Nous reconnaissons le soutien financier de la société japonaise pour la Promotion de la Science (KAKENHI-subventions aux Claudine [26893261]), oulmane Memorial Institute for Medical Research (à KN) et japonais Ministry of Health, Labour and Welfare (à l’AMT) ; Mme Kohichi Kamata et Atsushi Seyama au département de pathologie à la Saitama Medical University International Medical Center pour leur excellent histochimiques et coloration immunohistochimique ; ainsi que de la Celso Dr E. Gomez-Sanchez pour fournir la souris anticorps monoclonal de CYP11B2 et anticorps monoclonaux de CYP11B1 rat.

cette étude a été approuvée par les institutionnels Review Boards de Saitama médical International Centre médical d’université et l’hôpital Rosai Yokohama (approbation #: 16-093 et 26-38, respectivement). Écrit a été obtenu le consentement de tous les patients avant l’intervention.
 1. préparation du patient <ol><li>définir le patient sur le lit d’examen.</li>
	<li>Placer une ligne veineuse dans un bras (ou de la jambe gauche) pour l’administration de médicaments au cours de la procédure.</li>
	<li>Insérer la gaine d’accès dans la veine fémorale droite après désinfection de la peau approprié et une anesthésie locale.</li>
	<li>Prélever un échantillon de sang (1 mL) de la veine fémorale droite (échantillon de sang périphérique avant l’administration de cosyntropin).</li>
</ol> 2. Cathétérisme <ol><li>ssAVS de la surrénales droite TVs <ol><li>Insérer un cathéter avec la forme de MK surrénale-R ( Figure 1 a et 1 b) ou le cathéter avec le MK X forme () la figure 1) dans la surrénale droite de la veine (RAV) comme indiqué précédemment 15 , 16, prélever un échantillon de sang (1 mL) et retirer le cathéter (échantillon de cAVS juste avant l’administration de cosyntropin). Utiliser le micro-cathéter si nécessaire.</li>
		<li>Sélectionner un cathéter parent approprié pour la surrénale droite : quand le &#34; long diamètre de l’IVC &#34; est plus courte que 25 mm, utilisez MK surrénale-R. Sinon, utilisez MK X.</li>
		<li>Remodeler le cathéter parent si nécessaire.
		<ol><li>CT la lumière images, remodeler la largeur du cathéter (flèches bidirectionnelles rouge dans la Figure 1 a ou 1 C) sélectionné pour s’adapter à la &#34; long diamètre de l’IVC &#34; 15 (voir également le cas #1) et l’angle de l’extrémité du cathéter pour adapter le &#34; mis à jour l’angle transversal du RAV &#34; 15 (voir également le cas #1).</li>
			<li>Remodeler le cathéter lors de l’application de vapeur à haute température de l’eau bouillante (p. ex. électronique bouilloire) pour les cathéters. Des procédures détaillées sont décrites ailleurs 15.</li>
		</ol></li> <li>Placer l’embout du cathéter parent dans le RAV avec un angle approprié (moyenne de modification angle transversal du RAV : 123,6 °) 15 et la profondeur (1 à 2 mm). 
		NOTE : Placement de cathéter parent précis est essentiel pour la livraison du micro-cathéter dans le téléviseur cible.</li>
		<li>Manipuler le cathéter de parent pour modifier la direction de l’extrémité du cathéter à viser l’un de la télévision à droite, puis insérer un micro-cathéter remplis de solution saline avec un fil guide. 
		Remarque : En poussant et en tirant le cathéter parent vont changer l’angle vertical du cathéter parent, c'est-à-dire lorsque le cathéter de type 3D est tiré vers le pied, l’extrémité du cathéter est dirigée vers le haut, alors que l’extrémité du cathéter est dirigée vers le bas quand le cathéter est poussé (voir cas #1 ci-dessous). Une fois l’extrémité du cathéter est insérée dans la sortie RAV avec un angle approprié et profondeur, le micro-cathéter peut être insérée. Il est important que l’examinateur empêcher un patient de respirer profondément ou l’angle vertical peut changer. Le micro-cathéter décrit ci-dessus est inséré avec un fil guide en TV.</li>
		<li>Perform phlébographie en utilisant l’angiographie numérique soustraction dans le micro-cathéter avec une petite quantité de sérum physiologique dilué (1:1) contraste (0,1 - 0,3 mL ; iopromide injection) et rincer doucement. Prélever un échantillon de 1 mL de sang lentement pour la mesure des concentrations d’aldostérone plasmatique (PAC) et les concentrations de cortisol plasmatique (PCC).</li>
		<li>Tirer le micro-cathéter légèrement en arrière et rincer la ligne micro-cathéter avec au moins 0,5 mL de solution saline. Viser l’extrémité du cathéter parent la prochaine TV.</li>
		<li>Répéter les étapes 2.1.6 et 2.1.7 ci-dessus pour tous les bons téléviseurs.</li>
	</ol></li> <li>ssAVS de téléviseurs surrénales gauche <ol><li>Insérer un cathéter de forme L ( Figure 2) dans la veine surrénalienne gauche (VBL), prélever un échantillon de sang (1 mL) et retirer le cathéter (cAVS gauche déguster avant le administration de cosyntropin). Utiliser le micro-cathéter.</li>
		<li>Placer le cathéter parent. 
		Remarque : Anatomiquement, la veine surrénalienne gauche de centrale est confluente avec la veine phrénique inférieure et veineux sang dans ces veines coule dans LAV 8. Par conséquent, pour ne recueillir que le sang veineux échantillons de gauche tissus surrénales cathétérisme dans la gauche veine centrale surrénalienne est nécessaire, c'est-à-dire, cathétérisme dans le point avant de fusionner avec la veine phrénique inférieure, ce qui nécessite généralement micro-cathétérisme, même pour les cAVS. Pendant l’exécution des surrénal phlébographie central, semblable à la droite, c’est important d’identifier les téléviseurs surrénales gauche, particulièrement des latéraux TV (voir &#34; cas #2 à titre d’exemple de LAV-ssAVS &#34;). Un cathéter avec la forme de L a été préféré à utiliser. Partie #1, #2 et #3 ( Figure 2) du cathéter ajustement IVC, veine rénale, et le tronc commun de la veine phrénique inférieure et LAV, respectivement, permettant ainsi à partie #3 s’asseoir solidement dans le tronc commun.</li>
		<li>Placer le micro-cathéter dans les téléviseurs surrénales gauche et prélever des échantillons de sang d’une télévision à gauche. Reportez-vous aux étapes 2.1.5 - 2.1.6 ci-dessus pour téléviseurs surrénaliennes droit pour les procédures générales. 
		NOTE : Le micro-cathéter et le Guide (les mêmes que ceux dans le ssAVS de droite) sont insérées dans les téléviseurs (généralement les téléviseurs superior-médiane, latérale supérieure et latérales) comme indiqué dans la Case n° 2 ci-dessous, et les échantillons de sang sont prélevés.</li>
	</ol></li></ol> 3. Après des Injections <ol><li>injecter 200 µg de l’hormone adrénocorticotrope synthétique (cosyntropin, bolus) par le biais de la ligne veineuse, suivie par l’administration continue de cosyntropin à raison de 50 µg/min.</li>
	<li>Quinze minutes après l’injection d’un bolus cosyntropin, réexécutez cAVS, tel que décrit ci-dessus et ssAVS, comme décrit aux points 2.1 et 2.2. Frais viré 1 mL de sang chacune.</li>
	<li>Prélever un échantillon de sang de la veine fémorale droite.</li>
	<li>Enlevez tous les cathéters et gaine d’accès et les examens des cAVS et ssAVS après astriction. 
	Remarque : Au sujet de détails sur la technique de prélèvement veineux surrénalien générales (étapes, sauf la 3.2), voir autres livres ou revues 17.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Funder, J. 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Les auteurs n’ont rien à divulguer.

La technique de ssAVS avec les résultats de cas représentatifs ont été décrits dans les présentes. Cas #1-2 et 3 cas ont été traités chirurgicalement et médicalement ssAVS sur la base des résultats, respectivement. En outre, les résultats obtenus pour le cas #1 - 3 a indiqué que des concentrations d’hormones stéroïdes dans des échantillons de ssAVS reflètent clairement l’activité hormonale des tissus surrénaliens en amont, en particulier les tumeurs, sans doute parce que l’écoulement de sang de tumeur est obtenu directement. La méthode ssAVS peut jouer un rôle inestimable en identifiant les segments touchés surrénaliennes de lésions bilatérales de corticosurrénales (p. ex., cas #1 - 2), diagnostics définitifs de l’IHA (p. ex., cas #3) et en recherche scientifique fondamentale pour élucider le pathophysiologies des maladies corticosurrénaliennes et découvrir de nouveaux biomarqueurs pour ces maladies tel que discuté ci-dessous.
Les lignes directrices pour PA1,18,21 recommandent d’effectuer les cAVS pour identifier une lésion surrénalienne unilatérale du PA en calculant le ratio latéralisée ([supérieur PAC/PCC] / [basse PAC/PCC]). Toutefois, ce calcul peut entraîner un mauvais diagnostic lorsque la production de cortisol lésions coexistent. L’adénome productrices de cortisol probable dans le cas #2 clairement produit une quantité excessive de cortisol dans la surrénale droite et production de cortisol dans la surrénale gauche a été supprimée. Il est important de noter que APAs beaucoup produisent des quantités excessives de cortisol parce qu’ils expriment souvent CYP11B2 tant CYP11B120. Une autre limite du ratio latéralisée dans cAVS est qu’il ne peut pas distinguer des APP bilatéraux hyperaldostéronisme idiopathique (p. ex., cas n ° 3).
En outre, ssAVS des échantillons de sang peuvent contribuer de manière significative à l’avancement de la recherche sur les maladies excès hormonal et traitements. Par exemple, le répertoire de sang ssAVS prélevé de l’adénome peut contenir des concentrations élevées de circulation de cellules tumorales et leur ADN22,23. Des études antérieures a signalé que la méthode de biopsie liquide est cliniquement utile pour distinguer le corticosurrénalome d’adénome24 et pour le diagnostic de l’adénome maladies25,26. Afin de prouver à ce concept, tentatives actuelles sont déployés pour détecter des mutations associées à APA, dont KCNJ5 à l’aide d’échantillons de ssAVS et une haute performance prochaine génération séquenceur7,11,19 ,27, ce qui peut contribuer à de futurs traitements APA. Liquide-biopsié cellules peuvent également fournir aux chercheurs la possibilité d’effectuer des analyses moléculaires sur IHA, qui n’est actuellement pas possible parce que la maladie ne peut être traitée chirurgicalement. Outre la méthode liquide biopsie, tumeur pur écoulement échantillons peuvent être utiles pour l’étude métabolomique identifier de nouveaux biomarqueurs de stéroïdes.
La procédure technique critique de ssAVS méthode consiste à : (i) identifier chaque veine affluent au cours central phlébographie surrénalienne. (ii) durant la phlébographie, utiliser une petite quantité de produit de contraste (0,1 - 0,3 mL) et rincer doucement afin d’éviter l’hémorragie surrénale. (iii) faire avancer le fil-guide doucement et sans trop de force pour éviter les veines tributaires pénétrantes. (iv) mettre fin à la méthode immédiatement lorsque l’hémorragie surrénale ou soupçonnée.
La sélection d’un cathéter de parent est également critique pour le succès de ssAVS. Concernant les cAVS du RAV, Araki et coll. ont récemment signalé l’utilité d’un en trois dimensions (3D)-sonde de type ayant une forme 3D15. Un cathéter avec la forme R (Figure 1 a et 1 b) et une sonde ayant la forme de X (Figure 1) sont disponibles en 3D de type cathéters pour ssAVS. Araki et coll. a analysé plusieurs paramètres anatomiques sur base des conclusions de CT en ce qui concerne le taux de réussite de cathéters 3D de type15. Dans une variable analyse (i) un plus courte « court diamètre de la veine cave inférieure (VCI) » (ii) angle plus grand « rapport du diamètre du long au court diamètre de l’IVC » (iii) plus petit « transversal du RAV » (iv) plus petit « angle transversal du RAV modifié » et (v) plus petit " angle vertical du RAV » en corrélation avec le taux de réussite dans le RAV. Dans une analyse multivariée, seule (iv) un plus petit « angle transversal du RAV modifié » était un facteur prédictif indépendant de cathétérisme de RAV réussie. Ils ont conclu que les conclusions de l’analyse multivariée est peut-être en raison de la stabilité du cathéter dans la VCI ; à savoir, la largeur des cathéters de type 3D (flèche bidirectionnelle rouge dans la Figure 1 a et 1C) s’intègre bien dans le « long diamètre de l’IVC », ce qui stabilise ces cathéters. Dans l’ensemble, lorsque le « long diamètre de l’IVC » est inférieur à 25 mm, utilisez MK surrénale-R, sinon MK X.
Dans l’ensemble, la signification de ssAVS est : (i) sa contribution à l’avancement de la recherche sur les maladies excès hormonal (ii) la promotion de la surrénalectomie partielle en isolant une lésion productrices de l’hormone au niveau d’une surrénale segment (voir cas #1) (iii) sa promotion de l’évaluation de l’excès de cortisol en recueillant l’efflux surrénalienne pure (voir cas #2) (iv) sa détection de réel hyperaldostéronisme idiopathique (voir cas n° 3) (v) sa contribution à l’avancement de l’élaboration de nouveaux traitements, qui peuvent inclure TRANS-veineux segmentaire ablation des surrénales. Ainsi, si effectué comme décrit dans les présentes, toute angiographer peut avec succès effectuer le protocole de ssAVS en plus des cAVS et contribuer à l’avancement de la recherche et le traitement des maladies excès hormonales surrénaliennes.
ssAVS avec les cAVS sont régulièrement effectuées à hôpital Rosai de Yokohama et Saitama Medical University pour les patients de PA. Deux angiographers (KM et SM) a effectué, entre octobre 2014 et septembre 2015, ssAVS sur 125 cas (78 et 47 cas, respectivement) avec un taux de réussite de 100 % et dans un délai raisonnable (58-130 min) sans rupture surrénalienne ou thrombose qui a nécessité une intervention chirurgicale. Dans cette méthode, des frais supplémentaires soient engagées pour le micro-cathéter (10 fois plus cher au Japon que le cathéter classique) et des mesures de la PAC/PCC d’échantillons affluents. Toutefois, compte tenu des avantages cliniques et scientifiques de la procédure, le coût supplémentaire est justifié, au moins dans les pays industrialisés. Une limite de ssAVS et une surrénalectomie bilatérale est qu’il ne peut pas guérir les lésions bilatérales et des évaluations de suivi sont nécessaires, ce qui comprend l’évaluation de la récurrence de la PA (voir cas #1). Cependant, cela vaut également pour les cas de PA unilatérales. Par conséquent, ces résultats indiquent que n’importe quel angiographer a la capacité d’exécuter ssAVS avec un taux de réussite élevé en suivant le protocole décrit dans cet article vidéo. Afin de promouvoir les the ssAVS méthode dans le monde entier une formation pratique est toujours fournie à l’hôpital Rosai de Yokohama et Saitama Medical University. S’il vous plaît n’hésitez pas à contacter ces institutions si vous êtes intéressé par cette méthode.

Hyperaldostéronisme primaire (PA) et le syndrome de Cushing subclinique (SCS) sont des conditions dans lesquelles les glandes surrénales autonome produisent des quantités excessives d’aldostérone et de cortisol, respectivement. Chez les adultes, PA est principalement causé par un adénome productrices d’aldostérone (APA) ou hyperaldostéronisme idiopathique (IHA)1, alors que SCS est principalement causée par un adénome de productrices de cortisol2. Mutations somatiques dans les gènes de canal/pompe ion, y compris les canaux potassiques, vers l’intérieur le subfamily J, membre 5 (KCNJ5), ont été identifiées dans l’app et sont associées à la production d’aldostérone autonome,3,4 , 5 , 6. types d’hyperaldostéronisme Familial 1-3 sont rares types de PA, et type 3 est causé par un KCNJ5 de mutation germinale3. Un cas d’un nouveau type de PA pour mineurs, qui aurait sans doute dû le mosaïcisme génétique normal et KCNJ5 cellules corticosurrénales mutantes, a été récemment identifié7. Dans le cas de PA pour mineurs, le cortex surrénalien se composait d’une partie normale et des lésions hyperplasiques productrices d’aldostérone, avec la portion normale étant identifiée par l’échantillonnage veineux surrénalien « Super sélectif » roman (ssAVS, également appelé surrénales segmentaire méthode de prélèvement veineux) décrit ci-après. La méthode de ssAVS a permis à cette patiente PA bilatérale d’être traitée chirurgicalement par une surrénalectomie bilatérale tout en épargnant la portion normale7.
Prélèvement veineux surrénalien aurait initialement en 19718 lorsque la tomodensitométrie (TDM) n’avait pas encore été élaborée. Dans « classique » prélèvement veineux surrénalien (cAVS), un cathéter est inséré dans deux veines surrénales de centrales, sur lequel le sang des échantillons sont prélevés. Ainsi, cAVS n’est utile que pour juger de la latéralité de PA et non pour identifier les options chirurgicales pour PA bilatérale Les Drs Masao Omura et Kohzoh Makita (auteurs de cet article) à l’hôpital Rosai Yokohama mis au point la méthode ssAVS afin d’étudier les possibilités de traitement chirurgical supplémentaire de PA7,8,9, 10,11, qui peut également être utile pour SCS, tel que décrit dans le cas #2 (voir Résultats représentant).
Dans ssAVS, des échantillons de sang sont prélevés petites veines tributaires surrénaliennes (TVs : plus petit en amont branches des veines surrénaliennes centrales) en utilisant un spécialisées split-embout micro-cathéter9. La glande surrénale droite et gauche ont généralement trois affluents veines chacun, c'est-à-dire, les téléviseurs supérieures, latérales et inférieures dans la surrénale droite, ainsi que les téléviseurs superior-médiane, latérale supérieure et latérales dans la surrénale gauche. Très peu de connexions ont été identifiées entre ces téléviseurs12. Par conséquent, ssAVS permet l’identification d’un segment spécifique de surrénalienne ne produisant ne pas d’aldostérone autonome dans une surrénale affecté, permettant ainsi aux bilatérale chirurgie surrénalienne à exécuter sur PA bilatéral tout en épargnant les surrénales pas affectée ou des segments. En outre, la méthode ssAVS est applicable aux enquêtes sur la physiopathologie des nouveaux types de PA comme juvénile PA (décrites ci-dessus7) et bilatérales APA13,14. Car il est essentiel pour le traitement de PAs bilatérale et l’élucidation de leur pathogénie, qui peut-être inclure l’hyperaldostéronisme « idiopathique », ssAVS est recommandé dans le monde entier, et, par conséquent, une description détaillée de la méthode impliquée a été accordée.

<table><tbody><tr><td>CX-Catheter EII with the MK Adrenal-R shape</td><td>Silux co.</td><td>GA-E5F-MK1-60S</td><td>3D catheter for right adrenal venous sampling</td></tr><tr><td>CX-Catheter EII with the MK X shape</td><td>Silux co.</td><td>GA-E5F [MK-X] 60S</td><td>3D catheter for right adrenal venous sampling</td></tr><tr><td>Aqua V3 guidewire</td><td>Formec co.</td><td>HS8616H</td><td>guidewire for the micro-catheter</td></tr><tr><td>Gold Crest Micro-Catheter</td><td>Goldcrest Medic Inc.</td><td>KCV29S1S-OM</td><td>micro-catheter for superselective adrenal venous sampling</td></tr><tr><td>CX catheter-UII with the MK ADRENAL-L shape</td><td>Silux co.</td><td>GA-US5F [MK-3] B65S</td><td>3D catheter for left adrenal venous sampling</td></tr></tbody></table>

a novel method: super-selective adrenal venous sampling

Hyperaldostéronisme primaire (PA) et le syndrome de Cushing subclinique (SCS) sont des conditions dans lesquelles les glandes surrénales autonome produisent des quantités excessives d’aldostérone et de cortisol, respectivement. La méthode d’échantillonnage veineux surrénalien classiques (cAVS) prélève des échantillons de sang de deux veines surrénaliennes centrales et est utile pour identifier la latéralité de la production d’hormones excès dans une palpation unilatérale, comme documenté dans des cas de PA. Dans cAVS, les concentrations de cortisol plasmatique (CMA) servent à normaliser les concentrations d’aldostérone plasmatique (PACs). Une nouvelle méthode de prélèvement veineux surrénalien (ssAVS) « Super sélectif » a été développée à l’aide d’un micro-cathéter, qui recueille des échantillons de sang des veines surrénaliennes affluent (TVs). PACs dans des échantillons de ssAVS ne nécessitent pas de normalisation PCC car les échantillons contiennent une quantité limitée de sang veineux systémique, le cas échéant. La méthode ssAVS activé segmentaire suspectes d’être détectés dans les deux glandes surrénales, qui peut être traitées par une surrénalectomie bilatérale, épargnant ainsi exempt de lésion ou des segments. Glande surrénale droite et gauche ont généralement trois téléviseurs chacun, c'est-à-dire, les téléviseurs supérieures, latérales et inférieures dans la surrénale droite, ainsi que les téléviseurs superior-médiane, latérale supérieure et latérales dans la surrénale gauche. Dans la méthode ssAVS, cathéters parent spécifique et une technique à gérer leur sont nécessaires et ont été décrits dans les présentes. En outre, les résultats de ssAVS de trois cas de PA sont présentés : bilatéraux adénome productrices d’aldostérone (APA) (cas 1), APA gauche et droite possible adénome productrices de cortisol provoquant SCS (2 cas) et hyperaldostéronisme idiopathique dans lequel bilatérale segments de la surrénales produit une quantité excessive d’aldostérone (cas n ° 3). La méthode ssAVS n’est pas difficile pour les experts angiographers et, par conséquent, est recommandée dans le monde entier pour traiter des cas de PA les Cavs ne représente pas une option viable de traitement chirurgical.

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A Novel Method: Super-selective Adrenal Venous Sampling

« Super sélectif » prélèvement veineux surrénalienne (ssAVS, également appelé prélèvement veineux surrénalien segmentaire : Sophie) a été réalisée en utilisant un micro-cathéter pour identifier des surrénales ou des segments qui produisent des quantités excessives d’hormones. La technique de ssAVS a été décrite, cas dans lequel surrénaliennes segmentaires suspectes ont été identifiés par ssAVS ont été présentés et l’utilité de ssAVS dans la future recherche surrénale a été discutée.

Une méthode originale : Super sélectif prélèvement veineux surrénalienne

Primary aldosteronism (PA) and subclinical Cushing&#39;s syndrome (SCS) are conditions in which the adrenal glands autonomously produce excessive amounts ...

a-novel-method-super-selective-adrenal-venous-sampling

Research

JoVE Journal

Medicine

23.2K vues.  Nerima Hikarigaoka Hospital. « Super sélectif » prélèvement veineux surrénalienne (ssAVS, également appelé prélèvement veineux surrénalien segmentaire : Sophie) a été réalisée en utilisant un micro-cathéter pour identifier des surrénales ou des segments qui produisent des quantités excessives d’hormones. La technique de ssAVS a été décrite, cas dans lequel surrénaliennes segmentaires suspectes ont été identifiés par ssAVS ont été présentés et l’utilité de ssAVS da...

Vidéo: A Novel Method: Super-selective Adrenal Venous Sampling

Femoral Arterial and Venous Catheterization for Blood Sampling, Drug Administration and Conscious Blood Pressure and Heart Rate Measurements

In multiple fields of study, access to the circulatory system in laboratory studies is necessary. Pharmacological studies in rats using chronically implanted catheters permit a researcher to effectively and humanely administer substances, perform repeated blood sampling and assists in conscious direct measurements of blood pressure and heart rate. Once the catheter is implanted long-term sampling is possible. Patency and catheter life depends on multiple factors including the lock solution used, flushing regimen and catheter material. This video will demonstrate the methodology of femoral artery and venous catheterization of the rat. In addition the video will demonstrate the use of the femoral venous and arterial catheters for blood sampling, drug administration and use of the arterial catheter in taking measurements of blood pressure and heart rate in a conscious freely-moving rat. A tether and harness attached to a swivel system will allow the animal to be housed and have samples taken by the researcher with minimal disruption to the animal. To maintain patency of the catheter, careful daily maintenance of the catheter is required using lock solution (100 U/ml heparinized saline), machine-ground blunt tip syringe needles and the use of syringe filters to minimize potential contamination. With careful aseptic surgical techniques, proper catheter materials and careful catheter maintenance techniques, it is possible to sustain patent catheters and healthy animals for long periods of time (several weeks).

Chronic catheterization of blood vessels in the rat is often required for administration of substances, obtain blood sample over a period of time or for direct conscious blood pressure measurements. Femoral arterial catheterization of the rat and corresponding measurements of blood pressure in the conscious animal will be demonstrated.

Fémorale cathétérisme artériel et veineux pour le prélèvement sanguin, Drug Administration et la pression artérielle Conscient et Mesures du rythme cardiaque

In multiple fields of study, access to the circulatory system in laboratory studies is necessary. Pharmacological studies in rats using chronically ...

Recherche

Médecine

A Convenient Method for Extraction and Analysis with High-Pressure Liquid Chromatography of Catecholamine Neurotransmitters and Their Metabolites

The extraction and analysis of catecholamine neurotransmitters in biological fluids is of great importance in assessing nervous system function and related diseases, but their precise measurement is still a challenge. Many protocols have been described for neurotransmitter measurement by a variety of instruments, including high-pressure liquid chromatography (HPLC). However, there are shortcomings, such as complicated operation or hard-to-detect multiple targets, which cannot be avoided, and presently, the dominant analysis technique is still HPLC coupled with sensitive electrochemical or fluorimetric detection, due to its high sensitivity and good selectivity. Here, a detailed protocol is described for the pretreatment and detection of catecholamines with high pressure liquid chromatography with electrochemical detection (HPLC-ECD) in real urine samples of infants, using electrospun composite nanofibers composed of polymeric crown ether with polystyrene as adsorbent, also known as the packed-fiber solid phase extraction (PFSPE) method. We show how urine samples can be easily precleaned by a nanofiber-packed solid phase column, and how the analytes in the sample can be rapidly enriched, desorbed, and detected on an ECD system. PFSPE greatly simplifies the pretreatment procedures for biological samples, allowing for decreased time, expense, and reduction of the loss of targets. 
Overall, this work illustrates a simple and convenient protocol for solid-phase extraction coupled to an HPLC-ECD system for simultaneous determination of three monoamine neurotransmitters (norepinephrine (NE), epinephrine (E), dopamine (DA)) and two of their metabolites (3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol (MHPG) and 3,4-dihydroxy-phenylacetic acid (DOPAC)) in infants' urine. The established protocol was applied to assess the differences of urinary catecholamines and their metabolites between high-risk infants with perinatal brain damage and healthy controls. Comparative analysis revealed a significant difference in urinary MHPG between the two groups, indicating that the catecholamine metabolites may be an important candidate marker for early diagnosis of cases at risk for brain damage in infants.

We present a convenient solid-phase extraction coupled to high-pressure liquid chromatography (HPLC) with electrochemical detection (ECD) for simultaneous determination of three monoamine neurotransmitters and two of their metabolites in infants' urine. We also identify the metabolite MHPG as a potential biomarker for the early diagnosis of brain damage for infants.

Une méthode pratique pour l’Extraction et analyse par chromatographie liquide à haute pression des neurotransmetteurs catécholamines et de leurs métabolites

The extraction and analysis of catecholamine neurotransmitters in biological fluids is of great importance in assessing nervous system function and ...

Chimie

Exploration de l’échange de métabolites dans le tissu adipeux brun

Arteriovenous Metabolomics to Measure In Vivo Metabolite Exchange in Brown Adipose Tissue

Brown adipose tissue (BAT) plays a crucial role in regulating metabolic homeostasis through a unique energy expenditure process known as non-shivering thermogenesis. To achieve this, BAT utilizes a diverse menu of circulating nutrients to support its high metabolic demand. Additionally, BAT secretes metabolite-derived bioactive factors that can serve as either metabolic fuels or signaling molecules, facilitating BAT-mediated intratissue and/or intertissue communication. This suggests that BAT actively participates in systemic metabolite exchange, an interesting feature that is beginning to be explored. Here, we introduce a protocol for in vivo mouse-level optimized BAT arteriovenous metabolomics. The protocol focuses on relevant methods for thermogenic stimulations and an arteriovenous blood sampling technique using Sulzer's vein, which selectively drains interscapular BAT-derived venous blood and systemic arterial blood. Next, a gas chromatography-based metabolomics protocol using those blood samples is demonstrated. The use of this technique should expand the understanding of BAT-regulated metabolite exchange at the inter-organ level by measuring the net uptake and release of metabolites by BAT.

Pleins feux sur l’auteur : Éclairer de nouvelles voies pour le métabolisme du tissu adipeux et la prévention des maladies 

In this protocol, methods relevant for BAT-optimized arteriovenous metabolomics using GC-MS in a mouse model are outlined. These methods allow for the acquisition of valuable insights into BAT-mediated metabolite exchange at the organismal level.

Métabolomique artérioveineuse pour mesurer l’échange de métabolites in vivo dans le tissu adipeux brun

Brown adipose tissue (BAT) plays a crucial role in regulating metabolic homeostasis through a unique energy expenditure process known as non-shivering ...

Biochimie

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

Ponction de la veine sous-clavière comme méthode Alternative de prélèvement d’échantillons de sang chez les Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Confocal Microscopy to Measure Three Modes of Fusion Pore Dynamics in Adrenal Chromaffin Cells

Dynamic fusion pore opening and closure mediate exocytosis and endocytosis and determine their kinetics. Here, it is demonstrated in detail how confocal microscopy was used in combination with patch-clamp recording to detect three fusion modes in primary culture bovine adrenal chromaffin cells. The three fusion modes include 1) close-fusion (also called kiss-and-run), involving fusion pore opening and closure, 2) stay-fusion, involving fusion pore opening and maintaining the opened pore, and 3) shrink-fusion, involving shrinkage of the fusion-generated &#937;-shape profile until it merges completely at the plasma membrane.
To detect these fusion modes, the plasma membrane was labeled by overexpressing mNeonGreen attached with the PH domain of phospholipase C &#948; (PH-mNG), which binds to phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate (PtdIns(4,5)P2) at the cytosol-facing leaflet of the plasma membrane; vesicles were loaded with the fluorescent false neurotransmitter FFN511 to detect vesicular content release; and Atto 655 was included in the bath solution to detect fusion pore closure. These three fluorescent probes were imaged simultaneously at ~20-90 ms per frame in live chromaffin cells to detect fusion pore opening, content release, fusion pore closure, and fusing vesicle size changes. The analysis method is described to distinguish three fusion modes from these fluorescence measurements. The method described here can, in principle, apply to many secretory cells beyond chromaffin cells.

This protocol describes a confocal imaging technique to detect three fusion modes in bovine adrenal chromaffin cells. These fusion modes include 1) close-fusion (also called kiss-and-run), involving fusion pore opening and closure, 2) stay-fusion, involving fusion pore opening and maintaining the opened pore, and 3) shrink-fusion, involving fused vesicle shrinkage.

Microscopie confocale pour mesurer trois modes de dynamique des pores de fusion dans les cellules chromaffines surrénales

Dynamic fusion pore opening and closure mediate exocytosis and endocytosis and determine their kinetics. Here, it is demonstrated in detail how confocal ...

Neurosciences

Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, corticotrophin releasing hormone (CRH) is released from the hypothalamus in the brain. This stimulates the release of adrenocorticotrophic hormone (ACTH) from the pituitary gland, which in turn stimulates release of glucocorticoids from the adrenal gland. In horses the glucocorticoid corticosterone is responsible for several adaptations needed to support equine flight behaviour and subsequent removal from the aversive situation. Corticosterone metabolites can be detected in the feces of horses and assessment offers a non-invasive option to evaluate long term patterns of adrenal activity. Fecal assessment offers advantages over other techniques that monitor adrenal activity including blood plasma and saliva analysis. The non-invasive nature of the method avoids sampling stress which can confound results. It also allows the opportunity for repeated sampling over time and is ideal for studies in free ranging horses. This protocol describes the enzyme linked immunoassay (EIA) used to assess feces for corticosterone, in addition to the associated biochemical validation.

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. The method offers a non-invasive option to assess long term patterns in both domestic and free ranging horses. This protocol describes the enzyme linked immunoassay involved and the associated biochemical validation.

Fecal glucocorticoïdes Analyse: Surveillance surrénale non invasive en Equidés

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, ...

Biologie

Prélèvement de liquide céphalo-rachidien et de sang chez le rat avec enregistrement EEG simultané

Sampling Cerebrospinal Fluid and Blood from Lateral Tail Vein in Rats During EEG Recordings

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure molecules of interest, such as hormones, growth factors, proteins, or small non-coding RNAs. A specific example is the sampling of biological liquids in the research of biomarkers for epilepsy. In these studies, it is desirable to compare the levels of molecules in cerebrospinal fluid (CSF) and in plasma, by withdrawing CSF and plasma in parallel and considering the time distance of the sampling from and to seizures. The combined CSF and plasma sampling, coupled with video-EEG monitoring in epileptic animals, is a promising approach for the validation of putative diagnostic and prognostic biomarkers. Here, a procedure of combined CSF withdrawal from cisterna magna and blood sampling from the lateral tail vein in epileptic rats that are continuously video-EEG monitored is described. This procedure offers significant advantages over other commonly used techniques. It permits rapid sampling with minimal pain or invasiveness, and reduced time of anesthesia. Additionally, it can be used to obtain CSF and plasma samples in both tethered and telemetry EEG recorded rats, and it may be used repeatedly across multiple days of experiment. By minimizing the stress due to sampling by shortening isoflurane anesthesia, measures are expected to reflect more accurately the true levels of investigated molecules in biofluids. Depending on the availability of an appropriate analytical assay, this technique may be used to measure the levels of multiple, different molecules while performing EEG recording at the same time.

Pleins feux sur l’auteur : Obtention d’échantillons de LCR et de sang de haute qualité pour la découverte de biomarqueurs de l’épilepsie 

The protocol shows repeated cerebrospinal fluid and blood collections from epileptic rats performed in parallel with continuous video-electroencephalogram (EEG) monitoring. These are instrumental for exploring possible links between changes in various body fluid molecules and seizure activity.

Prélèvement de liquide céphalorachidien et de sang de la veine caudale latérale chez le rat pendant les enregistrements EEG

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many ...

Une méthode originale : Super sélectif prélèvement veineux surrénalienne

Résumé

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