מדידה אוראלי חומצת שומן ספים, תפיסת שומן, שומן מזון טעם, וצפיפות אדומות בבני אדם

Summary

אוראלי chemoreception של חומצות שומן והשיתוף עם העדפות מזון תזונה ושומן עשוי לאפשר זיהוי של מנגנונים מעורבים בהתפתחות של השמנת יתר ולמה שינויים תזונתיים עלולים להיות קשים עבור אנשים רבים.

Abstract

מתעוררים ראיות ממספר המעבדות מציין כי לבני אדם יש את היכולת לזהות חומצות שומן בחלל הפה, ככל הנראה באמצעות קולטני חומצת השומן שוכנו בתאי טעם. המחקר קודם הראה כי הרגישות האוראלית של פרט לחומצת שומן, חומצה אולאית במיוחד (C18: 1) קשורה עם אינדקס מסת גוף (BMI), צריכת תזונתית שומן, ואת היכולת לזהות שומן במזון. אנחנו פיתחנו שיטה אמינה לשחזור להעריך chemoreception האוראלי של חומצות שומן, תוך שימוש בחלב וC18: תחליב 1, יחד עם הליך משולש עולים נאלץ בחירה. במקביל, מטריקס מזון פותח כדי להעריך את יכולתו של פרט לתפוס שומן, בנוסף לשיטה פשוטה כדי להעריך את טעם מזון שומני. כצילום לשון אמצעי נוסף משמש כדי להעריך את צפיפות אדומות, עם צפיפות גבוהה יותר לעתים קרובות להיות קשור ברגישות בטעם מוגברת.

Introduction

צריכת שומן מוגזמת היא תורם פוטנציאלי לעלייה במשקל ^1-3 והשמנת יתר הפכה למגיפה עולמית מודרנית. מחקרים מראים רמות גבוהות יותר של צריכת שומן, במיוחד כחלק מתזונה כרצונך, עשוי להיות קשור עם BMI גבוה יותר ^2,3, עם זאת הגורמים המשפיעים על צריכת שומן והעדפה הם רחוקים מלהיות ברור. מחפש את המנגנונים שעומדים בבסיס צריכת שומן ולכן מטרה ברורה ומעניין במיוחד הוא מנגנון בעל פה אחראי לזיהוי שמן, בדרך כלל מכונה "טעם חומצת שומן ^'2.

מנקודת מבט אבולוציונית, מערכת הטעם שימשה ככל הנראה כשומרי סף של מערכת העיכול, המנחה את הצריכה של חומרים מזינים צפופים אנרגיה וגירוש של תרכובות רעילים ^4. חוש הטעם הוא שהושרו באמצעות תאי קולטן טעם מיוחדים אשר מופצים בתוך שלושה סוגים של לשוןאדומות; fungiform, foliate, ואדומות circumvallate, שיכול להכיל כל אחד עד כמה מאות בלוטות טעם ^5. בנוסף לחמישה טעמים טיפוסיים המקובל (מתוק, מלוח, חמוץ, מר, וumami), זה לא לגמרי מפתיע שחל הצעתו של מנגנון פה לגילוי חומצות שומן תוצרי הפירוק שלהם שומן, או יותר סבירה ^6.

המחקרים קודמים הראו באופן עקבי ניתן לאתרם חומצות שומן בחלל הפה על פני טווח של ריכוזים ^7-11, למרות שזה לא "טעם" במובן המסורתי, כפי שאין לו איכות תפיסתי ניכרת אחת הקשורים אליו (כלומר. מתוק) ^12. עבודה מהמעבדה שלנו הדגישה את השלכות תפקודיות של chemoreception חומצת שומן לקוי, כלומר במשקל גוף וצריכה שומן בתזונה. מי שפחות מסוגל לזהות חומצות שומן (hyposensitive) נראה שיש אינדקס מסת גוף גבוה יותר (BMאני) וצורך יותר אנרגיה ^9, בעוד שמערכת יחסים בין רגישות חומצת שומן האוראלית וצריכת שומן בתזונה יש גם נצפו; כלומר, אנשים hyposensitive חומצת השומן הוכחו לצרוך יותר שומן מן החי, כוללים בשר, מוצרי חלב עתירים שומן, והשומן מתפשט שכולם היה מעורבים כתורמים לעלייה במשקל ^13. בנוסף, מופיעים אנשים שרגישים יותר לחומצות שומן להיות מצוידים טוב יותר בהבחנה בין דגימות עם תכולת שומן משתנה ^9. בעוד קבוצות מחקר אחרות לא הצליחו למצוא עמותות דומות ^10,14,15, אזור גידול זה של מחקר עדיין מסקרן.

הבדלים אלה בchemoreception חומצת השומן נראים להיות מווסת במידה מסוימת על ידי גורמים סביבתיים, כוללים דיאטה. צריכת שומן רגילה נקשרה עם chemoreception לקוי שומן אוראלי חומצה וכתוצאה מכך, העדפה מוגברת ולצריכה מוגברת שלשומן תזונתי ^16. בנוסף להסתגלות התעוררה אצלם, מערכת העיכול (GI) מופיעה גם מגיבה לשינויים כאלה בצריכת שומן ¹⁷ ורגישות של חומצות שומן במערכת העיכול לקויה עשויים להיות מעורבת בחוסר היכולת ליצור שובע מתאים איתות תגובות שאינן מעודדים צריכת אנרגיה עודפת ^18.

בנוסף לגורמים סביבתיים, chemoreception חומצת שומן עשוי גם להיות מוכתב על ידי הבדלים גנטיים או פיסיולוגיים בין אנשים, ובם הריכוז של צפיפות אדומות fungiform (ומן הסתם טעם קולטנים) על הלשון של פרט ^19. צפיפות גבוהה יותר של גבשושיות לשון fungiform נקשרה לרגישות אוראלית לתרכובות שזוהו דרך הפה רבים, כולל 6 - n-propylthiouracil (נכס) ^20, סוכר ^21, ומלח ^22, בעוד שאחרים ציינו גם קשר עם תפיסת שמנת ^23. supertasters נכס (שpresumaבליי יש מספר גבוה יותר של אדומות fungiform) מסוגלים להבחין שומן גבוה מרטבים לסלט דלי שומן ²⁴ והם מסוגלים להבחין תכולת השומן וcreaminess של מאכלי חלב בצורה מדויקת יותר מאלו שאינם טועמים ^23,25. בשלב זה לעומת זאת, הקשר בין צפיפות אדומות fungiform וזיהוי חומצת שומן שבעל פה 'טעם' אינו ידוע.

בבסיס מחקר chemoreception חומצת שומן הפה האנושי הוא היישום של טכניקות חושיות שונות. זיהוי השתנות פרט בזיהוי חומצת שומן שבעל פה הוא מוקד עיקרי ובמידה רבה תלוי בקביעת ערכי סף זיהוי חומצת שומן, כלומר, הנקודה הנמוכה ביותר שבו חומצות שומן יכולה להיות מזוהה בפתרון ^9. בעוד רכב שיטת בדיקה וגירוי הספציפי בשימוש משתנה על פני הספרות ובין קבוצות מחקר, ההליך הטיפוסי כרוך בהצגה משתתף עם קבוצה של חומצת שומן לתחליב וביקורת (ללא ופתרונות) חומצת עו"ד וזיהוי המהווה את המדגם "המשונה". כאן אנו מציגים שיטה מבוססת, אמינה ולשעתק לסף קביעה ¹⁰ באמצעות פתרונות חלב לתחליב והליך משולש עולה אילץ את בחירה.

אשר לרגישות חומצת שומן האוראלי משפיעה על תזונה, כלומר הצריכה של מזונות שומניים, והיכולת לתפוס שומן במזונות במידה גם היא עניין והנה אנחנו גם מדווחים על שתי טכניקות הוקמו נוספות כדי להרחיב את ההבנה של chemoreception חומצת שומן שלנו עוד יותר. טעם מזון שומני יכול להיות מזוהה על ידי מתן אנשים עם דגימות של מזונות זמינים מסחרי, עם שני קבוע ואפשרות דל שומן שמתבקשים לציין טעם של כל ^16. בכל הקשור לתפיסת שומן, משימת דירוג שומן פותחה על ידי המעבדה שלנו, שנועדה להעריך את יכולתו של פרט כדי לזהות שומן בפודינג, מטריקס אוכל טיפוסי ^16. כדי להעריך genetiג או הבדלים פיסיולוגיים בין אנשים, שיטת צילום לשון הנפוצה כרוכה בצביעה, צילום וכימות אדומות fungiform ^26. תוך שימוש בטכניקה זו בחומצה שומן המחקר נמצא בחיתוליו, להגדיל את היישום, במיוחד בשני רזים וסובל מעודף משקל / השמנת יתר קבוצות אוכלוסייה עשויות לעזור לזהות גורמים טבועים של צריכת שומן עודפת.

Protocol

הטכניקות הבאות אושרו לשימוש על ידי ועדת האתיקה של המחקר האנושי אוניברסיטת דיקין.

1. דמוגרפיה וanthropometry

1. להקליט מידע דמוגרפי ממשתתפים, כוללים תאריך לידה והמין.
2. בתחילת מחקר (נקודות ולימוד אחרים אם עיצוב מחקר זמני) לקחת גובה ומדידות משקל. להבטיח כי משתתפים לקחו את נעליים, מעילים כבדים או פריטי לבוש אחרים, והסירו את כל פריטים כבדים מכיסם.
   1. מדוד את הגובה של המשתתף באמצעות מד גובה. שיא מדידות לסנטימטר הקרוב ביותר.
   2. שוקל משתתפים באמצעות סולמות ייעודיים. הקלט משקל גרם הקרוב ביותר.
   3. חישוב ה-BMI באמצעות המשוואה: המשקל (קילוגרם) / גובה ² (מ ^'2). מזה, המשתתפים סווגו על פי ערכי BMI הגדרה סטנדרטיים; 18.5-25 קילוגרם / מ ² בריאים, 25-30 קילוגרם / מ ² סובלים מעודף משקל או מהשמנת יתר & #62; 30 קילוגרם / מ ^{2 27.}

דוגמאות 2. הפקה להערכת סף חומצת שומן אוראלית

1. השתמש בחלב עמיד דל שומן כבסיס להערכת סף טעם של חומצות שומן. מוצר ניתן לרכוש ומאוחסן בכמויות גדולות במידת צורך, וישמור שלא נפתח לתקופה של עד 6 חודשים או עד שהגיע למוצר פקיעתה. להכין 2 סוגים של כלי רכב: רכב עם חומצת שומן הוסיפה ורכב שליטה. הנפח של פתרונות מוכנים לבדיקה יהיה תלוי במספר משתתפים. הפרוטוקול הבא מספק כמויות אופייניות ל2 משתתפים.
2. הכן פתרון חלב בסיס לשימוש עבור שניהם את השליטה ואת רכב חומצות שומן על ידי הנחת 5% w: מסטיק כיתה מזון v ערבית (לדוגמא, לכל 2 ליטר של חלב 100 ז) לתוך כוס זכוכית 3 L. במידת צורך, מסטיק מימה לפני השימוש (זה משתנה בהתאם ליצרן מסטיק).
3. הוספת 0.01% w: EDTA v לחניכיים כדי למנוע חמצון (לדוגמא, 2 00 מ"ג ל2 ליטר של חלב).
4. להקצות כ 1 ליטר של חלב דל שומן למשתתף (לדוגמא., עבור 2 משתתפים, להשתמש 2 ליטר חלב) ושופך לתוך כוס.
5. בעזרת מערבל כיתה מעבדה עם מסך emulsor, homogenize הפתרון ב12,000 סל"ד במשך 2 דקות. הגדרת פתרון בצד.
6. הכן את פתרונות חומצת שומן באמצעות C18 כיתה מזון: 1. חמצון ניתן להעריך באמצעות גז כרומטוגרפיה במידת צורך.
7. הכן סדרה של 13 גרסאות של רכב חומצות שומן (חלב דל שומן UHT) עם ריכוזים הולך וגדל של C18: 1 (0.02, 0.06, 1, 1.4, 2, 2.8, 3.8, 5, 6.4, 8, 9.8, 12, ו20 מ"מ / L). כדי לעשות זאת, תווית כוסות זכוכית 250 מיליליטר עם כל ריכוז.
8. הוסף 5% פרפין הנוזלי לכל כוס (לדוגמא, 5 מיליליטר פרפין לפתרון חלב 100 מיליליטר).
9. בהתבסס על C18: ריכוז 1, הוסף את הכמות המתאימה של C18: 1 לכל כוס (ראה טבלה 1).

C18: ריכוז 1 (מ"מ)	μl / 100 מיליליטר
0.02	0.56
0.06	1.9
1	31.5
1.4	44.1
2	63.1
2.8	88.4
3.8	119.9
5	157.8
6.4	202
8	250
9.8	309
12	380
20	631.2

>

. טבלה 1 דוגמא C18: הריכוז של 1 ל -100 פתרון מיליליטר הגדלת ריכוזים (μl / ליטר) של C18: 1. משמשים להכנת הסדרה של 13 תחליבים לthr חומצת שומן אוראליeshold בדיקה.

10. בעקבות שימוש, למלא את C18: 1 מיכל עם N ₂ כדי למזער חמצון ולאחסן מתחת ל -4 מעלות צלזיוס
11. להוסיף את פתרון חלב בסיס לכל כוס חומצת שומן להיקף כולל של 100 מיליליטר. מניח בצד.
12. שימוש בפתרון הבסיס הנותר, להכין את רכב השליטה. בכוס זכוכית 2 ליטר, להוסיף 5% מהנפח שנותר בפרפין הנוזלי (למשל, פרפין הנוזלי 35 מיליליטר בנפח סופי של 750 מיליליטר) יחד עם פתרון הבסיס שנותר וhomogenize ל30 שניות לנוזל 100 מיליליטר.
13. Homogenize רכב השליטה ל30 שניות לכל 100 מיליליטר. צעד זה נעשה לקראת הפתרונות של חומצות שומן על מנת למנוע זיהום עם C18: 1.
14. Homogenize כל כלי רכב חומצות שומן, המתחיל בריכוז הנמוך ביותר עבור 30 שניות לכל 100 מיליליטר.
15. לטהר homogenizer הן לפני ואחרי בדיקה.
16. כמו בתהליך המגון יכול להעלות את הטמפרטורה של solutioNS, לבדוק טמפרטורה של בקרה וC18: דגימות 1 עם מדחום. לשרת את כל הדגימות ב RT (20 מעלות צלזיוס).
17. דגימות חלב חייבים להיות מוכנות טריות באותו היום כבדיקה. לטעום כל פתרון לפני בדיקה כדי להעריך את הרעננות והתאמה.
    הערה: בהתאם לנפח הנדרש, הכנת פתרון תיקח מינימום של 60 דקות.

3. בדיקת סף חומצת שומן אוראלית

1. להבטיח כי משתתפים נמנעו מאכילה או שתייה (כולל קפה, מסטיק, מי פה, וכו ') במשך שעה לפחות 1 לפני הבדיקה.
2. למזער הלא טעם רמזים על ידי ביצוע בדיקה תחת תאורה אדומה עם משתתפים לובשים קליפים האף.
3. השתמש בהליך המשולש עולה אילץ את הבחירה כדי לקבוע סף חומצת שומן שבעל פה. תווית כוסות פלסטיק חלק 30 מ"ל עם מספר זיהוי בן שלוש ספרות. לספק לכל משתתף עם סט של שלושה פתרונות 20 מ"ל בסדר אקראי; שני כלי רכב שליטה וACI שומן אחדרכב ד עם הריכוז הנמוך ביותר של C18: 1 (0.02 מ"מ).
4. כדי לקבוע סף החומצה של משתתף האוראלי שומן, להורות למשתתף לטעום כל פתרון משמאל לימין ורקוק לתוך כיור. שאל את המשתתפים שלא לבלוע את הדגימות.
5. שאל את המשתתפים לזהות אילו של 3 הדגימות הוא "מוזר" או "שונה" ואם הם לא בטוחים, הם חייבים לנחש (בחירה כפויה).
6. יש משתתפים לשטוף את פיהם במי deionized אחרי כל קבוצה של דגימות.
7. אם זיהה בצורה נכונה, לספק את המשתתף עם סט שני של 3 פתרונות (2 שליטה ופתרון חומצת שומן 1 בסדר אקראי) עם אותו הריכוז של חומצות השומן. אם זיהה באופן שגוי, לספק את המשתתף עם סט שני של 3 פתרונות, אבל עם הריכוז הגבוה ביותר של C18 הבא: 1 (0.06 מ"מ).
8. המשך בהליך זה עד למשתתף הוא מסוגל לזהות בצורה נכונה 3x המדגם 'המוזר' בשורה באותו הריכוז. הריכוז שבה הם מסוגלים לזהות המדגם 'המוזר' בצורה נכונה נרשם כC18 משתתפים: סף גילוי 1. ראה איור 1 עבור ייצוג גרפי של תהליך זה.
9. בהתבסס על סף גילוי, לאפיין משתתפים רגישים כמו, או hyposensitive לC18: 1. בקנה אחד עם ספרות קודמת, אנשים רגישים יכולים לזהות C18: 1 בריכוזים <3.8 מ"מ, בעוד אנשים hyposensitive דורשים ריכוזים> 3.8 מ"מ.
   הערה: בהתאם למספר תשובות שגויות, הליך הבדיקה יכול לקחת בין 10-30 דקות כדי להשלים.

הליך איור 1. עולה בחירה כפויה משולש המשמש לקביעת t זיהוי חומצת שומן. Hresholds משתתפים מסופקים עם שלושה פתרונות (שני פתרונות בקרה ואחד C18: 1 פתרון בריכוז נתון) וביקשו לזהות את 'המדגם המוזר'. אם נכון, הם נתנו למשתתפי קבוצה שנייה של דגימות עם אותו C18: ריכוז 1. אם שגוי, המשתתף מסופק עם קבוצה נוספת של דגימות עם ריכוז גבוה יותר של C18: 1. הליך זה נמשך עד שלושה פתרונות "משונים" מזוהים בצורה נכונה בריכוז נתון. נקודה זו נחשבת 'סף חומצת שומן זיהוי' יחידים.

4. שומן דירוג המשימות

משימה זו כרוכה משתתפים לטעום ארבע דוגמאות של פודינג מיידי, כל אחד עם תכולת שומן שונה (0, 2, 6, ו 10%) ודירוגם על פי סדר ריכוז שומן עולה נתפס.

1. הכן אצווה 1 של פודינג באמצעות אבקת פודינג וניל מיידי דל שומן על פי הוראות חבילה. פו פודינג לערבב 2 כפותwder, סוכר 1 כף, ו2 כוסות חלב דל שומן בקערה בטוחה במיקרוגל. אם המוצר הציע אינו זמין, זה יכול להיות תחליף עם מוצר מיידי דומה דל שומן (למשל, לבשל ולהגיש פודינג).
2. שימוש במתח גבוה, מחמם את התערובת במיקרוגל 1,400 W ב30 מרווחי שניות לסך של כ 5 דקות, או עד עבה. זה עשוי להשתנות בהתאם למותג של פודינג וההספק של המיקרוגל בשימוש. לאפשר פודינג להתקרר.
3. לייבל ארבע קערות 500 מיליליטר מטבח (או דומה) עם אחוזי שומן.
4. מחלקים את הקצפת לתוך 4 קבוצות נפרדות 100-g.
5. הוסף 0, 2, 6, ו 10% שמן צמחי לכל קערה כדי להשיג את תכולת השומן הרצויה (למשל, בתצווה 100 גרם, להוסיף 0 מיליליטר, 2 מיליליטר, 6 מיליליטר, ו10 מיליליטר שמן צמחי כדי להשיג אחוזי שומן בהתאמה ) ולשלב. מערבבים כל דגימה היטב כדי להבטיח שכל המרכיבים התמזגו לחלוטין.
6. לייבל ארבע כוסות חלק פלסטיק 30 מ"ל עם thre האקראימספרי דואר ספרתי. מלא את כוסות חלק עם 20 גרם של כל פודינג (סוג 1 של פודינג לכל כוס).
7. דגימות במקרר לפני הבדיקה ומגישים קר (4 מעלות צלזיוס).
8. לבצע בדיקה תחת אורות אדומים כדי למזער רמזים חזותיים.
9. האם משתתפים לטעום, לבלוע ולדרג 4 פודינג מנתפס הנמוך ביותר לתכולת שומן הגבוהה ביותר ולקבל ציון מתוך 5 בהתאם לתגובות שלהם.
10. ניקוד עבור משימה זו מוצגת בטבלה 2.
    הערה: זמן הכנה משוער עבור דגימות הפודינג הוא 30 דקות. משימת דירוג השומן צריכה לקחת לא יותר מ 10 דקות כדי להשלים.

כדי דירוג	ציון
0, 2, 6, 10	5
2, 0, 6, 10	4
0, 2, 10, 6	3
0, 6, 2, 10	2
1, 6, 10, 2	1
6, 0, 2, 10	1
2, 10, 6, 0	1
2, 6, 0, 10	0
6, 2, 10, 0	0
0, 10, 2, 6	0

טבלה 2. שומן דירוג ניקוד משימה. ניתנים משתתפים 4 דגימות של פודינג עם 0, 2, 6, או שומן 10% נוספים. משתתפים מתבקשים לדרג את הדגימות מהנמוכות ביותר לתכולת שומן הגבוהה ביותר ואת ציון 0 עד 5 נקודות (5 להיות לכל היותר).

5. שומן מזון Liking

1. הכן דגימות קטנות (5-20 גר ') של שני האופציות רגילות ודל שומן של מזונות זמינים מסחרי. מזונות כוללים גרסאות רגילות ודלת שומן של: גבינת שמנת (מוגשת על קרקר), מוס שוקולד, גבינה, עוגיות יבשות, לטבול חמאת בוטנים מוגשים על חתיכת הגזר, מיונז, סלט drEssing (מוגש על פרוסת המלפפון), ויוגורט.
2. לתייג כל דגימה עם מספר בן שלוש ספרות אקראית לזיהוי.
3. דגימות הנוכחיות בסדר אקראי כדי למנוע תופעות סדר.
4. הדרך את המשתתפים לטעום כל דגימה בנפרד. פריטי מזון מעובדים, אך משתתפים יכולים לאכול הרבה או מעט, כמו של כל דגימה כפי שהם רוצים.
5. האם משתתפים לדרג עד כמה הם אוהבים או לא אוהבים כל דגימה. מדוד טעם באמצעות סולם 100 מ"מ נהנתן כללי גודל (gLMS; ראה איור 2) הנע בין סלידה להעלות על הדעת חזקה כדי להעלות על הדעת חזקה כמו. שיא לחבב על ידי הצבת קו אנכי בנקודה המייצגת את משתתפי חיבה או חוסר חיבה של המזון.

איור 2. GLMS הדונית.GLMS הנהנתן ^30,31 משמש כדי להעריך את טעם של מזונות זמינים מסחרי רגילים ודל שומן. משתתפים לטעום ולדרג כל דגימה ולמקם את קו אנכי בנקודה המייצג את הטוב ביותר כמו שלהם, או הסלידה של המדגם.

6. תשומות ללא טעם אינן ממוזערים למשימה זו, ולכן לבצע משימה זו תחת אור הרגיל ואין לי משתתפים לובשים קליפים האף.

6. צילום לשון

1. הגדר את מצלמה וחצובה לצילום. התאורה פנימית רגילה מספיקה.
2. הגדר את המצלמה למצב מאקרו (או דומה) לצילום מקרוב.
3. השתמש ניקוב חורים כדי ליצור עיגול בקוטר 6 מ"מ ב1.5 סנטימטר x 1.5 סנטימטר (או דומה) רבוע של נייר סינון. תווית הנייר עם מספר זיהוי של המשתתף.
4. בכוס 50 מ"ל, לשלב צבע מאכל כחול עם מים deionized ביחס 1:20. כמות קטנה נדרשת למשתתף.
5. יוצקים 30 foo מיליליטרד אתנול כיתה לתוך מבחנה 50 מ"ל לעיקור פינצטה.
6. באמצעות סרטי הדבקה, לסמן מלבן סנטימטר 20 סנטימטר x 30 בצד השני של שולחן הבדיקות (זה צריך להיות בגובה שולחן רגיל), כפי שמוצג באיור 3 א.

איור 3.) התקנת צילום לשון. הפגנה של התקנת השולחן נדרשת לפני צילום לשון. צילום לשון) ב '. הפגנה של שיטת צילום הלשון

7. האם משתתפים למקם את המרפקים שלהם בפינות המסומנות של המלבן, מניחים את הסנטר שלהם בכפות הידות וכדי לבלוט בנוחות את הלשון שלהם, תוך שימוש בשפות כדי לייצב את העמדה זו (איור 3 ב). המשתתף חייב להישאר בתנוחה זו למשך הכיול של המכשיריםגרם.
8. שימוש מלבני (1.5 ס"מ X 3 סנטימטר) רצועה של נייר סינון, ייבוש בקצרה את החלק התחתון של הלשון.
9. טבול מקלון צמר גפן לתוך תמיסת צבע מאכל / מים ולהעביר כמות קטנה של צבע על גבי המשטח הגבי הקדמי של לשון, מייד מימין לנקודת קו האמצע וקרוב לקצה (ראה איור 4). ייבש את הלשון בפעם שנייה עם נייר סינון.
10. פינצטה המעוקרת אתנול יבש עם מגבת נייר ושימוש בפינצטה, הנח את נייר סינון 1.5 ² סנטימטר מראש שכותרתו על לשונו של המשתתף, עם חור 6 מ"מ מעל צבע המאכל הכחול (ראה איור 4).
11. הבזק באמצעות, לצלם שלוש דיגיטליים של הלשון של המשתתף. לסודיות, להבטיח רק את הפה של המשתתף והלשון גלויים.
12. הסר את נייר סינון 1.5 ² סנטימטר מלשונו של המשתתף עם פינצטה ששוב עברו עיקור באתנול באיכות מזון. העלה תמונהים לתוכנה לעריכת תמונות ועם פונקציית הזום, לספור את כל אדומות fungiform גלויות.
13. להבדיל אדומות fungiform מאדומות אחרות כפטריות גדולות יותר בצורה, מבנים גבוהים. הם לא לוקחים בפתרון הצבע בעוצמה, ובתור שכזו מופיעים הרבה יותר קלה בצבע.
    הערה: צילום לשון צריך לקחת לא יותר מ 10 דקות כדי להשלים.

איור 4. כימות צפיפות אדומות fungiform. מיקום של אזור 6 מ"מ להערכת אדומות fungiform. באמצעות תוכנת עריכת צילום, דמויות מספריות מצביעות על כל גבשושיות fungiform.

תוצאות

השיטות המפורטות לעיל הן חשובות כחלק מראיות המתעוררות ציינו כי chemoreception חומצת שומן לקוי במערכת העיכול וחלל הפה עשוי להיות קשורה עם עלייה ב-BMI וההתפתחות של השמנת יתר ^17. מספר מחקרים בשימוש בפרוטוקולים שתוארו לחקור זיהוי חומצת שומן בעל פה והפרסום האחרון שלנו הראה את השיטה היא גם אמינה לשחזור ^10. מחקרים שעשה שימוש במתודולוגיה זו היו יכול לקבוע באופן מהימן סף הגילוי של הפרט האוראלי חומצת שומן על ידי זיהוי הנקודה שבה משתתפים יכולים לזהות הבדל בין דגימות חלב ^9. . לאחר שלושה מפגשי בדיקות ניצול פרוטוקול זה, סטיוארט ואח' ⁹ מצאו כי הסף הממוצע לזיהוי C18: 1 היה 2.2 ± 0.1, עם סף גילוי החל 1-6.4 מ"מ (ראה איור 5). לאחרונה, הקמנו C18: מגוון סף גילוי 1 מ 00.26-12 מ"מ, (כלומר: 2.64 ± 0.7 מ"מ) ^10. תוצאות אלו תומכות ברעיון שניתן לאתרם חומצות שומן בחלל הפה, ושסמנו הבדלים אינדיבידואלים ברגישות לC18: קיימים 1. בהתבסס על תוצאות אלו, אנו יכולים לסווג אנשים רגישים כאו hyposensitive לC18: 1. אנשים רגישים מסוגלים לזהות C18 בצורה נכונה: 1 <3.8 מ"מ, ואילו נושאים hyposensitive דורשים ריכוזים> 3.8 מ"מ. מחקר מהמעבדה שלנו מצא רגישות אוראלית לC18: 1 קשור בצריכה תזונתית שומן ו-BMI (איור 6), שבו C18: 1 hyposensitive אנשים לצרוך שומנים רוויים יותר ובעלי חיים ויש להם BMI גבוה ^13. מעניין לציין, כי במחקר שנערך על ידי סטיוארט וKeast ^16, נמצא כי צריכת דיאטה דלת שומן הביאה לרגישות מוגברת לC18: 1 למשתתפים גם רזים וסובלים מעודף משקל (איור 7). עם זאת, מחקר זה מצא גם כי כאשר משתתפי consu med תזונה עתיר שומן, אנשים רזים שרגישות מופחתת לC18: 1, בעוד שאנשים בעלי עודף משקל לא חלה שינוי ברגישות לטעם (איור 8). הדבר מצביע על כך נוהגים לצרוך דיאטת שומן גבוהה, שהוא נוטה יותר לאנשים בעלי עודף משקל, עלול לגרום לchemoreception חומצת שומן המוחלש ^28. עם זאת, כפי שלא היו הבדלים ברגישות בסיסית בין משתתפים רזים וסובלים מעודף משקל, תוצאות אלו עשויות להצביע על כך שאנשים רזים הם פשוט רגישים יותר לשינויים תזונתיים לגבי צריכת שומן. זה גם עשוי להצביע על כך שזה היה הנוכחות של התערבות מסוימת (גבוה לעומת דל שומן), שייתכן שהשפיעה על תוצאות, ולא דיאטות הרגילות, אשר עשוי או לא עשוי להיות שונה לדיאטת ההתערבות. למרות זאת, מחקר זה מצביע על כך שיש כמה הבדלים מהותיים בין אנשים רזים וסובלים מעודף משקל לגבי רגישות טעם חומצות שומן, אשר דורשת חקירה נוספת.

ontent "עבור: לשמור-together.within-page =" תמיד ">
איור 5 C18: 1. ספי טעם זיהוי השתנות מסומנים על הוכח ברגישות לC18:. 1 עם משתתפים מסוגלים לזהות C18: 1 על פני טווח של ריכוזים (MM-6.4 1 מ"מ).

איור 6 C18:. ספי 1 טעם איתור ושיתוף עם BMI קשר בין היכולת לזהות C18: 1. והרכב גוף הוכח, לפיה אלה עם סף גבוה יותר לזיהוי (יחידים hyposensitive) יש ערכי BMI גבוהים באופן משמעותי (P = 0.002 , R ² = .467).

p-together.within-page = "תמיד">
איור 7 C18:. ספי 1 גילוי בעקבות תזונה דלת שומן לאחר 4 שבועות של צריכת דיאטה דלת שומן, C18:. ספי זיהוי 1 מוגבר ליחידים רזים ושמנים.

איור 8 C18:. ספי 1 גילוי בעקבות תזונה עתירה שומן בעקבות צריכת 4 שבוע של דיאטה עתירה שומן, אנשים רזים הפגינו רגישות מופחתת לC18:. 1 (P = 0.006), בעוד שאנשים בעלי עודף משקל הפגינו שום שינוי (P = 0.609) .

באופן דומה להשפעה של תזונה על סף זיהוי לחומצות שומן, יש מחקר לSuggeרח שטעם מזון עלול להיות פלסטיק ומשתנה על ידי חשיפה. לדוגמא, נראה כי דיאטת שומן גבוהה מגבירה את ההעדפה למוצר שומן גבוה יותר, עם את ההפך מתרחש בעקבות הצריכה של דיאטה דלת שומן ^16. עם זאת, השינויים אלה לא היו עקביים בספרות. נראה כי שינויים בהעדפות מתווכות על ידי משך הזמן שהאדם כבר הקפדה על תזונה עשירה או דלת שומן. באופן ספציפי, מאטס ²⁹ מצא שינויים משמעותיים בהעדפות מזון משתתף לאחר 12 שבועות על דיאטה מופחתת שומן, בעוד סטיוארט וKeast ¹⁶ מצאו רק שינויים אקראיים ושוליים לאחר ארבעה שבועות בדיאטה דומה. צריכת העדפות משתתף דיאטה שינתה שומן גבוה ליוגורט, עם העדפות ליוגורט דל שומן הגדלת, לשוחח לתוצאות צפויות (Baseline (BL): 19.44 ± 5.73, שבוע 4 (wk4): 21.94 ± 5.21, P = 0.046). יתר על כן, לאחר ארבעה שבועות בדיאטה דל שומן, העדפות לחמאה דלת שומן מוגבר בכל participants (BL: 6.23 ± 4.26, wk4: 7.32 ± 3.04, P = 0.046). העדפות ליוגורט דל שומן מוגבר למשתתפים רזים בלבד (BL: 2.51 ± 3.26, wk4: 3.68 ± 4.94, P = 0.07) תוך העדפות למוס דל שומן ירד לכל המשתתפים (P = 0.01).

היכולת לזהות שומן במזון היא נבדקה על ידי שואל משתתפים לטעום ולדרג את סדרה של פודינג עם תכולת שומן שונה. תפיסת שומן מזוהה מבוסס על כמה טוב המשתתפים היו מסוגלים לדרג את הדגימות. תפיסת שומן כבר ידועה לשנות עם דיאטה, למשל, בעקבות דיאטה דלת שומן הביאה לשיפורים בביצועים של המשתתף באיתור נכון ודירוג המידה של שומן בכל דגימת פודינג ^11. יתר על כן, נראה כי קיים קשר בין הרגישות לC18: 1 וזיהוי ודירוג של תכולת שומן ^4. ואכן, אנשים שהיו רגישים לC18: 1 ביצע o טוב יותר באופן משמעותיn את משימת דירוג שומן (4.3 ± 0.6) לעומת אנשים hyposensitive (2.3 ± 0.1, P = 0.02) (ציונים הם מתוך מקסימום של חמש) ^9. זה מצביע על כך שאנשים שהם יותר רגישים לחומצות שומן היו גם טובים יותר בהבחנה בין ארבעה ריכוזי שומן שונים בפודינג. אמנם לא הייתה מגמה של ביצועים כדי לשפר לאחר צריכת הדיאטה דלת השומן במשך ארבעה שבועות, זה לא היה שינוי משמעותי (BL: 1.3 ± 0.3, wk4: 2 ± 0.3, P = 0.077) ^16.

צפיפות אדומות כלומר מספר אדומות (ולכן בלוטות טעם) קיים בלשון משתנה בין אדם לאדם ומעיד על תפקוד טעם. צפיפות אדומות fungiform גבוהה יותר נמצאה קשורה לרגישות מוגברת לטעם, לתרכובות כוללים סוכרוז ²¹ ונכס חומר מר ^20. צפיפות אדומות לשון, כפי שנקבע על ידי צילום לשון, משתנה במידה ניכרת בין נושאים. לדוגמא, ג 'אנג et al. ²¹ מצא כי היו הבדלים אישיים משמעותיים בין משתתפים, החל מריכוז של 7.07 ± 0.35/cm ^2-233.43 ± 0.00/cm ² (נתונים היו למשתתף יחיד), ואילו אחרים ²⁶ מצאו ממוצע ריכוז אדומות fungiform להיות 156.00 ± 5.86/cm ^2. יתר על כן, נמצא כי אדומות יכולות להופיע בצורה שונה באופן משמעותי במבנה בין אנשים, עם וריאציה בגובה, רוחב, וצורה, ²¹ למרות ראיות מוגבלות לגבי ההשלכות אפשריות של הבדלים אלה. בהתחשב בממצאים קודמים המקשרים מספר אדומות עם רגישות טעם, זה מתקבל על הדעת שמערכת יחסים דומות יכול להתקיים גם לרגישות חומצת שומן בעל פה, לפיה אלה שהם יותר בעל פה רגיש לחומצות שומן עשויים להיות צפיפות גבוהה יותר של גבשושיות טעם ולכן מספר גבוה יותר של קולטנים חומצת שומן שבעל פה. בעוד קשר זה הוא עדיין לא הוקם, זה preseNTS אזור רומן של מחקר עשוי לעזור לסבך את המנגנונים המנחים את צריכת היתר של שומן.

Discussion

הטכניקות מתוארות לקביעת ספים אוראליים חומצות שומן, טעם מזון שומני, וצפיפות אדומות לשון אומתו ומשמשות במספר העבודות שפורסמו בשנים האחרונות ואנו ממליצים הערכת סף חומצת שומן אוראלי, שומן דירוג משימה ושומן לטעם מזון להתבצע בשני עותקים בכל נקודת זמן רלוונטית במחקר. יש כבר דיון מסוים לגבי השיטה האופטימלית להערכת זיהוי מפתנים ^32. בפרט, ההרכב של פתרונות המשמשים משתנה בין מעבדות, כפי שעושה את המתודולוגיה עצמו. באופן ספציפי, חומצת שומן שימוש בפרוטוקול זה, C18: 1, אנחנו מאמינים שהוא בדרך כלל נציג וקל לשימוש בחומצות שומן, בניגוד לחומצות שומן אחרים, כוללים חומצה לינולאית (C18: 2) וחומצת lauric (C12: 0) , אשר היה בשימוש בעבר ^9. C18: 1 הוא נמצא בדרך כלל באספקת מזון ושלא כמו C12: 0 הוא נוזליים ב RT, ועמיד יותר לחמצון מאשר C18: 2 ^9.C18: 1 גם הוכח כדי לספק נתונים אמינים על פני מפגשי בדיקות מרובים, ומתאם גבוה עם C18: 2 וC12: 0 ^10. יתר על כן, C18: 1 נבדק בהרחבה בכל ספרות רלוונטית, ולכן היא מועילה יותר להשוואות.

נקודת ההבדל בין הפרוטוקול שתואר בעיתון בהווה ובהליכים אחרים המשמשים במעבדות אחרות עיקרי הן כלי הרכב המשמשים להצגת גירויי חומצת שומן והגישה השיטתית שבו סף גילוי נחוש. שני כלי רכב חומצת השומן עיקריים המשמשים בספרות הם חלב דל שומן ^10,17 ואמולסיות מים ^6. בעוד הן הוכיחו יעילות לקביעת סף חומצת שומן, משתתפים עשויים להיות סביר יותר כדי לזהות את טעמו של השומן בתוך חלב, כלומר, זה חריג לטעום חומצות שומן במים, שעלול לגרום לרמות נמוכות יותר של תוקף חיצוני ללימודי ניצול בסיס מים. חלב דל שומןמספק כלי לchemoreception חומצות שומן, מבלי להתפשר על תוקפו. למרות ששתי שיטות אלה עדיין לא ניתן להשוות באופן ישיר בספרות, זה ידוע כי חומצות שומן מסיסים היטב במים ^33. כתוצאה ממסיסות חומצת שומן בפתרונות מבוסס חלב, תחליב זה יכול גם להיות כל הזמן יותר ויותר הומוגנית יותר מאשר פתרונות על בסיס מים, אם כי זה עדיין לא אישר. בעת יישום מתודולוגיה זו, חשוב לציין, חומצות שומן חופשיות יכולות להיות נוכחת באופן טבעי בחלב ³⁴ וכתוצאה מכך, יש להשתמש במוצר גם בפקיעתו כדי למנוע את העלייה של חומצות שומן חופשיות (המתפתחות עם גיל) והפרעה אפשרית לטעום ביצועי סף. הכנה מוצלחת של הפתרונות תלויים בגורמים רבים. ראשית, הסדר שבו "המרכיבים" מתווספים הוא הכרחי. צעדי הכנת רכב צריכים לעקוב בזהירות אלה שתוארו קודם לכן כדי להבטיח הרכב רכב תקיןnd תחליב יציב. שנית, טמפרטורה חייבת להיות מבוקרת ל. כל דגימה חייבת להיות מוצגת למשתתפים על RT כדי להבטיח משתתפים אינם מזהים 'המדגם המוזר "בשל גורמים אחרים מלבד" טעם ". לבסוף, כל הדגימות חייבות להיות הומוגני בצורה נכונה לתקופה הציעה של זמן. בעוד התחליב של חומצות שומן וחלב ללא שומן הוא יעיל יותר מאשר אם מים היו אמורים לשמש, יש עדיין סיכוי להפרדת תחליב בתוך המדגם.

שיטת הבדיקה הספציפית ששמשה בקביעת סף אוראלית חומצות שומן גם יש לקחת בחשבון. שתי שיטות המבוססים על חושיות תוארו בדרך כלל בספרות; אחד להיות הליך עולה אילץ את הבחירה משולש וחלופי, שיטת מדרגות ^35. המתודולוגיה משולש בחירה כפויה עולה היא שיטה הוקמה לקביעת סף טעם ויכול להיחשב שימושי מכמה סיבות, כולל העובדה כי בניגוד לשיטת המדרגות,השיטה עולה מתחילה בריכוז הנמוך ביותר של C18: 1 (0.02 מ"מ) ועליות עד למשתתף הוא מסוגל לזהות את נוכחותם של חומצות שומן בפתרון ^9. לעומת זאת, שיטת המדרגות כרוכה בעלייה או ירידה בריכוז חומצת שומן מנקודת אמצע שנקבע מראש ^11. עם זאת, החל מקביעת סף בנקודה מעל הסף עלולה לגרום להפחתת רגישות של אלה פוגעים ביכולת תגובת טעימות. יתר על כן, יש לו את השיטה עולה הסתברות נמוכה יותר של סיכוי אקראי המשפיע על תוצאות (.3.7%) בהשוואה לשיטת המדרגות (11.1%) ^11. ככזה, אנו מציעים שיטה עולה אילצה את הבחירה המשולש, בשילוב עם חלב דל שומן ככלי לבדיקות טעם נראה כי אמצעי יעיל לקביעה מדויקת של ספים שבעל פה.

קבלת מזון או לחבב את הבדיקה היא אחת ההערכות פשוטות יותר מתבצעות בתוך מחקר הסנסורי ובתור שכזו יש לא מעט בעיותכובע נוטה להתעורר. עם זאת, הסוג של קנה מידה חיבה משמשת הוא מוקד חשוב. במקרה זה, gLMS נהנתן הוא היעיל ביותר, כפי שיש לו כוח מפלה טוב וקל למשתתפים להשתמש ^36. נקודות הקצה של gLMS הנהנתן מסומנות עם 'הסלידה החזקה ניתן להעלות על הדעת "המתארים ו'להעלות על הדעת חזקה כמו' ומשתתפים להעריך לאהוב נגד כל החוויות הנהנתניות, לא רק מאכלים ^30,31. זה הוא יעיל בשליטה על תופעות תקרה מיוצרות על ידי קשקשי 9 נקודות סטנדרטיות, כמו כל החוויות נחשבות והשוואה. יתר על כן, gLMS הנהנתן יותר הצליח להוכיח שונות אישיות גדולות יותר, כמו בקנה מידה רחבה יותר ^36. בדיקות קבלת מזון עצמו עשויות להיות מוגבל על ידי המאכלים שהוצגו, שבאנחנו רק קיימות שתי אפשרויות לסוג מזון. מחקר נוסף עשוי לכלול עוד כמה מותגים או סוגים של כל מזון, כל אחד עם תכולת שומן שונה, או אולי מוצרים שנעשו במיוחד שבו שומןתוכן יכול להיות נשלט, והוא משתנה בלבד. חשוב לציין כי הפרשנות של כל הנתונים חייב להיעשות בזהירות. בעוד קשר פוטנציאלי בין טעם, העדפה וצריכה הוא סביר ומסקרן, תוצאות שנוצרו בתוך סביבת מעבדה וייתכן שיש גבול לתחולה של ממצאים אלה למצבים בעולם האמיתי.

הערכת צפיפות אדומות באמצעות צילום לשון היא תהליך קשה יותר, בצעדים ספציפיים שיש לנקוט על מנת לייצר תוצאות מתאימות וישימה. בפרט, חשוב לזהות את סוג אדומות הנכון. שלושה סוגים של גבשושיות טעם גלויים על הלשון האנושית; fungiform, foliate וcircumvallate ^4. אדומות Fungiform אולם ניתן להבחין בקלות כמו מבנים בצורת פטרייה ^26, והם בדרך כלל אדומות שנרשמו במהלך הערכות רגישות. אדומות Fungiform נוטות לנוע בריכוז 5-60לאזור 6 מ"מ ³⁷ (תלוי ברגישות), אם כי יש מחקרים המצביעים על כי אנשים מסוימים עשויים להיות כלפי מעלה של 230 אדומות אותו אזור ^21. הסוג של מצלמה המשמש הוא יסוד להשגת תוצאות מתאימות ועשוי להסביר את השונות הזאת. לפני השימוש בצילום דיגיטלי בתחום זה, videomicroscopy היה תקן הזהב לזיהוי ורישום צפיפות אדומות. עם זאת, זה כבר נקבע, כי אותה הרמה של זיהוי אפשרית באמצעות מצלמה דיגיטלית מתאימה ^26. יתר על כן, צילום דיגיטלי לוקח רק כמה דקות, שבי videomicroscopy עשוי להימשך עד שעה ^26. לא רק זה, אבל יש לו צילום דיגיטלי יש את הפוטנציאל להיות הרבה פחות יקר, ונייד יותר, מה שעשוי להיות מועיל לשימוש עם קבוצות משתתף שונות ^26. לבסוף, בזמן שאנחנו שואפים למדידת צפיפות אדומות fungiform לעמותות עם זיהוי חומצת שומן שבעל פה, אנחנו גם מציעים ספי טעם לtהוא חמישה טעמים טיפוסיים גם להתבצע במקביל. בהתחשב בהצמדה קודמת עם צפיפות אדומות ותפקוד טעם, זה יכול לשמש כ'מדד בדיקה 'נוסף אשר עשוי להוסיף לשלמות הנתונים, במיוחד לאור זה הוא תחום חדש של מחקר.

תחום מחקר chemoreception האוראלי, במיוחד בנוגע לחומצות שומן, הוא אחד מתעורר, ובתור שכזו היא חשובה לכל המחקר שיבוצע ברמה גבוהה, רצוי עם השימוש בפרוטוקולים עולים בקנה אחד, כדי לאפשר השוואה ישירה.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Name of Material/ Equipment	Company	Catalog Number	Comments/Description
Gum Arabic TIC Pretested PRE-HYDRATED FT Powder	Alchemy Agencies Ltd. NZ	CFR# 21 CFR 184.1330	Food grade agrigum
EDTA (Ethylenediaminetetraacetic acid)	Merck	1.08418 0250	Disodium salt dehydrate
L4RT Homogenizer	Silverson Longmedow, MA	L4RT
Liquid Paraffin	Fauldings		No catalog number as liquid paraffin is a regular consumable product
Nikon AF-S VR Micro Nikkor 105mm f/2.8G IF-ED camera lens	Nikon	2160
SLIK Sprint Pro II tripod	Slik Corporation	611-849
Nikon D90 Digital Camera with LCD Protector	Nikon	BM-10
Nitrogen
Tanita Body Scan Composition Monitor Scales	Tanita, Cloverdale, WA, Australia	BC-551
Seca Stadiometer	Medshop Australia, Fairfield, VIC, Australia	MED435