Cette méthode aide à déterminer comment l’imidaclopride est absorbé, transporté et distribué dans le blé. Le principal avantage de cette technique est la sensibilité élevée de la détection de l’imidaclopride qui peut être largement utilisée pour déterminer l’imidaclopride dans le sol, l’eau, les plantes et d’autres échantillons. Pour faire germer les graines de blé, sélectionnez 1000 graines appropriées ayant des granules complets, des embryons intacts et une taille uniforme.
Plongez les graines dans une solution de peroxyde d’hydrogène à 10% pendant 15 minutes pour désinfecter leurs surfaces. Ensuite, rincez les graines cinq fois en faisant couler de l’eau stérile pendant 10 secondes à chaque fois. Maintenant, étalez les graines de blé uniformément avec les embryons pointés vers le haut dans une boîte de Petri en verre contenant du papier filtre humide et stérile.
Placez la boîte de Petri dans un incubateur climatique artificiel maintenu à 30 degrés Celsius et 80% d’humidité relative. Cultivez les graines de blé dans l’obscurité pendant trois jours jusqu’à ce qu’elles germent et développent des racines. Une fois que les graines de blé ont germé, placez 15 plants de blé dans un appareil hydroponique contenant 100 millilitres de demi-solution nutritive Hoaglands.
Ensuite, placez l’ensemble de la configuration hydroponique dans un incubateur climatique artificiel à 25 degrés Celsius et 80% d’humidité relative pendant sept jours. Pour mettre en place les expériences d’exposition aux pesticides avec deux concentrations différentes d’imidaclopride , préparez des dispositifs hydroponiques contenant la moitié de la solution nutritive Hoaglands avec 0,5 milligramme par litre ou cinq milligrammes par litre d’imidaclopride. Mettre en place 15 dispositifs hydroponiques pour chaque groupe de concentration d’imidaclopride afin d’assurer des échantillons adéquats pendant l’échantillonnage.
Maintenant, transplanter 15 plants de blé après leur période hydroponique de sept jours dans chaque dispositif hydroponique préparé. Placez l’ensemble de la configuration hydroponique dans un incubateur climatique artificiel pendant trois jours à 25 degrés Celsius et 80% d’humidité relative. Tout au long de la période d’exposition à l’imidaclopride prélever quotidiennement les racines et les feuilles des plantes.
Pour chaque concentration d’imidaclopride intégrez les échantillons de blé de chaque cinquième des 15 dispositifs hydroponiques en un groupe parallèle. Pour extraire l’imidaclopride des racines de blé, déchiqueter les racines de blé à l’aide de ciseaux en morceaux d’environ un centimètre. Pesez 10 grammes de racines de blé déchiquetées et placez-les dans un tube centrifuge de 50 millilitres.
Ensuite, ajoutez 10 millilitres de nitrile acétyle dans le tube à centrifuger et vortex le tube pendant une minute avant d’ajouter quatre grammes de sulfate de magnésium anhydre et 1,5 gramme de chlorure de sodium dans le tube. Immédiatement vortex du tube pendant 30 secondes. Ensuite, centrifugez le tube à 6 000 G pendant cinq minutes.
Aspirer le surnageant avec une seringue jetable et le faire passer à travers un filtre à seringue de 0,22 micron pour obtenir l’échantillon. Pour extraire l’imidaclopride des feuilles de blé, déchiqueter les feuilles fraîches à l’aide de ciseaux en morceaux d’environ un centimètre. Pesez 10 grammes de feuilles de blé déchiquetées et placez-les dans un tube à centrifuger de 50 millilitres.
Ajouter 10 millilitres d’acétonitrile à 10 grammes de feuilles de blé déchiquetées dans un tube à centrifuger de 50 millilitres et vortex pendant une minute. Ensuite, traitez le mélange avec du sulfate de magnésium anhydre et du chlorure de sodium, et centrifugez comme démontré précédemment. Pour éliminer la pigmentation et l’humidité de l’échantillon, prélever deux millilitres du surnageant obtenu après la centrifugation et l’ajouter à un tube centrifuge de cinq millilitres contenant du noir de carbone graphitisé et du sulfate de magnésium anhydre.
Après 30 secondes de mélange vortex, centrifuger le tube à 6 000 G pendant cinq minutes, puis aspirer le surnageant avec une seringue jetable et le faire passer à travers un filtre à seringue de 0,22 micron pour obtenir l’échantillon. Utiliser la chromatographie liquide en tandem de spectrométrie de masse pour quantifier la quantité d’imidaclopride provenant des échantillons de blé, comme décrit dans le manuscrit. Les rendements de récupération de l’imidaclopride à partir d’échantillons de blé ont montré que les récupérations moyennes d’imidaclopride à partir de racines et de feuilles de blé exposées à 0,5 milligramme par litre d’imidaclopride ou moins par rapport aux récupérations moyennes d’échantillons exposés à cinq milligrammes par litre d’imidaclopride.
L’imidaclopride a été détecté dans les racines et les feuilles des plants de blé même après une journée d’exposition, ce qui indique son absorption et sa conductance rapides dans les plantes. La teneur en imidaclopride était plus élevée le troisième jour d’exposition que le premier jour, et la concentration d’imidaclopride était systématiquement plus élevée dans les racines que dans les feuilles. Aucune inhibition apparente de la croissance des plantes n’a été observée, même après trois jours d’exposition à l’imidaclopride chez les plantes exposées à l’imidaclopride par rapport aux témoins.
Le facteur de concentration racinaire, ou FCR, dans les échantillons traités était supérieur à un, ce qui indique que le blé a un effet d’enrichissement sur l’imidaclopride. Cependant, le facteur de translocation, ou TF, pour les feuilles était inférieur à un, ce qui suggère que le pesticide n’était pas facilement transféré des racines de blé aux feuilles. Les étapes les plus importantes sont l’extraction et la purification de l’imidaclopride.
Assurez-vous que l’imidaclopride est extrait sans perte au cours de ces étapes.
