscle biopsy technique on human subjects.

Procédures Muscle squelettique humain biopsie aide de la technique de modification Bergström

The percutaneous biopsy technique enables researchers and clinicians to collect skeletal muscle tissue samples. The technique is safe and highly ...

human-skeletal-muscle-biopsy-procedures-using-modified-bergstrm

Research

JoVE Journal

Medicine

39.8K vues.  Appalacian State University. The purpose of this video is to present the modified Bergström skeletal muscle biopsy technique on human subjects. 

Vidéo: Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified Bergström Technique

Isolation and Quantitative Immunocytochemical Characterization of Primary Myogenic Cells and Fibroblasts from Human Skeletal Muscle

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated from human muscle biopsy samples using enzymatic digestion and their myogenic properties studied in culture. Quantitatively, the two main adherent cell types obtained from enzymatic digestion are: (i) the satellite cells (termed myogenic cells or muscle precursor cells), identified initially as CD56+ and later as CD56+/desmin+ cells and (ii) muscle-derived fibroblasts, identified as CD56&#8211; and TE-7+. Fibroblasts proliferate very efficiently in culture and in mixed cell populations these cells may overrun myogenic cells to dominate the culture. The isolation and purification of different cell types from human muscle is thus an important methodological consideration when trying to investigate the innate behavior of either cell type in culture. Here we describe a system of sorting based on the gentle enzymatic digestion of cells using collagenase and dispase followed by magnetic activated cell sorting (MACS) which gives both a high purity (&#62;95% myogenic cells) and good yield (~2.8 x 106 &#177; 8.87 x 105 cells/g tissue after 7 days in vitro) for experiments in culture. This approach is based on incubating the mixed muscle-derived cell population with magnetic microbeads beads conjugated to an antibody against CD56 and then passing cells though a magnetic field. CD56+ cells bound to microbeads are retained by the field whereas CD56&#8211; cells pass unimpeded through the column. Cell suspensions from any stage of the sorting process can be plated and cultured. Following a given intervention, cell morphology, and the expression and localization of proteins including nuclear transcription factors can be quantified using immunofluorescent labeling with specific antibodies and an image processing and analysis package.

The main adherent cell types derived from human muscle are myogenic cells and fibroblasts. Here, cell populations are enriched using magnetic-activated cell sorting based on the CD56 antigen. Subsequent immunolabelling with specific antibodies and use of image analysis techniques allows quantification of cytoplasmic and nuclear characteristics in individual cells.

Isolement et quantitative immunocytochimique caractérisation des cellules myogéniques primaires et fibroblastes de muscle squelettique humain

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated ...

Recherche

Biologie du développement

X-ray Diffraction of Intact Murine Skeletal Muscle as a Tool for Studying the Structural Basis of Muscle Disease

Transgenic mouse models have been important tools for studying the relationship of genotype to phenotype for human diseases including those of skeletal muscle. Mouse skeletal muscle has been shown to produce high quality X-ray diffraction patterns on third generation synchrotron beamlines providing an opportunity to link changes at the level of the genotype to functional phenotypes in health and disease by determining the structural consequences of genetic changes. We present detailed protocols for preparation of specimens, collecting the X-ray patterns and extracting relevant structural parameters from the X-ray patterns that may help guide experimenters wishing to perform such experiments for themselves.

We present detailed protocols for performing small-angle X-ray diffraction experiments using intact mouse skeletal muscles. With the wide availability of transgenic mouse models for human diseases, this experimental platform can form a useful test bed for elucidating the structural basis of genetic muscle diseases

Diffraction de rayon X du muscle squelettique intact de Murine comme outil pour étudier la base structurale de la maladie de muscle

Transgenic mouse models have been important tools for studying the relationship of genotype to phenotype for human diseases including those of skeletal ...

Isolation, Culture, Characterization, and Differentiation of Human Muscle Progenitor Cells from the Skeletal Muscle Biopsy Procedure

The use of primary human tissue and cells is ideal for the investigation of biological and physiological processes such as the skeletal muscle regenerative process. There are recognized challenges to working with human primary adult stem cells, particularly human muscle progenitor cells (hMPCs) derived from skeletal muscle biopsies, including low cell yield from collected tissue and a large degree of donor heterogeneity of growth and death parameters among cultures. While incorporating heterogeneity into experimental design requires a larger sample size to detect significant effects, it also allows us to identify mechanisms that underlie variability in hMPC&#160;expansion capacity, and thus allows us to better understand heterogeneity in skeletal muscle regeneration. Novel mechanisms that distinguish the expansion capacity of cultures have the potential to lead to the development of therapies to improve skeletal muscle regeneration.

We present techniques for isolating, culturing, characterizing, and differentiating human primary muscle progenitor cells (hMPCs) obtained from skeletal muscle biopsy tissue. hMPCs obtained and characterized through these methods can be used to subsequently address research questions related to human myogenesis and skeletal muscle regeneration.

Isolement, culture, caractérisation et différenciation des cellules de l'ancêtre musculaire humain de la procédure de biopsie musculaire squelettique

The use of primary human tissue and cells is ideal for the investigation of biological and physiological processes such as the skeletal muscle ...

Performing Human Skeletal Muscle Xenografts in Immunodeficient Mice

Treatment effects observed in animal studies often fail to be recapitulated in clinical trials. While this problem is multifaceted, one reason for this failure is the use of inadequate laboratory models. It is challenging to model complex human diseases in traditional laboratory organisms, but this issue can be circumvented through the study of human xenografts. The surgical method we describe here allows for the creation of human skeletal muscle xenografts, which can be used to model muscle disease and to carry out preclinical therapeutic testing. Under an Institutional Review Board (IRB)-approved protocol, skeletal muscle specimens are acquired from patients and then transplanted into NOD-Rag1null IL2r&gamma;null (NRG) host mice. These mice are ideal hosts for transplantation studies due to their inability to make mature lymphocytes and are thus unable to develop cell-mediated and humoral adaptive immune responses. Host mice are anaesthetized with isoflurane, and the mouse tibialis anterior and extensor digitorum longus muscles are removed. A piece of human muscle is then placed in the empty tibial compartment and sutured to the proximal and distal tendons of the peroneus longus muscle. The xenografted muscle is spontaneously vascularized and innervated by the mouse host, resulting in robustly regenerated human muscle that can serve as a model for preclinical studies.

Complex human diseases can be challenging to model in traditional laboratory model systems. Here, we describe a surgical approach to model human muscle disease through the transplantation of human skeletal muscle biopsies into immunodeficient mice.

Exécution des xénogreffes de muscle squelettique humain dans les souris immunodéficientes

Treatment effects observed in animal studies often fail to be recapitulated in clinical trials. While this problem is multifaceted, one reason for this ...

Quantification of Subcellular Glycogen Distribution in Skeletal Muscle Fibers using Transmission Electron Microscopy

With the use of transmission electron microscopy, high-resolution images of fixed samples containing individual muscle fibers can be obtained. This enables quantifications of ultrastructural aspects such as volume fractions, surface area to volume ratios, morphometry, and physical contact sites of different subcellular structures. In the 1970s, a protocol for enhanced staining of glycogen in cells was developed and paved the way for a string of studies on the subcellular localization of glycogen and glycogen particle size using transmission electron microscopy. While most analyses interpret glycogen as if it is homogeneously distributed within the muscle fibers, providing only a single value (e.g., an average concentration), transmission electron microscopy has revealed that glycogen is stored as discrete glycogen particles located in distinct subcellular compartments. Here, the step-by-step protocol from tissue collection to the quantitative determination of the volume fraction and particle diameter of glycogen in the distinct subcellular compartments of individual skeletal muscle fibers is described. Considerations on how to 1) collect and stain tissue specimens, 2) perform image analyses and data handling, 3) evaluate the precision of estimates, 4) discriminate between muscle fiber types, and 5) methodological pitfalls and limitations are included.

A modified post-fixation procedure increases the contrast of glycogen particles in tissue. This paper provides a step-by-step protocol describing how to handle the tissue, conduct the imaging, and use stereological methods to obtain unbiased and quantitative data on fiber type-specific subcellular glycogen distribution in skeletal muscle.

Quantification de la distribution subcellulaire du glycogène dans les fibres musculaires squelettiques à l’aide de la microscopie électronique à transmission

With the use of transmission electron microscopy, high-resolution images of fixed samples containing individual muscle fibers can be obtained. This ...

Biochimie

Preparation and Respirometric Assessment of Mitochondria Isolated from Skeletal Muscle Tissue Obtained by Percutaneous Needle Biopsy

Respirometric profiling of isolated mitochondria is commonly used to investigate electron transport chain function. We describe a method for obtaining samples of human Vastus lateralis, isolating mitochondria from minimal amounts of skeletal muscle tissue, and plate based respirometric profiling using an extracellular flux (XF) analyzer. Comparison of respirometric profiles obtained using 1.0, 2.5 and 5.0 &#956;g of mitochondria indicate that 1.0 &#956;g is sufficient to measure respiration and that 5.0 &#956;g provides most consistent results based on comparison of standard errors. Western blot analysis of isolated mitochondria for mitochondrial marker COX IV and non-mitochondrial tissue marker GAPDH indicate that there is limited non-mitochondrial contamination using this protocol. The ability to study mitochondrial respirometry in as little as 20 mg of muscle tissue allows users to utilize individual biopsies for multiple study endpoints in clinical research projects.

Methods for biopsy of Vastus lateralis, preparation of purified mitochondria, and respirometric profiling are described. The use of small muscle volume makes this technique suitable for clinical research applications.

Préparation et respirométrique évaluation des mitochondries isolées de tissu musculaire squelettique Obtenu par biopsie percutanée aiguille

Respirometric profiling of isolated mitochondria is commonly used to investigate electron transport chain function. We describe a method for obtaining ...

Médecine

MyDoBID - Une nouvelle technique pour identifier efficacement les types de fibres musculaires

Fiber Type Identification of Human Skeletal Muscle

The technique described here can be used to identify specific myosin heavy chain (MHC) isoforms in segments of individual muscle fibers using dot blotting, hereafter referred to as Myosin heavy chain detection by Dot Blotting for IDentification of muscle fiber type (MyDoBID). This protocol describes the process of freeze-drying human skeletal muscle and isolating segments of single muscle fibers. Using MyDoBID, type I and II fibers are classified with MHCI- and IIa-specific antibodies, respectively. Classified fibers are then combined into fiber type-specific samples for each biopsy.
The total protein in each sample is determined by Sodium Dodecyl-Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE) and UV-activated gel technology. The fiber type of samples is validated using western blotting. The importance of performing protein loading normalization to enhance target protein detection across multiple western blots is also described. The benefits of consolidating classified fibers into fiber type-specific samples compared to single-fiber western blots, include sample versatility, increased sample throughput, shorter time investment, and cost-saving measures, all while retaining valuable fiber type-specific information that is frequently overlooked using homogenized muscle samples. The purpose of the protocol is to achieve accurate and efficient identification of type I and type II fibers isolated from freeze-dried human skeletal muscle samples.
These individual fibers are subsequently combined to create type I and type II fiber type-specific samples. Furthermore, the protocol is extended to include the identification of type IIx fibers, using Actin as a marker for fibers that were negative for MHCI and MHCIIa, which are confirmed as IIx fibers by western blotting. Each fiber type-specific sample is then used to quantify the expression of various target proteins using western blotting techniques.

Pleins feux sur l’auteur : Déchiffrer les mystères des types de fibres musculaires squelettiques à l’aide de la technique MyDoBID 

This protocol demonstrates single-fiber isolation from freeze-dried human skeletal muscle and fiber-type classification according to Myosin heavy chain (MHC) isoform using the dot blotting technique. Identified MHC I and II fiber samples can then be further analyzed for fiber type-specific differences in protein expression using western blotting.

Identification du type de fibre du muscle squelettique humain

The technique described here can be used to identify specific myosin heavy chain (MHC) isoforms in segments of individual muscle fibers using dot ...

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

Percutaneous muscle biopsy using the Weil-Blakesley conchotome is well established in both clinical and research practice. It is a safe, effective and well tolerated technique. The Weil-Blakesley conchotome has a sharp biting tip with a 4 - 6 mm wide hollow. It is inserted through a 5 - 10 mm skin incision and can be maneuvered for controlled tissue penetration. The tip is opened and closed within the tissue and then rotated through 90 -180&#176; to cut the muscle. The amount of muscle obtained following repeated sampling can vary from 20 mg to 290 mg which can be processed for both histology and molecular studies. The wound needs to be kept dry and vigorous physical activity kept to a minimum for approximately 72 hr although normal levels of activity can restart immediately following the procedure. This procedure is safe and effective when close attention is paid to the selection of subjects, full asepsis and post procedure care. &#160;Both right and left vastus lateralis are suitable for biopsy dependent on participant preference.

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

This video demonstrates the technique of percutaneous muscle biopsy of the human vastus lateralis using the Weil-Blakesley conchotome.

Humain<em&gt; Vaste externe</em&gt; Biopsie de muscle squelettique Utilisation de la Weil-Blakesley Conchotome

Percutaneous muscle biopsy using the Weil-Blakesley conchotome is well established in both clinical and research practice. It is a safe, effective and ...

Procédures Muscle squelettique humain biopsie aide de la technique de modification Bergström

Résumé

Explorer plus de vidéos

PLAYLIST