Orthotopic אבי העורקים להשתלות: מודל עכברוש לחקר התפתחות vasculopathy כרונית

Summary

וידאו זה מדגים את מודל orthotopic השתלת מסתם אאורטלי כמודל פשוט ללמוד את הפיתוח של vasculopathy ההשתלה (TVP) בחולדות.

Abstract

מודלים המחקר של דחייה כרונית הם חיוניים כדי לחקור תהליכים pathobiological ו pathophysiological במהלך הפיתוח של vasculopathy ההשתלה (TVP).

המודל החי נפוץ לב וכלי דם מחקרים דחייה כרונית הוא הלב heterotopic השתלת המודל שבוצעו מכרסמים במעבדה. מודל זה נמצא בשימוש נרחב מאז הניסויים אונו לינדסי (3) פרסם את הטכניקה שלהם. כדי לנתח את הממצאים כלי הדם, הלב צריך להיות מחולק וכלי הכל צריך להימדד.

שיטה נוספת לחקור דחייה כרונית של הלב וכלי הדם התהיות המודל השתלת מסתם אאורטלי (1, 2). בשנת המודל אבי העורקים orthotopic ההשתלה, האאורטה יכול בקלות להיות מוערכת בהיסטולוגיה (2). המודל PVG-to-ACI שימושית במיוחד עבור CAV מחקרים, שכן דחייה חריפה של כלי הדם אינו גורם בלבול גדול וטיפול ציקלוספורין A (CSA) אינה מונעת את הפיתוח של CAV, בדומה למה שאנו מוצאים הגדרה קלינית (4 ). A7 יום בתקופה של CSA נדרש במודל זה כדי למנוע דחייה חריפה להשיג ההישרדות לטווח ארוך עם התפתחות TVP.

מודל זה יכול לשמש גם כדי לחקור דחייה תאית אקוטית נמק התקשורת מודלים xenogeneic (5).

Protocol

חולדות שוקל כ 250-300 גרם נרכשים מ צ'ארלס ריבר (Sandhofer מאייתים 7, D-97633 Sulzfeld).
השתלות מתבצעות באמצעות חולדות PVG כמו תורמים, וחולדות ACI כמקבל.

חולדות הם שוכנו בתנאים רגילים, נמאס תקן עכברוש ושולחת libidum מים המודעה.

כל המכשירים כירורגית הם מעוקרים לפני השימוש.

התורם הכנה:

הרדימי עכברוש עם isoflurane (2,5-3%) באמצעות תא אינדוקציה.

1. לגלח את שיער הבטן ובית החזה מקום חולדה על הגב שלה במקום facemask על האף והפה שלה כדי לשמור על הרדמה.
2. לחטא את אזור הבטן החזה נרחב באמצעות Provo-יוד, השתמש הבא אתנול 80%, לחזור על פעולה זו שלוש פעמים.
3. בדוק רפלקסים צובט את הרגליים האחוריות כדי להיות בטוח כי הוא עכברוש anesthesized מספיק.
4. ולגרום לדימום מחודש את העכברוש על ידי פתיחת הבטן חיתוך חור לתוך אבי העורקים בבטן.
5. בזהירות לפתוח את בית החזה כדי למצוא את אבי העורקים החזי יורד.
6. מנתחים את אבי העורקים החזי מן הרקמות הסובבות כמו, עצבים שומן הוושט.
7. משיכה חתיכת 1.5cm של אבי העורקים באמצעות couter, ללא נזק לרקמות של האאורטה.
8. Perfuse השתל אבי העורקים ביסודיות עם תמיסת מלח סטרילית קר לאחסן את השתל ב 4 ° C.

הנמען:

הרדימי עכברוש עם isoflurane (2,5-3%) באמצעות תא אינדוקציה. טמפרטורת הגוף נשמרת במהלך ההליך הכירורגי.

1. גילוח באזור הבטן להחיל משחה העין כדי למנוע את העיניים מהתייבשות במהלך ההרדמה.
2. מניחים את חולדה על הגב שלה במקום facemask על האף והפה שלה כדי לשמור על הרדמה.
3. לחטא את אזור הבטן באמצעות Provo-יוד, השתמש הבא אתנול 80%, לחזור על פעולה זו שלוש פעמים.
4. בדוק רפלקסים צובט את הרגליים האחוריות כדי להיות בטוח כי הוא עכברוש anesthesized מספיק.
5. ביצוע חתך בבטן קו האמצע המפריד בין העור והשרירים בשני שלבים כדי לפתוח את הבטן.
6. מניחים את המעיים כפפה אבקת מלח חימם לחות ללא תשלום. מקפלים את הכפפה סביב המעיים כדי למנוע אובדן לחות.
7. הסר את רקמת שומן המכסה את אבי העורקים בבטן.
8. לנתח האאורטה בצורת באזור infrarenal אל הסתעפות, נזהר שלא לגרום נזק על ענפי הכלים.
9. אם הענפים ולקשור הכרחי של האאורטה.
10. ראשית להשתמש מהדק microsurgical מצד infrarenal של האאורטה גזור כדי לעצור את זרימת הדם.
11. בשלב הבא, במקום לצבוט שני אחרי הסתעפות של האאורטה.
12. עכשיו את זרימת הדם נעצרת, להסיר קטע קצר של האאורטה.
13. קח את אבי העורקים תורם השתל, כי כבר שמרו מלוחים סטרילית 0,9% על הקרח, לקצר אותו לאורך הולם ומקם אותה בפער.
14. חבר את אבי העורקים אל אבי העורקים התורם למקבל, ביצוע תפרים פועל באמצעות 8-0 prolene תפר (Ethicon, Norderstedt, גרמניה). התחל עם השקה הקצה לקצה הגולגולת.
15. כאשר השקה דיסטלי end-to-end הוא סיים, בזהירות לפתוח את מהדק דיסטלי.
16. כאשר יש דימום לא לאחר פתיחת מלחציים דיסטלי, בזהירות לפתוח את מהדק גולגולתי. במקרה של דימום התפרים, לסגור את מהדק שוב, לאתר את הדימום לעצור את הדימום באמצעות אחד תפר אחד.
17. צריך להיות גלוי הדופק בסוף הדיסטלי של האאורטה.
18. הבא להעביר את המעיים בחזרה לתוך הבטן.
19. רוקן את הבטן עם מי מלח סטרילית prewarmed.
20. סגור את שכבת השרירים של דופן הבטן באמצעות תפרים ריצה 6-0 prolene (Ethicon, Norderstedt, גרמניה).
21. השתמש 5-0 prolene (Ethicon, Norderstedt, גרמניה) פועל תפרים כדי לסגור את העור.
22. בעוד העכברוש עדיין הרדמה, להזריק 4-5mg/kg Carprofen תת עורי.
23. כדי לספק שיכוך כאבים מספיק עבור סוג זה של ההליך, metamizol מתווסף מי השתייה (50 מ"ג לכל 100 מ"ל Metamizol) עבור משככי כאבים להשתלה 3 ימים הודעה.

Discussion

מכמה סיבות מצאנו את המודל orthotopic השתלת מסתם אאורטלי דרך מדויקת יותר לחקור את הפיתוח של TVP לעומת המודל heterotopic השתלת לב:
לגבי טכניקה כירורגית, המודל השתלת מסתם אאורטלי מגלם שיטה אפשרית בקלות, המחייב אך ורק את ההישג של end-to-end-השקה, ואילו המודל heterotopic השתלת לב עשוי להיחשב...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Surgical microscope (magnification 25x)
Isoflurane
shaver
Provo-Iodine
ice cold 0.9% saline
prewarmed 0.9% sterile saleine
eye ointment
glove
microsurgical scissirs
forceps
clamps
8-0 suture (prolene)
6-0 suture (prolene)
5-0 suture (prolene)
Carprofen
Metamizol
Q-tips