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Assessing Two-dimensional Crystallization Trials of Small Membrane Proteins for Structural Biology Studies by Electron Crystallography

Electron crystallography has evolved as a method that can be used either alternatively or in combination with three-dimensional crystallization and X-ray ...

Georgia Institute of Technology

&#x542F;&#x52A8;&#x3001; &#x7E41;&#x6B96;&#x548C;&#x51DD;&#x8840;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x3002;&#x671F;&#x95F4;&#x51DD;&#x8840;&#x3001; &#x8BB8;&#x591A;&#x51DD;&#x8840;&#x56E0;&#x5B50;&#x951A;&#x5B9A;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x819C;&#x901A;&#x8FC7;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7EF4;&#x751F;&#x7D20; K &#x7684;&#x8840;&#x6DB2;&#x51DD;&#x8840;&#x56E0;&#x5B50;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x56E0;&#x7D20;&#x7B2C;&#x4E03;&#x3001; &#x4E5D;&#x3001; X&#x3001; &#x51DD;&#x8840;&#x9176;&#x539F;&#x3001; &#x56E0;&#x5B50; C &#x4E0A;&#x627E;&#x5230;&#x5176; N &#x7EC8;&#x7AEF; carboxyglutamic &#x9178;&#x5BCC; (Gla) &#x57DF;&#x548C; S.10 C 12 &#x662F;&#x6784;&#x8C61;&#x7279;&#x5B9A;&#x4F9D;&#x8D56;&#x9499;&#x7684;&#x9632;&#x7206;&#x7CFB;&#x6570;&#x4E5D;&#x6297;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x9488;&#x5BF9;&#x9499;&#x7A33;&#x5B9A; Gla &#x57DF;&#x548C;&#x5E72;&#x6270;&#x56E0;&#x5B50; IX &#x819C;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;10 C 12 &#x5DF2;&#x88AB;&#x8BC1;&#x660E;&#x662F;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x6297;&#x51DD;&#x5242;&#xFF0C;&#x5728;&#x6CA1;&#x6709;&#x4E25;&#x91CD;&#x51FA;&#x8840;&#x51CF;&#x8F7B;&#x8840;&#x6813;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;10 C 12 &#x548C;&#x5176;&#x590D;&#x6742;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x56E0;&#x5B50; IX &#x7684; Gla &#x57DF;&#x7684; Fab &#x7247;&#x6BB5;&#x7684;&#x7ED3;&#x6676;&#x4E0D;&#x662F;&#x5FAE;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x9053;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x7ED3;&#x6676;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0E;&#x6B64;&#x7ED3;&#x6676;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x4E0D;&#x5BFB;&#x5E38;&#x65B9;&#x9762;&#x3002;

&#x9632;&#x7206;&#x7CFB;&#x6570;&#x4E5D;&#x6297;&#x4F53;&#x548C;&#x5176;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7ED3;&#x6676;&#x3002;

Initiation, propagation and regulatory processes of blood coagulation occur at the cell surface. During blood coagulation, many coagulation factors are anchored onto cell-surface membranes through their N-terminal carboxyglutamic acid-rich (Gla) domains found on such vitamin K-dependent blood coagulation factors as factors VII, IX, X, prothrombin, factors C and S. 10C12 is a conformation-specific calcium-dependent anti-factor IX antibody, which is directed at the calcium-stabilized Gla domain and interferes with factor IX-membrane interaction. In a variety of animal models, 10C12 has been demonstrated to be effective anticoagulant in attenuating thrombosis without severe bleeding. The crystallization of the Fab fragment of 10C12 and its complex with the Gla domain of human factor IX was not trivial. Here, the crystallization conditions and unusual aspects of this crystallization process are reported.

Crystallization of an anti-factor IX antibody and its complex.

Initiation, propagation et des processus de r&eacute;glementation de la coagulation du sang se produisent &agrave; la surface cellulaire. Au cours de la coagulation du sang, de nombreux facteurs de la coagulation sont ancr&eacute;s sur des membranes de cellule-surface gr&acirc;ce &agrave; leurs domaines (Gla) riches en acide-carboxyglutamique N-terminaux trouv&eacute;s sur des facteurs de coagulation du sang de la vitamine K-d&eacute;pendants comme facteurs VII, IX, X, prothrombine, facteurs C et S. 10 C 12 est un anticorps anti-facteur &agrave; IX conformation sp&eacute;cifique en calcium-d&eacute;pendante, qui est dirig&eacute; vers le domaine Gla stabilis&eacute;s calcium et interf&egrave;re avec l&#39;interaction du facteur IX-membrane. Dans une vari&eacute;t&eacute; de mod&egrave;les animaux, 10 C 12 a d&eacute;montr&eacute; &ecirc;tre un anticoagulant efficace dans l&#39;att&eacute;nuation de thrombose sans h&eacute;morragie s&eacute;v&egrave;re. La cristallisation du fragment Fab de 10C 12 et son complexe avec le domaine Gla de facteur humain IX n&#39;&eacute;tait pas n&eacute;gligeable. Ici, les conditions de cristallisation et les aspects insolites de ce processus de cristallisation sont signal&eacute;s.

Cristallisation d&#39;un anticorps anti-facteur de IX et son complexe.

Die Kristallisation von einem Anti-Faktor-IX-Antik&#xF6;rper und komplex.

Iniziazione, propagazione e regolamentazione dei processi di coagulazione del sangue si verificano alla superficie delle cellule. Durante la coagulazione del sangue, molti fattori della coagulazione sono ancorati sulle membrane di superficie cellulare attraverso i loro domini (Gla) ricca di acido N-terminale carboxyglutamic trovati su tali fattori di coagulazione dipendenti dalla vitamina K sangue come fattori VII, IX, X, protrombina, fattori C e S. C 10 12 &egrave; un conformazione-calcio-dipendente anti-factor IX anticorpo specifico, che &egrave; diretto presso il dominio di Gla calcio-stabilizzato e interferisce con l&#39;interazione del fattore IX-membrana. In una variet&agrave; di modelli animali, C 10 12 ha dimostrato di essere efficace anticoagulante nell&#39;attenuare trombosi senza gravi emorragie. La cristallizzazione del frammento Fab di 10 C 12 e il suo complesso con il dominio di Gla del fattore umano IX non era banale. Le condizioni di cristallizzazione e aspetti insoliti di questo processo di cristallizzazione sono riportati.

Cristallizzazione di un anticorpo anti-factor IX e il suo complesso.

&#x767A;&#x751F;, &#x4F1D;&#x3071;&#x3068;&#x8840;&#x6DB2;&#x51DD;&#x56FA;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8840;&#x6DB2;&#x51DD;&#x56FA;&#x4E2D;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x51DD;&#x56FA;&#x8981;&#x56E0; VII, IX, X, &#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x30D3;&#x30F3;, &#x8981;&#x56E0; C &#x8981;&#x56E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30D3;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3; K &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x8840;&#x6DB2;&#x51DD;&#x56FA;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x305D;&#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x9178;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C1; (Gla) &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x819C;&#x4E0A;&#x306B;&#x56FA;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;S. 10 C 12 &#x306F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x304C;&#x5B89;&#x5B9A; Gla &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x76E3;&#x7763;&#x306F;&#x3001;&#x30D5;&#x30A1;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; IX &#x819C;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x308B;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x56FA;&#x6709;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x4E0D;&#x80B2; IX &#x6297;&#x4F53;&#x3002;&#x5404;&#x7A2E;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;10 C 12 &#x8840;&#x6813;&#x75C7;&#x306F;&#x91CD;&#x7BE4;&#x306A;&#x51FA;&#x8840;&#x306A;&#x3057;&#x6E1B;&#x8870;&#x3067;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x6297;&#x51DD;&#x56FA;&#x3059;&#x308B;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;10 C 12 &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E; Fab &#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x7B2C; IX &#x56E0;&#x5B50; Gla &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x306F;&#x7C21;&#x5358;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x6761;&#x4EF6;&#x3068;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x904E;&#x7A0B;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x5074;&#x9762;&#x304C;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4E0D;&#x80B2; IX &#x6297;&#x4F53;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x3002;

&#xAC1C;&#xC2DC;, &#xC804;&#xD30C; &#xBC0F; &#xD608;&#xC561; &#xC751;&#xACE0;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xC140; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD608;&#xC561; &#xC751;&#xACE0; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB9CE;&#xC740; &#xC751;&#xACE0; &#xC694;&#xC778; VII, IX, X, &#xD504;&#xB85C;&#xD2B8;, &#xC694;&#xC778; C &#xC694;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC19;&#xC740; &#xBE44;&#xD0C0;&#xBBFC; K &#xC758;&#xC874; &#xD608;&#xC561; &#xC751;&#xACE0; &#xC694;&#xC778;&#xC5D0; N &#xB9E8;&#xB05D; carboxyglutamic &#xC0B0;&#xC774; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; (Gla) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xD1B5;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xACE0;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xBBF8; 10 C 12&#xB294; &#xC788;&#xB294; &#xB098; &#xB780;-&#xCE7C;&#xC298; &#xC885;&#xC18D; anti-factor IX &#xCCB4;, &#xCE7C;&#xC298; &#xC548;&#xC815; Gla &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xB3C5; &#xD558; &#xACE0; &#xC778;&#xC790; IX &#xB9C9; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xB294;. &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; 10 C 12 &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xD56D; &#xC751;&#xACE0; &#xC81C; &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; &#xCD9C;&#xD608; &#xC5C6;&#xC774; &#xD608;&#xC804; &#xC99D; &#xAC10;&#xC1E0;&#xC5D0; &#xB420; &#xC785;&#xC99D; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04; &#xC778;&#xC790; IX&#xC758; Gla &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; 10 C 12&#xC640; &#xADF8;&#xC758; &#xB180;&#xB77C;&#xC6B4; &#xC870;&#xAC01;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xD654;&#xB294; &#xC0AC;&#xC18C;&#xD55C;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xACB0;&#xC815; &#xD654; &#xC870;&#xAC74; &#xBC0F;&#xC774; &#xACB0;&#xC815; &#xD654; &#xACFC;&#xC815;&#xC758; &#xD2B9;&#xC774; &#xD55C; &#xCE21;&#xBA74; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Anti-factor IX &#xD56D; &#xCCB4; &#xBC0F; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xACB0;&#xC815; &#xD654;.

Iniciaci&oacute;n, propagaci&oacute;n y procesos de regulaci&oacute;n de la coagulaci&oacute;n sangu&iacute;nea ocurren en la superficie celular. Durante la coagulaci&oacute;n de la sangre, muchos factores de coagulaci&oacute;n est&aacute;n ancladas en las membranas de la superficie celular a trav&eacute;s de sus dominios N-terminal carboxyglutamic ricos en &aacute;cido (Gla) encontradas tales factores de coagulaci&oacute;n dependientes de vitamina K sangre como factores VII, IX, X, protrombina, factores C y S. 10 C 12 es una conformaci&oacute;n calcio-dependiente anti-factor IX anticuerpos espec&iacute;ficos, que se direcci&oacute;n en el dominio Gla de calcio estabilizado e interfieren con la interacci&oacute;n del factor IX-membrana. En una variedad de modelos animales, 10 C 12 ha demostrado ser eficaz anticoagulante para atenuar la trombosis sin sangrado severo. La cristalizaci&oacute;n del fragmento Fab de 10 C 12 y su complejo con el dominio Gla de factor humano IX no era trivial. Aqu&iacute;, las condiciones de cristalizaci&oacute;n y aspectos inusuales de este proceso de cristalizaci&oacute;n se divulgan.

Cristalizaci&oacute;n de un anticuerpo anti-factor de IX y su complejo.

&#x5C3F;&#x6FC0;&#x9176;&#x578B;&#x7EA4;&#x6EB6;&#x9176;&#x539F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5242; (uPA) &#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x7247;&#x6BB5; &#xFF08;ATF&#xFF0C;Ser1 Glu143&#xFF09; &#x8D1F;&#x8D23; uPA&#xFF0C;&#x53D7;&#x4F53;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x8D8B;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x7B49;&#x4E00;&#x4E9B;&#x91CD;&#x8981;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x5256;&#x6790; ATF &#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;-&#x6D3B;&#x6027;&#x5173;&#x7CFB;&#xFF0C;&#x91CD;&#x7EC4;&#x4EBA;&#x7C7B; ATF &#x88AB;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x6BD5;&#x8D64;&#x9175;&#x6BCD;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5728;&#x4EA7;&#x91CF;&#x7684;&#x7EA6; 30 mg/l&#x3002;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684; ATF &#x662F;&#x7531;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#x67F1;&#x6355;&#x83B7;&#x3001; &#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7EAF;&#x5EA6; 99%&#x5230;&#x4E86;&#x7EAF;&#x5316;&#x7684;&#x51DD;&#x80F6;&#x8FC7;&#x6EE4;&#x5217;&#xFF0C;&#x548C;&#x5176;&#x53D7;&#x4F53;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x7EAF;&#x51C0;&#x7684; ATF &#x7136;&#x540E;&#x4F53;&#x73B0;&#x7684;&#x786B;&#x9178;&#x9541;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6C89;&#x6DC0;&#x5242;&#x5728; 298 K.&#x5750;&#x6EF4;&#x6C14;&#x76F8;&#x6269;&#x6563;&#x6CD5;&#x6676;&#x4F53;&#x5C5E;&#x4E8E;&#x7A7A;&#x95F4;&#x7FA4; P1 &#x4E0E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5C3A;&#x5BF8;&#x7684; = 47.5A&#xFF0C;b = 64.7A&#xFF0C;c = 65.4A&#xFF0C;&alpha; = 71.6 &#x5EA6;&#xFF0C;beta = 92.1 &#x5EA6; &gamma; = 84.0 &#x5EA6;&#x3002;

&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E;&#x5C3F;&#x6FC0;&#x9176;&#x578B;&#x7EA4;&#x6EB6;&#x9176;&#x539F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5242;&#x6C28;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x7247;&#x6BB5;&#x7684;&#x521D;&#x6B65;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

The amino-terminal fragment (ATF, Ser1-Glu143) of urokinase-type plasminogen activator (uPA) is responsible for some important functions of uPA, such as receptor binding and chemotactic activity. To dissect the function and structure-activity relationship of ATF, recombinant human ATF was expressed in Pichia pastoris system at a yield of about 30 mg/L. The recombinant ATF was captured by a cation exchange column, further purified up to 99% purity by a gel filtration column, and characterized in terms of its receptor binding capability. The purified ATF was then crystallized by the method of sitting-drop vapor diffusion with magnesium sulfate as the precipitating agent at 298 K. The crystals belong to space group P1 with unit cell dimensions of a=47.5A, b=64.7A, c=65.4A, alpha=71.6 degrees , beta=92.1 degrees , gamma=84.0 degrees .

Protein expression and preliminary crystallographic analysis of amino-terminal fragment of urokinase-type plasminogen activator.

Le fragment d&#39;amino-terminale (ATF, Ser1-Glu143) de l&#39;activateur du plasminog&egrave;ne de type urokinase (uPA) est responsable de certaines fonctions importantes de l&#39;uPA, telles que la liaison aux r&eacute;cepteurs et activit&eacute; chimiotactique. Pour diss&eacute;quer la relation structure-activit&eacute; et fonction d&#39;ATF, ATF humaine recombinante a &eacute;t&eacute; exprim&eacute; dans Pichia pastoris syst&egrave;me &agrave; un rendement d&#39;environ 30 mg/L. L&#39;ATF recombinante a &eacute;t&eacute; captur&eacute; par une colonne &eacute;changeuse de cations, davantage purifi&eacute;e vers le haut &agrave; la puret&eacute; de 99 % par une colonne de gel filtration et caract&eacute;ris&eacute; sur le plan de sa capacit&eacute; de liaison du r&eacute;cepteur. L&#39;ATF purifi&eacute;e est ensuite cristallis&eacute; par la m&eacute;thode de diffusion de la vapeur de la s&eacute;ance-d&eacute;placer avec le sulfate de magn&eacute;sium comme l&#39;agent de pr&eacute;cipitation &agrave; 298 K. Les cristaux appartiennent au groupe d&#39;espace P1 avec des dimensions de maille a = 47.5A, b = 64.7A, c = 65.4A, alpha = 71,6 degr&eacute;s, b&ecirc;ta = 92,1 degr&eacute;s, gamma = 84 degr&eacute;s.

Expression de la prot&eacute;ine et analyse cristallographique pr&eacute;liminaire du fragment amino-terminale de l&#39;activateur du plasminog&egrave;ne de type urokinase.

Das amino-Terminal Fragment (ATF, Ser1-Glu143) der Urokinase Plasminogen Aktivator (uPA) ist verantwortlich f&uuml;r einige wichtigen Funktionen von uPA, wie Rezeptor und chemotaktische Aktivit&auml;t. Um die Funktion und Struktur-Wirkungs-Beziehung von ATF zu zergliedern, &auml;u&szlig;erte sich rekombinante menschliche ATF in Pichia Pastoris System bei einer Ausbeute von etwa 30 mg/L. Die rekombinante ATF war durch eine Kat-Spalte gefangen, weiter bis zu 99 % Reinheit durch eine Gel-Filtration-Spalte gereinigt und charakterisiert in Bezug auf seine Rezeptor-Bindung-F&auml;higkeit. Die gereinigte ATF war dann nach der Methode der Sitzung Drop Dampf Diffusion mit Magnesium-Sulfat als das F&auml;llungsreagenz bei 298 K. kristallisiert. Die Kristalle geh&ouml;ren Raumgruppe P1 mit Einheit Zelle Ma&szlig;en ein = 47.5A, b = 64.7A, C = 65.4A, Alpha = 71,6 Grad, Beta = 92,1 Grad Gamma = 84,0 Grad.

Proteinexpression und kristallographische Voranalyse von amino-Terminal Fragment des Urokinase Plasminogen Aktivator.

Il frammento ammino-terminale (ATF, Ser1-Glu143) dell&#39;attivatore del plasminogeno di tipo urochinasi (uPA) &egrave; responsabile di alcune importanti funzioni di uPA, come associazione del recettore e l&#39;attivit&agrave; chemiotattica. Per sezionare la relazione struttura-attivit&agrave; e funzione di ATF, ATF umana ricombinante &egrave; stata espressa in Pichia pastoris sistema a una resa di circa 30 mg/L. L&#39;ATF ricombinante &egrave; stato catturato da una colonna di scambio cationico, ulteriormente purificato fino al 99% di purezza di una colonna di gel filtrazione e caratterizzata in termini della sua capacit&agrave; di legame del recettore. L&#39;ATF purificato &egrave; stato quindi cristallizzato dal metodo di diffusione di vapore seduta-goccia con solfato di magnesio come l&#39;agente precipitante a 298 K. I cristalli appartengono al gruppo spazio P1 con dimensioni cella unit&agrave; di a = 47.5A, b = 64.7A, c = 65.4A, alfa = 71,6 gradi, beta = 92,1 gradi, gamma = 84,0 gradi.

Espressione della proteina e preliminare analisi cristallografica del amminico-terminale frammento dell&#39;attivatore del plasminogeno di tipo urochinasi.

&#x30A6;&#x30ED;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x578B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;uPA&#xFF09; &#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x672B;&#x7AEF;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; ATF &#xFF08;Ser1 Glu143&#xFF09; &#x306F;&#x3001;uPA &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x7D50;&#x5408;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x904A;&#x8D70;&#x6D3B;&#x6027;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;ATF &#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x3068;&#x69CB;&#x9020;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x3072;&#x3068; ATF &#x306F;&#x3001;Pichia &#x7D44;&#x6210;&#x5206;&#x6790;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x7D04; 30 mg/L &#x306E;&#x53CE;&#x7387;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; ATF &#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB;&#x30AB;&#x30E9;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30C1;&#x30E3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x3092; 99 &#xFF05; &#x306E;&#x9AD8;&#x7D14;&#x5EA6;&#x306B;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x30B2;&#x30EB;&#x6FFE;&#x904E;&#x306E;&#x30B3;&#x30E9;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x7D50;&#x5408;&#x80FD;&#x529B;&#x9762;&#x3067;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7CBE;&#x88FD;&#x306E; ATF &#x306F;&#x3001;298 K &#x3067;&#x6C88;&#x964D;&#x5264;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x786B;&#x9178;&#x30DE;&#x30B0;&#x30CD;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3068;&#x30B7;&#x30C3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30C9;&#x30ED;&#x30C3;&#x30D7;&#x84B8;&#x6C17;&#x62E1;&#x6563;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D50;&#x6676;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x6676;&#x9818;&#x57DF;&#x306E; P1 &#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x3068;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x306F; 47.5A&#x3001;= b 64.7A, c = = 65.4A&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; = 71.6 &#x5EA6;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; 92.1 &#x5EA6; = &#x30AC;&#x30F3;&#x30DE; = 84.0 &#x5EA6;&#x3002;

&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A6;&#x30ED;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x578B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x672B;&#x7AEF;&#x65AD;&#x7247;&#x306E;&#x4E88;&#x5099;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x3002;

Urokinase &#xD615; plasminogen activator (uPA)&#xC758; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC870;&#xAC01; (ATF, Ser1 Glu143)&#xC740; uPA, &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xD608; &#xD65C;&#xB3D9; &#xB4F1;&#xC758; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;. ATF&#xC758; &#xD568;&#xC218; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xC870; &#xD65C;&#xB3D9; &#xAD00;&#xACC4; &#xD574; &#xBD80;, &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC778;&#xAC04; ATF &#xC57D; 30mg/&#xB098;&#xC758; &#xC218;&#xC775;&#xB960;&#xC5D0; Pichia pastoris &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; ATF&#xB294; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658; &#xCE7C;&#xB7FC;, &#xCD94;&#xAC00; &#xC824; &#xC5EC;&#xACFC; &#xC5F4;&#xC744; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; 99% &#xC21C;&#xB3C4; &#xC815;&#xD654; &#xCEA1;&#xCC98;&#xD558;&#xACE0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xAE30;&#xB2A5; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xC815;&#xD654; ATF&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; 298 &#xACF5;&#xD654;&#xAD6D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACC4;&#xAE30; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xB85C; &#xD669;&#xC0B0; &#xB9C8;&#xADF8;&#xB124;&#xC298;&#xC73C;&#xB85C; &#xC549;&#xC544; &#xB4DC;&#xB86D; &#xC99D;&#xAE30; &#xD655;&#xC0B0; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xD654; &#xB41C; &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8;&#xC758; &#xB2E8;&#xC704; &#xC140; &#xD06C;&#xAE30;&#xC640; &#xACF5;&#xAC04; &#xADF8;&#xB8F9; p 1&#xACFC;&#xC5D0; &#xC18D;&#xD558;&#xB294; &#xD55C; = 47.5A, b 64.7A, c = 65.4A, = &#xC54C;&#xD30C; = 71.6&#xB3C4; &#xBCA0;&#xD0C0; = 92.1&#xB3C4; &#xAC10;&#xB9C8; = 84.0&#xB3C4;.

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD45C;&#xC815;&#xACFC; urokinase &#xD615; plasminogen activator&#xC758; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC870;&#xAC01;&#xC758; &#xC608;&#xBE44; crystallographic &#xBD84;&#xC11D;.

El fragmento de amino-terminal (ATF, Ser1-Glu143) de activador de plasmin&oacute;geno tipo uroquinasa (uPA) es responsable de algunas funciones importantes de uPA, atascamiento del receptor como actividad quimiot&aacute;ctica. Para diseccionar la relaci&oacute;n de la funci&oacute;n y estructura y actividad de ATF, ATF humana recombinante se expres&oacute; en Pichia pastoris sistema con un rendimiento de aproximadamente 30 mg/L. La ATF recombinante fue capturada por una columna de intercambio cati&oacute;nico, m&aacute;s purificada hasta a 99% de pureza por una columna de filtraci&oacute;n de gel y caracterizada en t&eacute;rminos de su capacidad de uni&oacute;n del receptor. La ATF purificada se cristaliz&oacute; luego por el m&eacute;todo de difusi&oacute;n de vapor de sesi&oacute;n-gota con sulfato de magnesio como agente precipitante a 298 K. Los cristales pertenecen al grupo de espacio P1 con dimensiones de la c&eacute;lula de la unidad de un = 47.5A, b = 64.7A, c = 65.4A, alfa = 71.6 grados, beta = 92,1 grados, gamma = 84,0 grados.

Expresi&oacute;n de la prote&iacute;na y an&aacute;lisis cristalogr&aacute;ficos preliminar del fragmento amino-terminal del activador del plasmin&oacute;geno de tipo urokinasa.

&#x4EBA;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x86CB;&#x767D; (HSA) &#x662F;&#x6700;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&#x8840;&#x6D46;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x4EBA;&#x4F53;&#x5185;&#x4E0E;&#x8840;&#x836F;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684; 0.6 m m&#x3002;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x836F;&#x7269;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x548C;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4E2D;&#x5177;&#x6709;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x5BF9;&#x4E0D;&#x540C;&#x5E95;&#x7269;&#x6216;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x8BB0;&#x5F55;&#x5728;&#x6848;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x5206;&#x522B;&#x786E;&#x5B9A;&#x5728;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x963F;&#x53F8;&#x5339;&#x6797;&#x548C;&#x6C34;&#x6768;&#x9178;&#xFF0C;HSA-&#x8089;&#x8C46;&#x853B;&#x9178;&#x916F;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;HSA-&#x8089;&#x8C46;&#x853B;&#x9178;&#x916F;-&#x963F;&#x53F8;&#x5339;&#x6797;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x8BF4;&#x660E;&#x4E86;&#x963F;&#x53F8;&#x5339;&#x6797;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x4E59;&#x9170;&#x8BE5;&#x7EC4;&#x5BF9; Lys199 &#x548C;&#x6210;&#x6C34;&#x6768;&#x9178;&#x6C34;&#x89E3;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x6C34;&#x89E3;&#x4EA7;&#x7269;&#xFF0C;&#x6C34;&#x6768;&#x9178;&#xFF0C;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; HSA &#x5728;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x6F14;&#x793A;&#x4E86;&#x975E;&#x5E38;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x65B9;&#x5411;&#x4E0E;&#x6C34;&#x6768;&#x9178;&#x7684; HSA &#x8089;&#x8C46;&#x853B;&#x9178;&#x916F;&#x6C34;&#x6768;&#x9178;&#x9178;&#x4E09;&#x5143;&#x76F8;&#x6BD4;&#x590D;&#x6742;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C; HSA&#xFF0C;&#x916F;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x8BC1;&#x636E;&#x548C;&#x8BC1;&#x660E;&#x836F;&#x7269;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E0A;&#x7684;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x6784;&#x8C61;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8FD8;&#x53EF;&#x80FD;&#x901A;&#x8FC7;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x836F;&#x7269;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x8BA1;&#x7B97;&#x65B9;&#x6CD5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x836F;&#x7269;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x4FE1;&#x606F;&#x3002;

&#x4EBA;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x5BF9;&#x836F;&#x7269;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF1A; &#x7ED3;&#x6784;&#x8BC1;&#x636E;&#x7684;&#x4EBA;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x916F;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

Human serum albumin (HSA) is the most abundant plasma protein in the human body with a plasma concentration of 0.6mM. HSA plays an important role in drug transport and metabolism. Enzymatic activity of HSA on different substrates or drugs has been studied and documented. The structural mechanism of this activity, however, is unknown. In this study, we have determined the crystal structures of HSA-myristate in a complex of aspirin and of salicylic acid, respectively. The crystal structure of HSA-myristate-aspirin illustrates that aspirin transfers acetyl group to Lys199 and is hydrolyzed into salicylic acid by HSA. The hydrolysis product, salicylic acid, remains bound to HSA at a similar location, but it shows a very different orientation when compared with the salicylic acid in the HSA-myristate-salicylic acid ternary complex. These results not only provide the structural evidence of esterase activity of HSA, and demonstrate the conformational plasticity of HSA on drug binding, but also may provide structural information for the modulation of HSA-drug interaction by computational approach based on HSA-drug structure.

Effect of human serum albumin on drug metabolism: structural evidence of esterase activity of human serum albumin.

Albumine s&eacute;rique humaine (ASH) est la prot&eacute;ine la plus abondante de plasma dans le corps humain avec une concentration plasmatique de 0,6 mM. HSA joue un r&ocirc;le important dans le m&eacute;tabolisme et le transport de drogue. Activit&eacute; enzymatique de la HSA sur diff&eacute;rents substrats ou des m&eacute;dicaments a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e et document&eacute;e. Le m&eacute;canisme structurel de cette activit&eacute;, cependant, est inconnu. Dans cette &eacute;tude, nous avons d&eacute;termin&eacute; les structures cristallines des HSA-myristate dans un complexe de l&#39;aspirine et de l&#39;acide salicylique, respectivement. La structure cristalline du HSA-myristate-aspirine illustre ce groupe d&#39;ac&eacute;tyle transferts aspirine &agrave; Lys199 et est hydrolys&eacute;e en acide salicylique par HSA. Le produit de l&#39;hydrolyse, l&#39;acide salicylique, demeure li&eacute; &agrave; HSA &agrave; un emplacement similaire, mais il montre une orientation tr&egrave;s diff&eacute;rente par rapport &agrave; l&#39;acide salicylique dans le ternaire acid salicylique-HSA-myristate complexes. Ces r&eacute;sultats non seulement fournissent les preuves de structure de l&#39;activit&eacute; est&eacute;rasique des HSA et d&eacute;montrent la plasticit&eacute; conformationnelle des HSA sur la liaison de la drogue, mais aussi peuvent fournir des informations structurelles pour la modulation de l&#39;interaction m&eacute;dicamenteuse-HSA par approche computationnelle bas&eacute;e sur structure HSA-drogue.

Effet de l&#39;albumine s&eacute;rique humaine sur le m&eacute;tabolisme des m&eacute;dicaments : preuves de structure de l&#39;activit&eacute; est&eacute;rasique de l&#39;albumine s&eacute;rique humaine.

Menschliches Serum Albumin (HSA) ist das h&auml;ufigste Plasmaprotein im menschlichen K&ouml;rper mit eine Plasmakonzentration von 0,6 mM. HSA spielt eine wichtige Rolle in Wirkstofftransport und Stoffwechsel. Enzymatische Aktivit&auml;t der HSA auf unterschiedlichen Substraten oder Drogen hat studiert und dokumentiert. Strukturelle Mechanismus dieser Aktivit&auml;t ist jedoch unbekannt. In dieser Studie haben wir die Kristallstrukturen der HSA-Isopropylmyristat in einem Komplex von Aspirin und Salicyls&auml;ure, bzw. festgelegt. Die Kristallstruktur von HSA-Isopropylmyristat-Aspirin veranschaulicht dieser Aspirin &Uuml;bertragungen Acetyl-Gruppe die Lys199 und wird von HSA in Salicyls&auml;ure hydrolysiert. Das Hydrolyse-Produkt, Salicyls&auml;ure, HSA an einem &auml;hnlichen Standort verpflichtet bleibt, aber es zeigt eine sehr unterschiedliche Orientierung im Vergleich mit der Salicyls&auml;ure in den HSA-Isopropylmyristat-Salicyl-S&auml;ure tern&auml;ren Komplex. Diese Ergebnisse nicht nur die strukturelle Beweise der Esterase-Aktivit&auml;t der HSA, und demonstrieren die Konformations&auml;nderungen Plastizit&auml;t der HSA auf Droge Bindung, bieten aber auch k&ouml;nnen Strukturinformationen f&uuml;r die Modulation der HSA-medikament&ouml;se Wechselwirkung von computational Ansatz basierend auf Drogen-HSA-Struktur.

Auswirkungen der menschlichen Serum-Albumin auf Medikamentenstoffwechsel: strukturelle Beweise der Esterase-Aktivit&auml;t des menschlichen Serum-Albumin.

Albumina di siero umano (HSA) &egrave; la proteina del plasma pi&ugrave; abbondante nel corpo umano con una concentrazione plasmatica di 0,6 mM. HSA gioca un ruolo importante nel metabolismo e trasporto di droga. Attivit&agrave; enzimatica di HSA su diversi substrati o droghe &egrave; stato studiato e documentato. Il meccanismo strutturale di questa attivit&agrave;, tuttavia, &egrave; sconosciuto. In questo studio, abbiamo determinato le strutture di cristallo di HSA-Miristato in un complesso di aspirina e di acido salicilico, rispettivamente. La struttura di cristallo di HSA-Miristato-aspirina illustra tale gruppo acetile trasferimenti aspirina Lys199 ed &egrave; idrolizzata in acido salicilico da HSA. Il prodotto di idrolisi, l&#39;acido salicilico, rimane legato alla HSA in una posizione simile, ma mostra un orientamento molto diverso quando confrontato con l&#39;acido salicilico la HSA-Miristato-salicilico Acido ternario complesso. Questi risultati non solo forniscono le prove strutturali di esterasi attivit&agrave; di HSA e dimostrano la plasticit&agrave; conformazionale di HSA associazione droga, ma anche possono fornire informazioni strutturali per la modulazione dell&#39;interazione farmaco-HSA di approccio computazionale basato sulla struttura di HSA-droga.

Effetto di albumina sierica umana sul metabolismo del farmaco: prove strutturali di esterasi attivit&agrave; di albumina di siero umano.

&#x3072;&#x3068;&#x8840;&#x6E05;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D6;&#x30DF;&#x30F3; (HSA) 0.6 mm &#x306E;&#x8840;&#x6F3F;&#x4E2D;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3068;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x6700;&#x3082;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x8840;&#x6F3F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HSA &#x85AC;&#x7269;&#x8F38;&#x9001;&#x3068;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HSA &#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x57FA;&#x677F;&#x3084;&#x85AC;&#x7269;&#x304C;&#x52C9;&#x5F37;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C; HSA &#x30DF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3;&#x9178;&#x3068;&#x30B5;&#x30EA;&#x30C1;&#x30EB;&#x9178;&#x3001;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D4;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;HSA &#x30DF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3;&#x9178;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D4;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D4;&#x30EA;&#x30F3;&#x8EE2;&#x9001;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B; Lys199 &#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x30B5;&#x30EA;&#x30C1;&#x30EB;&#x9178;&#x306B; HSA &#x3067;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x7269;&#x3001;&#x30B5;&#x30EA;&#x30C1;&#x30EB;&#x9178;&#x3001;HSA &#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x5834;&#x6240;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x307E;&#x307E;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x8907;&#x96D1;&#x306A; HSA &#x30DF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C1;&#x30F3;&#x9178;&#x30B5;&#x30EA;&#x30C1;&#x30EB;&#x9178;&#x9178; 3&#x5143;&#x7CFB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B5;&#x30EA;&#x30C1;&#x30EB;&#x9178;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x65B9;&#x5411;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x307F;&#x306A;&#x3089;&#x305A; HSA &#x306E;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057; HSA &#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DB;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x85AC;&#x7269;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x304C;&#x307E;&#x305F; HSA &#x85AC;&#x7269;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x60C5;&#x5831;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;HSA &#x85AC;&#x7269;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x8A08;&#x7B97;&#x8AD6;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x85AC;&#x7269;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x3072;&#x3068;&#x8840;&#x6E05;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D6;&#x30DF;&#x30F3;: &#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x3072;&#x3068;&#x8840;&#x6E05;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D6;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306A;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3002;

&#xC778;&#xAC04; &#xD608; &#xCCAD; &#xC54C; &#xBD80; &#xBBFC; (HSA) 0.6 m M&#xC758; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4;&#xB9C8; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC640; &#xC778;&#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4;&#xB9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB2E4;. HSA &#xC57D;&#xBB3C; &#xC218;&#xC1A1; &#xBC0F; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB300;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30;&#xD310; &#xB610;&#xB294; &#xB9C8;&#xC57D; HSA&#xC758; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558; &#xACE0; &#xBB38;&#xC11C;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;,&#xC774; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC640; &#xC0B4;&#xB9AC;&#xC2E4;&#xC0B0;&#xC758; &#xC0B0; &#xC131;, &#xC544;&#xC2A4;&#xD53C;&#xB9B0;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC5D0;&#xC11C; HSA myristate&#xC758; &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xAC01;&#xAC01; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. HSA-myristate-&#xC544;&#xC2A4;&#xD53C;&#xB9B0;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xC544;&#xC2A4;&#xD53C;&#xB9B0; &#xC804;&#xC1A1; &#xC544; &#xC138; &#xD2F8; &#xADF8;&#xB8F9; Lys199 &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; HSA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0B4;&#xB9AC;&#xC2E4;&#xC0B0;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xD574;. &#xAC00; &#xC218; &#xBD84;&#xD574; &#xC81C;&#xD488;, &#xC0B4;&#xB9AC;&#xC2E4;&#xC0B0;, HSA&#xC5D0; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; HSA myristate &#xC0B4;&#xB9AC;&#xC2E4;&#xC0B0; &#xC0B0; &#xC0BC;&#xD56D; &#xC0B4;&#xB9AC;&#xC2E4;&#xC0B0;&#xACFC; &#xBE44;&#xAD50;&#xD560; &#xB54C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC29;&#xD5A5; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; esterase HSA, &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xB9C8;&#xC57D; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; HSA&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC18C;&#xC131; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB610;&#xD55C; HSA-&#xC57D;&#xBB3C; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xC804;&#xC0B0; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; HSA &#xC57D;&#xBB3C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC57D;&#xBB3C; &#xB300;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xC778;&#xAC04; &#xD608; &#xCCAD; &#xC54C; &#xBD80; &#xBBFC;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;:&#xC758; &#xC778;&#xAC04; &#xD608; &#xCCAD; &#xC54C; &#xBD80; &#xBBFC; esterase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC99D;&#xAC70;.

Alb&uacute;mina s&eacute;rica humana (HSA) es la prote&iacute;na m&aacute;s abundante de plasma en el cuerpo humano con una concentraci&oacute;n plasm&aacute;tica de 0,6 mM. HSA desempe&ntilde;a un papel importante en el metabolismo y transporte de la droga. Actividad enzim&aacute;tica de HSA en diferentes sustratos o medicamentos ha sido estudiada y documentado. Sin embargo, se desconoce el mecanismo estructural de esta actividad. En este estudio, hemos determinado las estructuras cristalinas de HSA-miristato en un complejo de aspirina y &aacute;cido salic&iacute;lico, respectivamente. La estructura cristalina de HSA-miristato-aspirina ilustra ese grupo de acetilo de transferencias de aspirina a Lys199 y se hidroliza a &aacute;cido salic&iacute;lico por HSA. El producto de la hidr&oacute;lisis, &aacute;cido salic&iacute;lico, queda obligado a HSA en una situaci&oacute;n similar, pero muestra una orientaci&oacute;n muy diferente en comparaci&oacute;n con el &aacute;cido salic&iacute;lico en la HSA-miristato-salic&iacute;lico &aacute;cido ternario complejo. Estos resultados no s&oacute;lo proporcionan la evidencia estructural de actividad esterasa de HSA y demuestran la plasticidad conformacional de HSA en Uni&oacute;n de la droga, pero tambi&eacute;n pueden proporcionar la informaci&oacute;n estructural para la modulaci&oacute;n de la interacci&oacute;n de drogas HSA por enfoque computacional basado en la estructura de HSA-drogas.

Efecto de alb&uacute;mina s&eacute;rica humana sobre el metabolismo de la droga: evidencia estructural de actividad esterasa de alb&uacute;mina s&eacute;rica humana.

&#x5C3F;&#x6FC0;&#x9176;&#x578B;&#x7EA4;&#x6EB6;&#x9176;&#x539F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5242; (uPA) &#x7EA4;&#x6EB6;&#x9176;&#x539F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3001; &#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x548C;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684;&#x89C4;&#x5F8B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;UPA &#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x6297;&#x764C;&#x7597;&#x6CD5;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x5FAA;&#x73AF;&#x80BD;&#x7C7B;&#x6291;&#x5236;&#x5242; upain-1&#xFF0C;CSWRGLENHRMC&#xFF0C;&#x6700;&#x8FD1;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x7ADE;&#x4E89;&#x548C;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x5177;&#x4F53; uPA &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728; 2.15 A.&#x786E;&#x5B9A;&#x5728;&#x590D;&#x6742;&#x4E0E; upain-1 &#x7EA4;&#x6EB6;&#x9176;&#x539F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7269;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x7ED3;&#x6784;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7684;&#x80BD;&#x91C7;&#x7528;&#x521A;&#x6027;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E; &#xFF08;&#x6B8B;&#x7559; 1-12&#xFF09; &#x548C;&#x4E09;&#x4E2A;&#x7D27; beta &#x6253;&#x5F00; &#xFF08;&#x6B8B;&#x7559; 3-6&#xFF0C;6-9&#x3001; 9-12)&#x3002;Upain-1 Glu7 &#x6B8B;&#x7559;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269; 4&#x3001; 5 &#x548C; 6 &#x7684; upain-1 &#x4E3B;&#x94FE;&#x6C2E;&#x539F;&#x5B50;&#x4E0E;&#x6C22;&#x503A;&#x5238;&#x548C;&#x4FDD;&#x6301;&#x79EF;&#x6781;&#x6784;&#x8C61;&#x7684; upain-1 &#x4E5F;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;Upain-1 &#x4E86; Arg4 &#x63D2;&#x5165;&#x5230; uPA &#x5177;&#x4F53; S1 &#x53E3;&#x888B;&#x4E2D;&#x3002;Upain-1 Ser2 &#x6B8B;&#x7559;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x63A5;&#x8FD1; S1beta &#x53E3;&#x888B;&#x7EA4;&#x6EB6;&#x9176;&#x539F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7269;&#x3002;Upain-1 Gly5 &#x548C; Glu7 &#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x91CF;&#x5206;&#x522B;&#x5360; S2 &#x53E3;&#x888B;&#x548C; uPA&#xFF0C;oxyanion &#x5B54;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;upain-1 Asn8 &#x6B8B;&#x7559;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; 37-60-&#x73AF;&#x7EA4;&#x6EB6;&#x9176;&#x539F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7269;&#x548C;&#x5448;&#x73B0;&#x4E3A; uPA upain 1 &#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x6709;&#x4EBA;&#x63D0;&#x8BAE;&#x65B0;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7684;&#x975E;&#x5E38;&#x5177;&#x4F53;&#x7684; uPA &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x836F;&#x6548;&#x3002;

&#x7ED3;&#x6784;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x80BD;&#x7C7B;&#x5C3F;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;upain-1&#x3002;

Urokinase-type plasminogen activator (uPA) plays a crucial role in the regulation of plasminogen activation, tumor cell adhesion and migration. The inhibition of uPA activity is a promising mechanism for anti-cancer therapy. A cyclic peptidyl inhibitor, upain-1, CSWRGLENHRMC, was identified recently as a competitive and highly specific uPA inhibitor. We determined the crystal structure of uPA in complex with upain-1 at 2.15 A. The structure reveals that the cyclic peptide adopts a rigid conformation stabilized by a disulfide bond (residues 1-12) and three tight beta turns (residues 3-6, 6-9, 9-12). The Glu7 residue of upain-1 forms hydrogen bonds with the main chain nitrogen atoms of residues 4, 5, and 6 of upain-1, and is also critical for maintaining the active conformation of upain-1. The Arg4 of upain-1 is inserted into the uPA's specific S1 pocket. The Ser2 residue of upain-1 locates close to the S1beta pocket of uPA. The Gly5 and Glu7 residues of upain-1 occupy the S2 pocket and the oxyanion hole of uPA, respectively. Furthermore, the Asn8 residue of upain-1 binds to the 37- and 60-loops of uPA and renders the specificity of upain-1 for uPA. Based on this structure, a new pharmacophore for the design of highly specific uPA inhibitors was proposed.

Structural basis of specificity of a peptidyl urokinase inhibitor, upain-1.

Activateur du plasminog&egrave;ne de type urokinase (uPA) joue un r&ocirc;le crucial dans la r&eacute;gulation de l&#39;activation du plasminog&egrave;ne, adh&eacute;sion cellulaire tumorale et la migration. L&#39;inhibition de l&#39;activit&eacute; de l&#39;uPA est un m&eacute;canisme de traitement anticanc&eacute;reux prometteur. Un inhibiteur de la peptidyl cyclique, upain-1, CSWRGLENHRMC, a &eacute;t&eacute; r&eacute;cemment identifi&eacute; comme un inhibiteur de l&#39;uPA comp&eacute;titive et tr&egrave;s sp&eacute;cifique. Nous avons d&eacute;termin&eacute; la structure cristalline de l&#39;uPA en complexe avec upain-1 &agrave; 2.15 A. La structure r&eacute;v&egrave;le que le peptide cyclique adopte une conformation rigide stabilis&eacute;e par un pont disulfure (r&eacute;sidus 1-12) et trois b&ecirc;ta serr&eacute; transforme (r&eacute;sidus 3-6, 6-9, 9-12). Le r&eacute;sidu de Glu7 du upain-1 forme des liaisons hydrog&egrave;nes avec les atomes d&#39;azote de cha&icirc;ne principale de r&eacute;sidus, 4, 5 et 6 du upain-1 et est &eacute;galement essentiel pour le maintien de la conformation active d&#39;upain-1. Le Arg4 du upain-1 est ins&eacute;r&eacute; dans la poche de S1 sp&eacute;cifique de l&#39;uPA. Le r&eacute;sidu Ser2 du upain-1 localise &agrave; proximit&eacute; de la poche de S1beta de l&#39;uPA. Les r&eacute;sidus Gly5 et Glu7 du upain-1 occupent la poche S2 et le trou de l&#39;oxyanion d&#39;uPA, respectivement. En outre, le r&eacute;sidu de Asn8 du upain-1 se lie &agrave; la 37 et 60-boucles de l&#39;uPA et restitue la sp&eacute;cificit&eacute; du upain-1 pour l&#39;uPA. Un pharmacophore nouvelle pour la conception d&#39;inhibiteurs de l&#39;uPA hautement sp&eacute;cifiques bas&eacute;s sur cette structure, a &eacute;t&eacute; propos&eacute;.

Structure de base de la sp&eacute;cificit&eacute; d&#39;un inhibiteur de l&#39;urokinase peptidyl, upain-1.

Urokinase Plasminogen Aktivator (uPA) spielt eine entscheidende Rolle bei der Regulation des Plasminogen-Aktivierung, Tumor-Zell-Adh&auml;sion und Migration. Die Hemmung der uPA T&auml;tigkeit ist ein vielversprechender Mechanismus f&uuml;r die Anti-Krebs-Therapie. Ein zyklischer konvertierende Hemmer, Upain-1, CSWRGLENHRMC, wurde vor kurzem als eine wettbewerbsf&auml;hige und hochspezifische uPA-Inhibitor identifiziert. Wir entschlossen die Kristallstruktur von uPA im Komplex mit Upain-1 bei 2,15 A. Die Struktur zeigt, dass das zyklische Peptid eine starre Konformation stabilisiert durch eine Disulfidbindung (R&uuml;ckst&auml;nde 1-12 nimmt) und drei engen Beta dreht (R&uuml;ckst&auml;nde 3-6, 6-9, 9-12). Glu7 R&uuml;ckst&auml;nde von Upain-1 bildet Wasserstoffbr&uuml;ckenbindungen mit der Hauptkette Stickstoff-Atomen von R&uuml;ckst&auml;nden, 4, 5 und 6 des Upain-1, und ist auch entscheidend f&uuml;r die Aufrechterhaltung der aktiven Gestaltung des Upain-1. Die Arg4 Upain-1 wird in der uPA spezifische S1 Tasche eingef&uuml;gt. Ser2 R&uuml;ckst&auml;nde von Upain-1 sucht in der N&auml;he der S1beta-Tasche von uPA. Gly5 und Glu7 R&uuml;ckst&auml;nde von Upain-1 besetzen die S2-Tasche und dem Oxyanion Hole von uPA, beziehungsweise. Dar&uuml;ber hinaus Asn8 R&uuml;ckst&auml;nde von Upain-1 bindet an die 37 und 60-Schleife des uPA und rendert die Besonderheit des Upain-1 f&uuml;r uPA. Auf der Grundlage dieser Struktur wurde eine neue Pharmakophor f&uuml;r die Gestaltung von hochspezifischen uPA-Inhibitoren vorgeschlagen.

Strukturelle Basis der Besonderheit des ein konvertierende Urokinase-Inhibitor, Upain-1.

Attivatore del plasminogeno di tipo urochinasi (uPA) svolge un ruolo fondamentale nella regolazione dell&#39;attivazione del plasminogeno, adesione delle cellule tumorali e migrazione. L&#39;inibizione dell&#39;attivit&agrave; di uPA &egrave; un meccanismo promettente per la terapia anti-cancro. Un inibitore peptidilica ciclico, upain-1, CSWRGLENHRMC, &egrave; stato recentemente identificato come un inibitore competitivo e altamente specifico uPA. Abbiamo determinato la struttura cristallina dell&#39;uPA in complesso con upain-1 a 2,15 A. La struttura rivela che il peptide ciclico adotta una conformazione rigida stabilizzata da un ponte disolfuro (residui 1-12) e tre stretti beta si trasforma (residui 3-6, 6-9, 9-12). Il residuo di Glu7 di upain-1 forma legami idrogeno con gli atomi di azoto catena principale dei residui 4, 5 e 6 di upain-1 &egrave; anche fondamentale per il mantenimento della conformazione attiva di upain-1. Arg4 di upain-1 viene inserito nella tasca S1 specifica dell&#39;uPA. Il residuo di Ser2 di upain-1 individua nei pressi della tasca S1beta di uPA. I residui di Gly5 e Glu7 di upain-1 occupano la tasca S2 oxyanion foro di uPA, rispettivamente. Inoltre, il residuo di Asn8 di upain-1 si lega per il 37 - e 60-cicli di uPA e rende la specificit&agrave; del upain-1 per uPA. Basato su questa struttura, &egrave; stato proposto un farmacoforo nuova per la progettazione di uPA altamente specifici inibitori.

Base strutturale della specificit&agrave; di un inibitore di urochinasi peptidilica, upain-1.

&#x30A6;&#x30ED;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x578B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;uPA&#xFF09; &#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x79FB;&#x884C;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;UPA &#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x3001;&#x6297;&#x764C;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x7E70;&#x8FD4;&#x3057;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x963B;&#x5BB3;&#x3001;CSWRGLENHRMC&#x3001;upain 1 &#x7AF6;&#x4E89;&#x529B;&#x3068;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E; uPA &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6700;&#x8FD1;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; 2.15 A. &#x3067; uPA upain 1 &#x3068;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x69CB;&#x9020;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x74B0;&#x72B6;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408; &#xFF08;1-12 &#x6B8B;&#x57FA;&#xFF09; &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x525B;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x30BF;&#x30A4;&#x30C8;&#x306A;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7248; 3 &#xFF08;3-6&#x3001;6-9, 9-12 &#x6B8B;&#x57FA;&#xFF09; &#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Upain-1 &#x306E; Glu7 &#x6B8B;&#x6E23;&#x306F; 4&#x3001;5&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; 6 &#x306E; upain 1 &#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x4E3B;&#x9396;&#x306E;&#x7A92;&#x7D20;&#x539F;&#x5B50;&#x3068;&#x6C34;&#x7D20;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x3066;&#x3082; upain-1 &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Arg4 upain 1 &#x306E; uPA &#x306E;&#x7279;&#x5B9A; S1 &#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x633F;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Upain 1 &#x306E; Ser2 &#x6B8B;&#x6E23; uPA &#x306E; S1beta &#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x8FD1;&#x3044;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Gly5 &#x3068; Glu7 &#x6B8B;&#x57FA;&#x306E; upain 1 &#x306F;&#x3001;S2 &#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068; uPA &#x306E;&#x30AA;&#x30AD;&#x30BD;&#x30A2;&#x30CB;&#x30AA;&#x30F3;&#x7A74;&#x3092;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;upain 1 &#x306E; Asn8 &#x6B8B;&#x6E23;&#x3001;37-60-&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092; uPA &#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;upain-1 &#x306E; uPA &#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30DE;&#x30B3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30A2;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E; uPA &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB; &#x30A6;&#x30ED;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x57FA;&#x76E4; upain 1&#x3002;

Urokinase &#xD615; plasminogen activator (uPA) plasminogen &#xD65C;&#xC131;&#xD654;, &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xADDC;&#xCE59;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. UPA &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC800;&#xD574; &#xD56D; &#xC554; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC21C;&#xD658; peptidyl &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; upain-1, CSWRGLENHRMC, &#xACBD;&#xC7C1;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC778; uPA &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB85C; &#xCD5C;&#xADFC; &#xD655;&#xC778; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; 2.15 &#xB300;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; upain-1&#xC5D0;&#xC11C; Upa&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870; &#xACC4;&#xC2DC; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xACB0;&#xD569; (&#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 1-12)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xB41C; &#xACBD;&#xC9C1; &#xB41C; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xCC44;&#xD0DD; &#xD558; &#xACE0; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xAF49; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xBCC0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; (&#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 3-6, 6-9, 9-12). Upain-1 Glu7 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 4, 5, &#xBC0F; upain-1, 6&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xCCB4;&#xC778; &#xC9C8;&#xC18C; &#xC6D0;&#xC790;&#xC640; &#xC218;&#xC18C; &#xACB0;&#xD569;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; upain-1&#xC758; &#xD65C;&#xC131; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Upain-1 Arg4 Upa&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; S1 &#xD3EC;&#xCF13;&#xC5D0; &#xC0BD;&#xC785; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Upain-1 Ser2 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; Upa&#xC758; S1beta &#xD3EC;&#xCF13; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC774; &#xCC3E;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Upain-1 Gly5 &#xBC0F; Glu7 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; S2 &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8;&#xC640; uPA, oxyanion &#xAD6C;&#xBA4D;&#xC744; &#xAC01;&#xAC01; &#xCC28;&#xC9C0;. &#xB610;&#xD55C;, upain-1 Asn8 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; 37-&#xBC0F; 60-&#xB8E8;&#xD504; Upa&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; Upa&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; upain-1&#xC758; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xB80C;&#xB354;&#xB9C1;. &#xC774; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;, &#xB9E4;&#xC6B0; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC778; uPA &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; pharmacophore&#xB294; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;.

Peptidyl urokinase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; upain 1.

Activador de plasmin&oacute;geno tipo uroquinasa (uPA) desempe&ntilde;a un papel crucial en la regulaci&oacute;n de la activaci&oacute;n del plasmin&oacute;geno, la adherencia de la c&eacute;lula del tumor y la migraci&oacute;n. La inhibici&oacute;n de la actividad de la uPA es un mecanismo prometedor para el tratamiento contra el c&aacute;ncer. Un inhibidor de la peptidil c&iacute;clica, upain-1, CSWRGLENHRMC, fue identificado recientemente como un inhibidor competitivo y altamente espec&iacute;fico de la uPA. Determinamos la estructura cristalina de la uPA en complejo con upain-1 en 2.15 A. La estructura revela que el p&eacute;ptido c&iacute;clico adopta una conformaci&oacute;n r&iacute;gida estabilizada por un enlace disulfuro (residuos 1-12) y beta apretado tres vueltas (residuos 3-6, 6-9, 9-12). El residuo de Glu7 de upain-1 forma enlaces de hidr&oacute;geno entre los &aacute;tomos de nitr&oacute;geno de la cadena principal de residuos 4, 5 y 6 de upain-1 y tambi&eacute;n es fundamental para mantener la conformaci&oacute;n activa de upain-1. El Arg4 de upain-1 se inserta en el bolsillo de S1 espec&iacute;fico de la uPA. El residuo de Ser2 de upain-1 se localiza cerca de la bolsa de S1beta de la uPA. Los residuos Gly5 y Glu7 de upain-1 ocupan el bolsillo de S2 y el agujero Oxoani&oacute;n de uPA, respectivamente. Adem&aacute;s, el residuo de Asn8 de upain-1 se une a los 37 - y 60-lazos de uPA y representa la especificidad de upain-1 para uPA. Partiendo de esta estructura, se propuso un nuevo Farmac&oacute;foro para el dise&ntilde;o de inhibidores de la uPA altamente espec&iacute;fico.

Bases estructurales de la especificidad de un inhibidor de la uroquinasa peptidil, upain-1.

Maricaulis &#x9A6C;&#x91CC;&#x65AF;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x51E0;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x53D1;&#x73B0;&#x65B0;&#x578B;&#x53CC;&#x529F;&#x80FD; N-&#x4E59;&#x9170;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x5408;&#x9176;/&#x6FC0;&#x9176; (NAG/K) &#x50AC;&#x5316;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x524D;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6B65;&#x9AA4;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x662F;&#x540C;&#x6E90;&#x5230;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269; N-&#x4E59;&#x9170;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x9176; (NAG) &#x5728;&#x5C3F;&#x7D20;&#x5468;&#x671F;&#xFF0C;&#x57FA;&#x672C;&#x751F;&#x4EA7;&#x8F85;&#x9176;&#x7684;&#x9176;&#x3002;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#x662F;&#x53D8;&#x6784;&#x6291;&#x5236;&#x5242; NAG &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; NAGK &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;M.&#x9A6C;&#x91CC;&#x65AF; NAG/K (mmNAGS/K) 2.7 &#x2460; &#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x6307;&#x793A;&#x5B83;&#x662F; a &#x56DB;&#x805A;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x6DCB;&#x7403;&#x83CC; NAG &#x7684;&#x516D;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0D;&#x540C;&#x3002;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7EAA;&#x7684;&#x7ED3;&#x6676; NAG/K (xcNAGS/K) &#x9EC4;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC;&#x7ED3;&#x6784;&#x5F88;&#x76F8;&#x4F3C;&#xFF0C;&#x548C;&#x4EA4;&#x8054;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8868;&#x660E; mmNAGS/K &#x548C; xcNAGS &#x662F;&#x56DB;&#x805A;&#x7269;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x6709;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176; &#xFF08;&#x79D1;&#x524D;&#x8054;&#xFF09; &#x57DF;&#xFF0C;&#x5B83;&#x662F;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E3A; N-&#x4E59;&#x9170;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176; (NAGK) &#x6D3B;&#x52A8;&#x8D1F;&#x8D23;&#xFF0C;&#x5047;&#x5B9A;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x548C; N-&#x4E59;&#x9170;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176; (NAT) &#x5305;&#x542B;&#x7684;&#x57DF;&#xFF0C;&#x5047;&#x5B9A; NAG &#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x5E8F;&#x5217;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x6B8B;&#x7559; 291 &#x53EF;&#x80FD;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x53D8;&#x6784;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x6216;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x548C;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x540C;&#x6E90;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5242;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x79D1;&#x524D;&#x8054;&#x548C; NAT &#x57DF;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x65CB;&#x8F6C;&#x89D2;&#x5EA6;&#x6676;&#x4F53;&#x5F62;&#x5F0F;&#x548C;&#x5185;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;&#x4E9A;&#x57FA;&#x4E4B;&#x95F4;&#x5404;&#x4E0D;&#x76F8;&#x540C;&#x3002;26 &deg; &#x7684;&#x65CB;&#x8F6C;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x5C06;&#x5173;&#x95ED;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x7684; AcCoA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x51CF;&#x5C11;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;MmNAGS/K &#x4EE5;&#x6765;&#x6700;&#x9AD8;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x4E3A;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269; NAG &#x7684; NAG &#x548C; NAGK &#x9176;&#x786E;&#x5B9A;&#x5176;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;mmNAGS/K &#x7ED3;&#x6784;&#x7528;&#x4E8E;&#x53D1;&#x5C55;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4EBA;&#x7C7B; NAG &#x662F;&#x5B8C;&#x5168;&#x4E00;&#x81F4;&#x7684; 14 &#x9519;&#x4E49;&#x7A81;&#x53D8;&#x6240;&#x67E5;&#x51FA;&#x7684; NAG &#x7F3A;&#x9677;&#x60A3;&#x8005;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

&#x63ED;&#x793A;&#x4ECE;&#x9A6C;&#x91CC;&#x65AF; Maricaulis &#x53CC;&#x529F;&#x80FD;&#x9176;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B; N-&#x4E59;&#x9170;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x5408;&#x9176;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

Novel bifunctional N-acetylglutamate synthase/kinases (NAGS/K) that catalyze the first two steps of arginine biosynthesis and are homologous to vertebrate N-acetylglutamate synthase (NAGS), an essential cofactor-producing enzyme in the urea cycle, were identified in Maricaulis maris and several other bacteria. Arginine is an allosteric inhibitor of NAGS but not NAGK activity. The crystal structure of M. maris NAGS/K (mmNAGS/K) at 2.7 Ã… resolution indicates that it is a tetramer, in contrast to the hexameric structure of Neisseria gonorrhoeae NAGS. The quaternary structure of crystalline NAGS/K from Xanthomonas campestris (xcNAGS/K) is similar, and cross-linking experiments indicate that both mmNAGS/K and xcNAGS are tetramers in solution. Each subunit has an amino acid kinase (AAK) domain, which is likely responsible for N-acetylglutamate kinase (NAGK) activity and has a putative arginine binding site, and an N-acetyltransferase (NAT) domain that contains the putative NAGS active site. These structures and sequence comparisons suggest that the linker residue 291 may determine whether arginine acts as an allosteric inhibitor or activator in homologous enzymes in microorganisms and vertebrates. In addition, the angle of rotation between AAK and NAT domains varies among crystal forms and subunits within the tetramer. A rotation of 26Â° is sufficient to close the predicted AcCoA binding site, thus reducing enzymatic activity. Since mmNAGS/K has the highest degree of sequence homology to vertebrate NAGS of NAGS and NAGK enzymes whose structures have been determined, the mmNAGS/K structure was used to develop a structural model of human NAGS that is fully consistent with the functional effects of the 14 missense mutations that were identified in NAGS-deficient patients.

A Novel N-acetylglutamate synthase architecture revealed by the crystal structure of the bifunctional enzyme from Maricaulis maris.

Roman bifonctionnels N-Ac&eacute;tylglutamate synthase/kinases (NAGS/K) qui catalysent les deux premi&egrave;res &eacute;tapes de la biosynth&egrave;se de l&#39;arginine et sont homologues aux vert&eacute;br&eacute;s N-Ac&eacute;tylglutamate synthase (NAGS), une enzyme produisant cofacteur essentielle dans le cycle de l&#39;ur&eacute;e, ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s en Maricaulis maris et plusieurs autres bact&eacute;ries. L&#39;arginine est un inhibiteur allost&eacute;rique de CANASSONS mais non NAGK. La structure cristalline du M. maris NAGS/K (mmNAGS/K) &agrave; une r&eacute;solution 2,7 &Aring; indique que c&#39;est un t&eacute;tram&egrave;re, contrairement &agrave; la structure hexam&eacute;rique de Neisseria gonorrhoeae NAGS. La structure quaternaire du cristallin NAGS/K de Xanthomonas campestris (xcNAGS/K) est semblable, et des exp&eacute;riences de r&eacute;ticulation indiquent que mmNAGS/K et xcNAGS sont des t&eacute;tram&egrave;res en solution. Chaque sous-unit&eacute; a un domaine kinase (AAK) acides amin&eacute;s, qui est probablement responsable de l&#39;activit&eacute; kinase (NAGK) N-Ac&eacute;tylglutamate et poss&egrave;de un site de liaison putatif arginine et un domaine N-ac&eacute;tyltransf&eacute;rase (NAT) qui contient le site actif NAGS putatif. Ces structures et la comparaison des s&eacute;quences sugg&egrave;rent que le r&eacute;sidu de l&#39;&eacute;diteur de liens 291 peut-&ecirc;tre d&eacute;terminer si l&#39;arginine agit comme un inhibiteur allost&eacute;rique ou activateur des enzymes homologues chez les microorganismes et les vert&eacute;br&eacute;s. En outre, l&#39;angle de rotation entre les domaines de l&#39;AAK et NAT varie selon les formes cristallines et les sous-unit&eacute;s dans le t&eacute;tram&egrave;re. Une rotation du 26 &deg; est suffisante de fermer le site de liaison AcCoA pr&eacute;dit, r&eacute;duisant ainsi l&#39;activit&eacute; enzymatique. MmNAGS/K ayant le plus haut degr&eacute; d&#39;homologie de s&eacute;quence &agrave; NAGS vert&eacute;br&eacute;s de CANASSONS et NAGK enzymes dont les structures ont &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;s, la structure mmNAGS/K a servi &agrave; &eacute;laborer un mod&egrave;le structural de NAGS humaines qui est enti&egrave;rement compatible avec les effets fonctionnels des 14 mutations faux-sens qui ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;es chez les patients d&eacute;ficients en NAGS.

Une nouvelle N-Ac&eacute;tylglutamate synthase architecture t&eacute;moigne de la structure cristalline de l&#39;enzyme bifonctionnelle de Maricaulis maris.

Neuartige bifunktionelle N-Acetylglutamat Synthase/Kinasen (NAGS/K), die katalysieren die ersten beiden Schritte der Arginin-Biosynthese und Homologe, vertebrate N-Acetylglutamat Synthase (NAGS), ein wesentlicher Cofaktor-produzierende Enzym im Harnstoffzyklus, wurden in Maricaulis Maris und mehrere andere Bakterien identifiziert. Arginin ist ein allosterischer Inhibitor der G&auml;ule aber nicht NAGK Aktivit&auml;t. Die Kristallstruktur von M. Maris NAGS/K (MmNAGS/K) mit 2,7 &Aring; Aufl&ouml;sung anzeigt, dass er A Tetramer, im Gegensatz zu der Hexameric-Struktur der Neisseria Gonorrhoeae NAGS. Die Quatern&auml;re Struktur von kristallinen NAGS/K von Xanthomonas Campestris (XcNAGS/K) entspricht und Strahlenvernetzung Experimente zeigen, dass sowohl XcNAGS als auch MmNAGS/K tetrameren in L&ouml;sung sind. Jede Untereinheit hat eine Aminos&auml;ure-Kinase (AAK) Dom&auml;ne, die wahrscheinlich verantwortlich f&uuml;r N-Acetylglutamat Kinaseaktivit&auml;t (NAGK) und verf&uuml;gt &uuml;ber eine vermeintliche Arginin-Bindungsstelle und einer N-Acetyltransferase (NAT)-Dom&auml;ne, die die vermeintliche NAGS-aktiv-Website enth&auml;lt. Diese Strukturen und die Sequenz Vergleiche legen nahe, dass der Linker R&uuml;ckstand 291 bestimmen kann, ob Arginin als allosterischer Inhibitor oder Aktivator im Homologen Enzyme in Mikroorganismen und Wirbeltieren wirkt. Dar&uuml;ber hinaus unterschiedlich der Winkel der Drehung zwischen AAK und NAT Dom&auml;nen Kristallformen und Untereinheiten innerhalb der tetramere. Eine Drehung um 26 &deg; ist ausreichend, um die prognostizierte AcCoA-Bindungsstelle, wodurch enzymatische Aktivit&auml;t schlie&szlig;en. Seit MmNAGS/K den h&ouml;chsten Grad der Sequenz-Homologie zu vertebrate NAGS G&auml;ule und NAGK hat Enzyme, deren Strukturen bestimmt, die MmNAGS/K-Struktur wurde verwendet, um ein strukturelles Modell des menschlichen NAGS zu entwickeln, die vollst&auml;ndig im Einklang mit der funktionellen Auswirkungen von 14 Missense-Mutationen ist das NAGS-defizienten Patienten identifiziert wurden.

Eine neuartige N-Acetylglutamat-Synthase-Architektur, die von der Kristallstruktur des Enzyms aus Maricaulis Maris aufgedeckt werden.

Romanzo bifunzionale N-acetilglutamato sintetasi/chinasi (NAGS/K) che catalizzano i primi due passaggi della biosintesi di arginina e sono omologhi ai vertebrati N-acetilglutamato sintetasi (NAG), un enzima producendo cofattore essenziale nel ciclo dell&#39;urea, sono state identificate in Maricaulis maris e molti altri batteri. L&#39;arginina &egrave; un inibitore allosterico della NAGS ma non NAGK attivit&agrave;. La struttura di cristallo del M. maris NAGS/K (mmNAGS/K) a 2,7 risoluzione &Aring; indica che &egrave; un tetramero, in contrasto con la struttura esamerica di Neisseria gonorrhoeae nag. La struttura quaternaria del cristallino NAGS/K da Xanthomonas campestris (xcNAGS/K) &egrave; simile, e cross-linking esperimenti indicano che sia mmNAGS/K e xcNAGS sono tetrameri in soluzione. Ogni subunit&agrave; ha un dominio chinasi (AAK) dell&#39;amminoacido, che &egrave; probabilmente responsabile per l&#39;attivit&agrave; della chinasi (NAGK) N-Acetilglutamatosintasi e dispone di un sito di legame arginina putativa e un dominio N-acetiltransferasi (NAT) che contiene il sito attivo NAGS putativo. Queste strutture e sequenza confronti suggeriscono che il residuo del linker 291 pu&ograve; determinare se l&#39;arginina agisce come un inibitore allosterico o attivatore degli enzimi omologhe in vertebrati e microrganismi. Inoltre, l&#39;angolo di rotazione tra i domini AAK e NAT varia tra le forme di cristallo e subunit&agrave; entro il tetramero. Una rotazione del 26 &deg; &egrave; sufficiente chiudere il sito di legame di AcCoA previsto, riducendo cos&igrave; l&#39;attivit&agrave; enzimatica. Dal mmNAGS/K ha il pi&ugrave; alto grado di omologia di sequenza di vertebrati nag nag e NAGK enzimi cui strutture sono state determinate, la struttura mmNAGS/K &egrave; stata usata per sviluppare un modello strutturale di nag umana che &egrave; pienamente coerenza con gli effetti funzionali delle mutazioni missenso 14 che sono state identificate in pazienti NAGS.

Un romanzo N-acetilglutamato sintetasi architettura rivela la struttura cristallina dell&#39;enzima bifunzionale da Maricaulis maris.

&#x65B0;&#x898F;&#x4E8C;&#x5B98;&#x80FD;&#x6027; N &#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;/&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3057;&#x3001;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269; N &#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20; (NAG)&#x3001;&#x5C3F;&#x7D20;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3067;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x88DC;&#x56E0;&#x5B50;&#x7523;&#x751F;&#x9175;&#x7D20;&#x306B;&#x76F8;&#x540C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (NAG/K) Maricaulis &#x30DE;&#x30EA;&#x30B9;&#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x3067;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;NAG &#x304C;&#x306A;&#x3044; NAGK &#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3067;&#x3059;&#x3002;M. &#x30DE;&#x30EA;&#x30B9; NAG/K (mmNAGS/K) 2.7 &Aring; &#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306F; a &#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30DE;&#x30FC; &#x30CA;&#x30A4;&#x30BB;&#x30EA;&#x30A2;&#x6DCB;&#x83CC; NAG &#x306E; 6 &#x91CF;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x6676;&#x306E; NAG/K &#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8; (xcNAGS/K) &#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x7B2C;&#x56DB;&#x7D00;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;mmNAGS/K &#x3068; xcNAGS &#x3044;&#x308B;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30DE;&#x30FC; &#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x67B6;&#x6A4B;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5404;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (AAK) &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C; N &#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB; &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (NAGK) &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3068;&#x63A8;&#x5B9A; NAG &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3080; N &#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; (NAT) &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x69CB;&#x9020;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x6B8B;&#x6E23; 291 &#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3; &#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x3068;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x76F8;&#x540C;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5264;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x5224;&#x65AD;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;AAK &#x304A;&#x3088;&#x3073; NAT &#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x9593;&#x306E;&#x56DE;&#x8EE2;&#x306E;&#x89D2;&#x5EA6;&#x306F;&#x7D50;&#x6676;&#x5F62;&#x3068;&#x3001;4 &#x91CF;&#x4F53;&#x5185;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;26 &deg; &#x306E;&#x56DE;&#x8EE2;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x524A;&#x6E1B;&#x4E88;&#x6E2C; AcCoA &#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x9589;&#x3058;&#x308B;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3059;&#x3002;MmNAGS/K &#x6700;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E; NAG &#x306E; NAG &#x3068; NAGK &#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3001;mmNAGS/K &#x69CB;&#x9020; NAG &#x6B20;&#x640D;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x3067;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F; 14 &#x30DF;&#x30B9;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x52B9;&#x679C;&#x3068;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; NAG &#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9175;&#x7D20;&#x3002;

&#x65B0;&#x898F; N-&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3; Maricaulis &#x304B;&#x3089;&#x4E8C;&#x5B98;&#x80FD;&#x6027;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30DE;&#x30EA;&#x30B9;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#xC18C;&#xC124; bifunctional N-acetylglutamate synthase/kinases (&#xB099; &#xC2A4;/K)&#xB294; &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xCC98;&#xC74C; &#xB450; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xC9C4;&#xC791; &#xD558; &#xACE0; &#xB3D9;&#xC885; &#xCC99;&#xCD94; N-acetylglutamate synthase (&#xB099; &#xC2A4;), &#xC694;&#xC18C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xACF5;&#xB3D9; &#xC778;&#xC790; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD6A8;&#xC18C; Maricaulis &#xB9C8;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xC640; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; &#xC794;&#xC18C;&#xB9AC;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; NAGK &#xD65C;&#xB3D9; allosteric &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xC774;&#xB2E4;. M. &#xB9C8;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xC794;&#xC18C;&#xB9AC;/K (mmNAGS/K) 2.7 &Aring; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870; &#xB2EC;&#xB9AC; Neisseria gonorrhoeae &#xB099; &#xC2A4;&#xC758; hexameric &#xAD6C;&#xC870; a tetramer &#xC788;&#xC74C;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xC815; &#xC794;&#xC18C;&#xB9AC;/K Xanthomonas campestris (xcNAGS/K)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C; &#xC0AC;&#xAE30; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xC720;&#xC0AC;, &#xAC00;&#xAD50; &#xC2E4;&#xD5D8; mmNAGS/K&#xC640; xcNAGS &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; tetramers&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC01; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB294; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xD0A4; (AAK) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; N-acetylglutamate &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (NAGK) &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784; &#xC0C1; &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBC0F; &#xC0C1; &#xB099; &#xC2A4; &#xC561;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; N-acetyltransferase (NAT) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBE44;&#xAD50; &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 291 &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; &#xC5ED;&#xD560; allosteric &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xB610;&#xB294; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xBC0F; &#xCC99;&#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB3D9;&#xC885; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xC744; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xD655;&#xC778;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, AAK &#xBC0F; NAT &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xD68C;&#xC804; &#xAC01;&#xB3C4; &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xC591;&#xC2DD;&#xACFC; tetramer &#xB0B4;&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. 26 &deg;&#xC758; &#xD68C;&#xC804;&#xC740; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xAC10;&#xC18C; &#xC608;&#xCE21;&#xB41C; AcCoA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xB2EB;&#xC744; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. MmNAGS/K&#xB294; &#xCD5C;&#xACE0; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xCC99;&#xCD94; &#xC794;&#xC18C;&#xB9AC; &#xC794;&#xC18C;&#xB9AC;&#xC640; NAGK&#xC758; &#xC21C;&#xC11C; &#xC0C1; &#xB3D9; &#xD6A8;&#xC18C; mmNAGS/K &#xAD6C;&#xC870; &#xC794;&#xC18C;&#xB9AC; &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; 14 missense &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC640; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB099; &#xC2A4;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB204;&#xAD6C;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xACB0;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC18C;&#xC124; N-acetylglutamate synthase &#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98; &#xB9C8;&#xB9AC;&#xC2A4; Maricaulis&#xC5D0;&#xC11C; bifunctional &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1D;&#xD600;.

Novela bifuncionales N-acetilglutamato sintetasa/quinasas (NAG/K) que catalizan los dos primeros pasos de la bios&iacute;ntesis de arginina y son hom&oacute;logas a vertebrados N-acetilglutamato sintetasa (NAG), una enzima productora de cofactor esencial en el ciclo de la urea, se identificaron en Maricaulis maris y varias otras bacterias. La arginina es un inhibidor alost&eacute;rico de NAG pero no actividad NAGK. La estructura cristalina de maris M. NAG/K (mmNAGS/K) en la resoluci&oacute;n de 2.7 &Aring; indica que es un tetr&aacute;mero, en contraste con la estructura hexam&eacute;rica de Neisseria gonorrhoeae NAG. La estructura cuaternaria de NAG cristalino/K de Xanthomonas campestris (xcNAGS/K) es similar, y cross-linking experimentos indican que tanto xcNAGS como mmNAGS/K son tetr&aacute;meros en soluci&oacute;n. Cada subunidad tiene un dominio quinasa (AAK) de amino&aacute;cidos, que es probable responsable de N-acetilglutamato quinasa (NAGK) y tiene un sitio de uni&oacute;n de arginina putativo y un dominio de N-acetiltransferasa (NAT) que contiene el supuesto sitio activo NAG. Estas estructuras y las comparaciones de la secuencia sugieren que el residuo de vinculador 291 puede determinar si la arginina act&uacute;a como un inhibidor alost&eacute;rico o activador en enzimas hom&oacute;logas en microorganismos y vertebrados. Adem&aacute;s, el &aacute;ngulo de rotaci&oacute;n entre los dominios de la AAK y NAT var&iacute;a entre formas de cristal y las subunidades dentro el tetr&aacute;mero. Una rotaci&oacute;n de 26 &ordm; es suficiente para cerrar el sitio de uni&oacute;n de AcCoA predicho, reduciendo as&iacute; la actividad enzim&aacute;tica. Desde mmNAGS/K tiene el m&aacute;s alto grado de homolog&iacute;a de secuencia a vertebrados NAG NAG y NAGK enzimas cuyas estructuras han sido determinados, la estructura de mmNAGS/K fue utilizada para desarrollar un modelo estructural de NAG humana que es plenamente compatible con los efectos funcionales de las 14 mutaciones sin sentido que fueron identificadas en pacientes NAG-deficientes.

Una novela de N-acetilglutamato sintetasa arquitectura revela la estructura de cristal de la enzima bifuncional de Maricaulis maris.

&#x8150;&#x80FA; carbamoyltransferase (PTCase) &#x50AC;&#x5316; carbamoylputrescine &#x8F6C;&#x6362;&#x4E3A;&#x8150;&#x80FA;&#x548C;&#x6C28;&#x7532;&#x9170;&#x78F7;&#x9178; (CP) &#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x7532;&#x9178;&#x916F;&#x6FC0;&#x9176; (CK) &#x886C;&#x5E95;&#x3002;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x5E76;&#x7CBE;&#x5236; 3.2 &#x2460; &#x5206;&#x8FA8;&#x7387; PTCase &#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;PTCase &#x4E09;&#x8054;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x662F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x5176;&#x4ED6; carbamoyltransferases&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5929;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178; carbamoyltransferase &#xFF08;ATCase&#xFF09; &#x548C;&#x9E1F;&#x6C28;&#x9178; carbamoyltransferase &#xFF08;OTCase&#xFF09; &#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x4E9A;&#x5355;&#x4F4D;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x4E09;&#x8054;&#x7684; carbamoyltransferases&#xFF0C;PTCase &#x7ED1;&#x5B9A; CP &#x548C;&#x8150;&#x80FA; Hill &#x7CFB;&#x6570; 1.53 &plusmn; 0.03 &#x548C; 1.80 &plusmn; 0.06&#xFF0C;&#x5176;&#x4ED6;&#x57FA;&#x4F53;&#x7684;&#x9971;&#x548C;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5206;&#x522B;&#x3002;PTCase &#x8FD8;&#x5177;&#x6709;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x7279;&#x5F81;&#xFF1A; &#x957F;&#x7684; C-&#x672B;&#x7AEF;&#x4E0E;&#x76F8;&#x90BB;&#x7684;&#x4E9A;&#x57FA;&#xFF0C;&#x52A0;&#x5F3A; intersubunit &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x5206;&#x5B50;&#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x87BA;&#x65CB;&#x3002;C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x87BA;&#x65CB;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x529F;&#x80FD;&#x4E09;&#x805A;&#x4F53;&#x548C;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x87BA;&#x65CB;&#x805A;&#x5408;&#x4E0D;&#x622A;&#x65AD; PTCase&#xFF0C;&#x53EA;&#x6709; 3%&#x7684;&#x672C;&#x673A;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9; PTCase &#x548C; OTCase &#x662F;&#x4E00;&#x6837;&#x7684;&#x9664;&#x975E; 240&#39;s&#x5E74;&#x5FAA;&#x73AF;&#x3002;PTCase &#x7F3A;&#x4E4F;&#x5728;&#x6253;&#x7ED3; carbamoyltransferases &#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x7684;&#x5BCC;&#x542B;&#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x662F; unknotted&#x3002;&#x9AD8;&#x7089;&#x641C;&#x7D22;&#x6240;&#x6709;&#x53EF;&#x7528;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6307;&#x793A; 35 &#x7EC6;&#x83CC;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x4E3A;&#x9769;&#x5170;&#x6C0F;&#x9633;&#x6027;&#xFF0C;&#x6709; agcB &#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801; PTCase &#x4F4D;&#x4E8E;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x7F16;&#x7801;&#x4E01;&#x80FA; deiminase &#x548C; CK&#x3001; &#x7B26;&#x5408; PTCase &#x4E2D;&#x4E01;&#x80FA;&#x964D;&#x89E3;&#x9014;&#x5F84;&#x7684;&#x5206;&#x89E3;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x5728;&#x6B64;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E2D; PTCase &#x7684;&#x87BA;&#x65CB; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x4F1A;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x6240;&#x6709;&#x5176;&#x4ED6; PTCases &#x6697;&#x793A;&#x5B83; PTCase &#x7684;&#x9176;&#x86CB;&#x767D; 2012 &#xFF1B; &#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x7B7E;&#x540D;&#x529F;&#x80FD;&copy; 2012&#x5E74;&#x5A01;&#x5229;&#x671F;&#x520A;&#xFF0C;Inc.

&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x8150;&#x80FA; carbamoyltransferase &#x4ECE;&#x7CAA;&#x80A0;&#x7403;&#x83CC;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x5C5E;&#x6027;&#xFF1A; &#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x3001; &#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#x548C;&#x53D8;&#x6784;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;

Putrescine carbamoyltransferase (PTCase) catalyzes the conversion of carbamoylputrescine to putrescine and carbamoyl phosphate (CP), a substrate of carbamate kinase (CK). The crystal structure of PTCase has been determined and refined at 3.2 Ã… resolution. The trimeric molecular structure of PTCase is similar to other carbamoyltransferases, including the catalytic subunit of aspartate carbamoyltransferase (ATCase) and ornithine carbamoyltransferase (OTCase). However, in contrast to other trimeric carbamoyltransferases, PTCase binds both CP and putrescine with Hill coefficients at saturating concentrations of the other substrate of 1.53 Â± 0.03 and 1.80 Â± 0.06, respectively. PTCase also has a unique structural feature: a long C-terminal helix that interacts with the adjacent subunit to enhance intersubunit interactions in the molecular trimer. The C-terminal helix appears to be essential for both formation of the functional trimer and catalytic activity, since truncated PTCase without the C-terminal helix aggregates and has only 3% of native catalytic activity. The active sites of PTCase and OTCase are similar, with the exception of the 240's loop. PTCase lacks the proline-rich sequence found in knotted carbamoyltransferases and is unknotted. A Blast search of all available genomes indicates that 35 bacteria, most of which are Gram-positive, have an agcB gene encoding PTCase located near the genes that encode agmatine deiminase and CK, consistent with the catabolic role of PTCase in the agmatine degradation pathway. Sequence comparisons indicate that the C-terminal helix identified in this PTCase structure will be found in all other PTCases identified, suggesting that it is the signature feature of the PTCase family of enzymes Proteins 2012; Â© 2012 Wiley Periodicals, Inc.

Crystal structure and biochemical properties of putrescine carbamoyltransferase from Enterococcus faecalis: Assembly, active site, and allosteric regulation.

Putrescine carbamyl transf&eacute;rase (PTCase) catalyse la conversion de carbamoylputrescine en putrescine et carbamoyl phosphate (CP), un substrat de la kinase de carbamate (CK). La structure cristalline du PTCase a &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;e et affin&eacute;e &agrave; 3,2 r&eacute;solution &Aring;. La structure mol&eacute;culaire trim&egrave;re du PTCase est semblable aux autres carbamoyltransferases, y compris la sous-unit&eacute; catalytique de l&#39;aspartate carbamyl transf&eacute;rase (ATCase) et ornithine carbamyl transf&eacute;rase (OTCase). Cependant, contrairement &agrave; d&#39;autres carbamoyltransferases trim&egrave;re, PTCase lie CP et putrescine avec coefficients de Hill &agrave; des concentrations saturantes de l&#39;autre substrat de 1,53 &plusmn; 0,03 et 1,80 &plusmn; 0,06, respectivement. PTCase a aussi une caract&eacute;ristique structurelle unique : un C-terminale longue h&eacute;lice qui interagit avec la sous-unit&eacute; adjacente afin d&#39;am&eacute;liorer les interactions entre dans le trim&egrave;re mol&eacute;culaire. L&#39;h&eacute;lice C-terminale semble &ecirc;tre essentielle pour les deux formation du trim&egrave;re fonctionnelle et l&#39;activit&eacute; catalytique, puisque tronqu&eacute;s PTCase sans les agr&eacute;gats d&#39;h&eacute;lice C-terminale et ne dispose que de 3 % de l&#39;activit&eacute; catalytique native. Les sites actifs de PTCase et OTCase sont semblables, &agrave; l&#39;exception de la boucle de 240&#39;s. PTCase manque de la s&eacute;quence riche en proline dans carbamoyltransferases nou&eacute;es et est trivial. Une recherche Blast de tous les g&eacute;nomes disponibles indique que 35 bact&eacute;ries, dont la plupart est Gram-positive, ont un g&egrave;ne agcB que ptcase encodage situ&eacute; pr&egrave;s les g&egrave;nes qui codent les d&eacute;iminase agmatine et CK, conforme au r&ocirc;le catabolique de PTCase dans la voie de d&eacute;gradation agmatine. Des comparaisons de s&eacute;quences indiquent que l&#39;h&eacute;lice C-terminale dans cette structure PTCase sera trouv&eacute;e dans tous les autres PTCases identifi&eacute;s, ce qui sugg&egrave;re que c&#39;est la caract&eacute;ristique de la famille PTCase d&#39;enzymes de prot&eacute;ines 2012 ; &copy; 2012 Wiley p&eacute;riodiques, Inc.

Structure cristalline et propri&eacute;t&eacute;s biochimiques de la putrescine carbamyl transf&eacute;rase de Enterococcus faecalis : Assembl&eacute;e, site actif et r&eacute;gulation allost&eacute;rique.

Putrescin Transcarbamylase (PTCase) katalysiert die Umwandlung von Carbamoylputrescine in Putrescin und Carbamoylphosphat Phosphat (CP), ein Substrat der Carbamat-Kinase (CK). Die Kristallstruktur von PTCase wurde bestimmt und bei 3,2 &Aring; Aufl&ouml;sung verfeinert. Die Trimere Molek&uuml;lstruktur des PTCase ist vergleichbar mit anderen Carbamoyltransferases, einschlie&szlig;lich die katalytische Untereinheit der Aspartat-Transcarbamylase (ATCase) und Ornithin-Transcarbamylase (OTCase). Jedoch bindet im Gegensatz zu anderen Trimere Carbamoyltransferases PTCase CP und Putrescin mit Hill-Koeffizienten bei saturating Konzentrationen des anderen Substrates von 1,53 &plusmn; 0,03 und 1.80 &plusmn; 0,06, beziehungsweise. PTCase hat auch eine strukturelle Besonderheit: eine lange C-terminalen Helix, die mit der angrenzenden Untereinheit zur Verbesserung der intersubunit Interaktionen in der molekularen Trimer interagiert. Die C-terminalen Helix scheint f&uuml;r beide Bildung von funktionalen Trimer und katalytische Aktivit&auml;t, da PTCase ohne die C-terminale Helix Aggregate abgeschnitten und nur 3 % der systemeigenen katalytische Aktivit&auml;t hat. Die aktiven Zentren der PTCase und OTCase sind &auml;hnlich, mit Ausnahme der 240&#39;s-Schleife. PTCase fehlt die Prolin-reichen Sequenz in verknoteten Carbamoyltransferases gefunden und ist unknotted. Eine Blast-Suche alle verf&uuml;gbaren Genome zeigt, dass 35 Bakterien, von denen meisten grampositiven sind, ein AgcB-gen, die die Gene, die Agmatin Deiminase und CK, konsistent mit der katabolischen Rolle der PTCase in die Agmatin Erniedrigung-Pathway Codieren der Codierung PTCase N&auml;he. Sequenz Vergleiche zeigen, dass die C-terminalen Helix in dieser PTCase-Struktur identifiziert in allen anderen PTCases identifiziert gefunden wird, was darauf hindeutet, dass es die Unterschrift Funktion der PTCase-Familie der Enzyme Proteine 2012; &copy; 2012 Wiley Periodika, Inc.

Kristallstruktur und biochemischen Eigenschaften von Putrescin Transcarbamylase von Enterococcus Faecalis: Assembly, aktive und allosterische Verordnung.

Putrescina carbammiltransferasi (PTCase) catalizza la conversione di carbammilputrescina a putrescina e carbamoil fosfato (CP), un substrato di chinasi (CK) di carbammato. La struttura di cristallo del PTCase &egrave; stata determinata e raffinata con risoluzione 3,2 &Aring;. La struttura molecolare trimeric della PTCase &egrave; simile ad altri carbamoyltransferases, tra cui la subunit&agrave; catalitica di aspartato carbammiltransferasi (ATCase) e ornitina carbamiltransferasi (OTCase). Tuttavia, a differenza di altri carbamoyltransferases trimeric, PTCase associa putrescina con coefficienti di Hill e CP a concentrazioni saturante di altro substrato di 1.53 &plusmn; 0,03 e 1,80 &plusmn; 0,06, rispettivamente. PTCase ha anche una funzione strutturale unica: un C-terminale lungo elica che interagisce con la subunit&agrave; adiacente per migliorare le interazioni intersubunit nel trimero molecolare. L&#39;elica C-terminale sembra essere essenziale per entrambi formazione del trimero funzionale e attivit&agrave; catalitica, poich&eacute; troncato PTCase senza gli aggregati di elica C-terminale e ha solo il 3% di nativi attivit&agrave; catalitica. I siti attivi di PTCase e OTCase sono simili, ad eccezione del ciclo 240&#39;s. PTCase &egrave; matematica e manca la sequenza di ricco di prolina trovata in carbamoyltransferases annodata. Una ricerca Blast di tutti i genomi disponibile indica che 35 batteri, la maggior parte dei quali sono Gram-positivo, hanno un gene agcB che codifica PTCase situato vicino i geni che codificano agmatina peptidilico e CK, coerente con il ruolo catabolico di PTCase nella via di degradazione dell&#39;agmatina. Confronti di sequenza indicano che l&#39;elica C-terminale identificata in questa struttura PTCase si trover&agrave; in tutti gli altri PTCases identificato, suggerendo che &egrave; la caratteristica firma della famiglia PTCase di enzimi proteine 2012; &copy; 2012 Wiley periodici, Inc.

Struttura cristallina e propriet&agrave; biochimiche di putrescina carbammiltransferasi da Enterococcus faecalis: Assembly, sito attivo e regolazione allosterica.

&#x30D7;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B7;&#x30F3; &#x30AB;&#x30EB;&#x30D0;&#x30DF;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; (PTCase) carbamoylputrescine &#x306E;&#x30D7;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30D0;&#x30E2;&#x30A4;&#x30EB;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178; &#xFF08;CP&#xFF09; &#x30AB;&#x30EB;&#x30D0;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#xFF08;CK&#xFF09; &#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x3078;&#x306E;&#x5909;&#x63DB;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PTCase &#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A; 3.2 &Aring; &#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3067;&#x6D17;&#x7DF4;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;PTCase &#x306E; 3&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x30AB;&#x30EB;&#x30D0;&#x30DF;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; &#xFF08;ATCase&#xFF09; &#x3068;&#x30AA;&#x30EB;&#x30CB;&#x30C1;&#x30F3; &#x30AB;&#x30EB;&#x30D0;&#x30DF;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; (OTCase) &#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E; carbamoyltransferases &#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x4ED6;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E; carbamoyltransferases &#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684; PTCase CP &#x3068;&#x30D7;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B7;&#x30F3;&#x4E18;&#x4FC2;&#x6570;&#x3092;&#x6301;&#x3064; 1.53 &plusmn; 0.03 &#x3068; 1.80 &plusmn; 0.06&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x98FD;&#x548C;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PTCase &#x306F;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x7279;&#x5FB4;&#x3092;&#x307E;&#x305F;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;: &#x9577;&#x3044; C &#x672B;&#x7AEF;&#x5206;&#x5B50;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; intersubunit &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x96A3;&#x63A5;&#x3059;&#x308B;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3089;&#x305B;&#x3093;&#x3002;PTCase C &#x672B;&#x7AEF;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x96C6;&#x8A08;&#x306A;&#x3057;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x308F;&#x305A;&#x304B; 3 &#xFF05; &#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x4E21;&#x65B9;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x3068;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068; C &#x672B;&#x7AEF;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E; PTCase &#x3068; OTCase 240&#39;s &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x9664;&#x3044;&#x3066;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PTCase &#x7D50;&#x3073;&#x76EE;&#x306E; carbamoyltransferases &#x3067;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x7D50;&#x3073;&#x76EE;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Blast &#x691C;&#x7D22;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E; 35 &#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306F;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306F;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x967D;&#x6027;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E; PTCase &#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x30A2;&#x30B0;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x50CD;&#x304F;&#x3068; CK&#x3001;&#x30A2;&#x30B0;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x5206;&#x89E3;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; PTCase &#x306E;&#x7570;&#x5316;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; agcB &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E; PTCase &#x69CB;&#x9020;&#x4F53;&#x3067;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B; C &#x672B;&#x7AEF;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x9175;&#x7D20;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; 2012&#x5E74;&#x306E; PTCase &#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x7F72;&#x540D;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3001;&#x8B58;&#x5225;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; PTCases &#x3067;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x305F;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;;&copy; 2012&#x5E74;&#x30EF;&#x30A4;&#x30EA;&#x30FC;&#x5B9A;&#x671F;&#x520A;&#x884C;&#x7269; &#xFF08;&#x682A;&#xFF09;

&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x30D7;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B7;&#x30F3; &#x30AB;&#x30EB;&#x30D0;&#x30DF;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x7403;&#x83CC;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x6027;&#x8CEA;: &#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A2;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x52B9;&#x679C;&#x3002;

&#xD4E8; carbamoyltransferase (PTCase) carbamoylputrescine &#xD4E8; &#xBC0F; carbamoyl &#xC778;&#xC0B0; (CP) carbamate &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (CK)&#xC758; &#xAE30;&#xD310; &#xBCC0;&#xD658; catalyzes. Ptcase&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870; &#xACB0;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; 3.2 &Aring; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xC81C; &#xB41C;. Ptcase&#xC758; trimeric &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC870; aspartate carbamoyltransferase (ATCase) &#xBC0F; ornithine carbamoyltransferase (OTCase)&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xB978; carbamoyltransferases&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB2EC;&#xB9AC; &#xB2E4;&#xB978; trimeric carbamoyltransferases PTCase &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; CP&#xC640; &#xD790; &#xACC4;&#xC218;&#xC640; &#xD4E8; 1.53 &plusmn; 0.03&#xC640; 1.80 &plusmn; 0.06, &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; saturating &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC01;&#xAC01;. PTCase &#xB610;&#xD55C; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4;&#xB2E4;: &#xAE34; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xBD84;&#xC790; &#xC0BC;&#xD569;&#xCCB4;&#xC5D0; intersubunit &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB098;&#xC120;. C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB098;&#xC120; &#xC774;&#xD6C4; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB098;&#xC120; &#xC9D1;&#xACC4; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; Ptcase&#xB97C; &#xC798;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; 3%&#xB9CC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xBA38;&#xC640; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xB450; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4;. PTCase &#xBC0F; Otcase&#xC758; &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB294; 240&#39;s &#xB8E8;&#xD504;&#xB97C; &#xC81C;&#xC678; &#xD558; &#xACE0; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. PTCase &#xB9E4;&#xB4ED;&#xC774; carbamoyltransferases &#xC788;&#xB294; &#xD504;&#xB864;&#xB9B0; &#xBD80;&#xC720;&#xD55C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBD80;&#xC871; &#xD558; &#xACE0; &#xB9E4;&#xB4ED; &#xC774;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; &#xD3ED;&#xBC1C; &#xAC80;&#xC0C9; 35 &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC740; &#xADF8;&#xB78C; &#xC591;&#xC131;, &#xC778;&#xCF54;&#xB529; PTCase &#xC778;&#xCF54;&#xB529; agmatine deiminase &#xBC0F; CK, agmatine &#xC800;&#xD558; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0; Ptcase&#xC758; catabolic &#xC5ED;&#xD560;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xADFC;&#xCC98;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58;&#xD55C; agcB &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBE44;&#xAD50; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB294;&#xC774; PTCase &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB41C; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB098;&#xC120; &#xAC83;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xD655;&#xC778;, &#xB2E4;&#xB978; &#xBAA8;&#xB4E0; PTCases &#xD6A8;&#xC18C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 2012; PTCase &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC758; &#xC11C;&#xBA85; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &copy; 2012&#xC640; &#xC77C;&#xB9AC; &#xC815;&#xAE30; &#xAC04;&#xD589;&#xBB3C; &#xC8FC;&#xC2DD; &#xD68C;&#xC0AC;

&#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; Enterococcus faecalis&#xC5D0;&#xC11C; &#xD4E8; carbamoyltransferase&#xC758; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xC18D;&#xC131;: &#xC561;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC870;&#xB9BD;&#xACFC; allosteric &#xADDC;&#xCE59;.

Putrescina Carbamoiltransferasa (PTCase) cataliza la conversi&oacute;n de carbamoylputrescine a putrescina y carbamoil fosfato (CP), un sustrato de quinasa (CK) de carbamato. La estructura cristalina de PTCase ha sido determinada y refinado en 3.2 resoluci&oacute;n &Aring;. La estructura molecular tr&iacute;mero de PTCase es similar a otros carbamoyltransferases, incluyendo la subunidad catal&iacute;tica de la aspartato Carbamoiltransferasa (ATCase) y Ornitina Carbamoiltransferasa (OTCase). Sin embargo, a diferencia de otros carbamoyltransferases tr&iacute;mero, PTCase ATA CP tanto putrescina con coeficientes de colina en concentraciones de saturaci&oacute;n del otro sustrato de 1.53 &plusmn; 0.03 y 1.80 &plusmn; 0.06, respectivamente. PTCase tambi&eacute;n tiene una caracter&iacute;stica estructural &uacute;nica: un largo c-terminal h&eacute;lice que interacciona con la subunidad adyacente para mejorar las interacciones intersubunit en el tr&iacute;mero molecular. La h&eacute;lice de C-terminal parece ser esencial para ambos formaci&oacute;n del tr&iacute;mero funcional y actividad catal&iacute;tica, ya que truncado PTCase sin los agregados de la h&eacute;lice de C-terminal y tiene s&oacute;lo el 3% de la actividad catal&iacute;tica nativa. Los sitios activos de PTCase y OTCase son similares, excepto el lazo de 240&#39;s. PTCase carece de la secuencia de ricos en prolina en nudo carbamoyltransferases y es unknotted. Una b&uacute;squeda de explosi&oacute;n de todos los genomas disponibles indica que 35 bacterias, la mayor&iacute;a de los cuales es gram positiva, tienen un gen agcB que ptcase codificaci&oacute;n situado cerca de los genes que codifican agmatina deiminase y CK, consistente con el papel catab&oacute;lico de PTCase en la v&iacute;a de degradaci&oacute;n de agmatina. Las comparaciones de la secuencia indican que la h&eacute;lice de C-terminal identificada en esta estructura PTCase se encontrar&aacute; en todos los otros PTCases identificados, sugiriendo que es la caracter&iacute;stica de la firma de la familia PTCase de enzimas prote&iacute;nas 2012; &copy; 2012 Wiley peri&oacute;dicos, Inc.

Estructura cristalina y propiedades bioqu&iacute;micas de putrescina Carbamoiltransferasa de Enterococcus faecalis: Asamblea, sitio activo y Regulaci&oacute;n alost&eacute;rica.

Gengxiang Zhao

School of Biology

Georgia Institute of Technology

Assessing Two-dimensional Crystallization Trials of Small Membrane Proteins for Structural Biology Studies by Electron Crystallography