Pour commencer, transférez les plants de pommes de terre infectés par le virus dans une chambre de croissance maintenue à 22 degrés Celsius. Choisissez une plante pour l’observation et utilisez du ruban adhésif pour immobiliser complètement la deuxième feuille inoculée. Ensuite, connectez le microscope numérique à l’ordinateur et lancez le logiciel de capture d’image.
Placez la feuille sous le microscope. Utilisez ensuite le cadran pour faire la mise au point sur la surface de la feuille. Pour régler les paramètres de l’appareil photo, cliquez sur le bouton Paramètres.
Réglez maintenant la luminosité sur 64, le contraste sur 14 et la teinte sur zéro. Ensuite, réglez la balance des blancs, puis réglez la saturation sur 47, la netteté sur zéro et le gamma sur cinq. Cliquez sur l’icône de capture d’image et sélectionnez l’option vidéo accélérée.
Ensuite, définissez la capture d’image toutes les 15 minutes pour un total de 24 heures. Appuyez sur le bouton de démarrage pour commencer la capture d’image. Pour enregistrer les images capturées, sélectionnez toutes les images et cliquez sur l’icône d’enregistrement.
Choisissez maintenant les options d’exportation, puis définissez les points par pouce au maximum. Une fois enregistrées, supprimez toutes les images du programme. Pour éditer les images, lancez un logiciel de retouche comme ImageJ.
Cliquez sur fichier, puis sélectionnez importer, et choisissez séquence d’images pour importer les séquences temporelles d’images à partir d’un seul champ de vision. Collez le chemin du répertoire des images enregistrées, puis appuyez sur OK. Une fois la conversion terminée, ImageJ lancera automatiquement un lecteur vidéo interne affichant la vidéo terminée.
Cliquez sur fichier, puis enregistrez sous et sélectionnez le format AVI pour exporter le fichier vidéo. Lorsqu’une petite fenêtre s’ouvre, réglez la fréquence d’images sur 0,3 FPS, puis appuyez sur OK pour enregistrer la vidéo en tant que fichier AVI. Des plants de pommes de terre inoculés âgés de trois à quatre semaines avec au moins trois à quatre feuilles complètement développées ont été utilisés pour l’analyse microscopique numérique.
La même zone sur la feuille inoculée a été observée à des intervalles de 15 minutes pour déterminer l’apparition et l’expansion de la lésion au fil du temps. Après 14 heures d’observation, aucune lésion n’était visible. Environ 90 minutes plus tard, une lésion visible a été enregistrée.
La lésion a commencé à s’étendre deux heures plus tard et s’est poursuivie au cours des huit heures et demie suivantes.
