Method Article
כתב יד זה מתאר פעילות אוטומטית למחצה מכמתת גבון בחולדות. חולדות להגיע לאחוז, supinate של manipulandum כדורית. העכברוש מתוגמלת עם גלולה אם זווית סיבוב חורג קריטריון מוגדר על-ידי המשתמש. משימה זו מגדיל את התפוקה, רגישות פציעה, אובייקטיביות לעומת פעילויות מסורתיות.
משימות למדוד במדויק את מיומנות במודלים של בעלי חיים הם קריטיים כדי להבין את תפקוד היד. עכברוש התנהגותית משימות נוכחיות המודדים מיומנות במידה רבה להשתמש ניתוח וידאו של מניפולציה להגיע או מזון. בזמן משימות אלה שקל ליישם מוצקים על פני דגמים המחלה, הם סובייקטיביים, מפרך עבור הנסיין. אוטומציה של משימות מסורתי או יצירת משימות אוטומטיות חדשות באפשרותך לבצע את המשימות יותר יעיל אובייקטיביים, כמותיים. מאז חולדות הן פחות מיומן יותר פרימטים, מרכזי עצבני מערכת (CNS) פגיעה מייצרת יותר עדין לגירעונות זריזות, עם זאת, גבון היא מאוד מושפע בחולדות וגם קריטיים יד פונקציה פרימטים. לכן, תיכננו פעילות אוטומטית למחצה המודד forelimb גבון בחולדות. חולדות מאומנים להגיע, תופסים את manipulandum בצורת כפתור ולהפוך את manipulandum ב גבון ולקבל תגמול. חולדות יכול לרכוש את המיומנות של 20 ± 5 ימים. במהלך החלק המוקדם של אימון מאוד מפוקח, הרבה ההכשרה נעשית ללא פיקוח ישיר. הפעילות באופן אמין, reproducibly לוכדת גירעונות עדין לאחר פציעה ומראה על שחזור פונקציונלי המשקף במדויק שחזור קליניים עקומות. ניתוח של הנתונים מתבצע על ידי תוכנות מיוחדות באמצעות ממשק משתמש גרפי זה תוכנן להיות אינטואיטיבי. אנחנו גם נותנים פתרונות לבעיות נפוצות במהלך אימון, ומראה כי תיקונים משניים להתנהגות בתחילת ההדרכה לייצר רכישת אמין של גבון. לפיכך, הפעילות גבון כפתור מספק הערכה כמותית ויעילה של תנועה קריטית עבור זריזות בחולדות.
הפסד של זריזות אחרי מערכת העצבים מפציעה או מחלה משמעותית פוחתת העצמאות ואת איכות החיים של אנשים מושפעים 1,2,3,4. לפיכך, מיומנות הוא אמצעי התוצאה חשוב להבנת המדע של עצבי תיקון ושיקום כיסודות טוב השליטה העצבית של התנועה ולמידה מוטורית. באופן מסורתי, משימות ידניות כמו גלולה אחת להגיע, פסטה מניפולציה, אירווין, Beatties ואת סולם Forelimb Bresnahan (IBB) שימשו כדי להעריך את מיומנות ב בעלי חיים, במיוחד מכרסמים 5, 6,7. משימות אלה יש להפוך לפופולרי עקב זמנם רכישת פעילות מינימלית. עם זאת, הן איכותיות בטבע, מפרך עבור הנסיין, בזמנים, רגישות תיפקודי לאחר פציעה עם גירעונות עדין 5,7,8,9. מגבלות אלה של פעילויות מסורתיות דרבנה את התפתחות עוד מדדים כמותיים של המוטורית ב בעלי חיים, במיוחד, forelimb להגיע.
ישנם מספר יתרונות על אוטומציה של משימות, כלומר אובייקטיביות, עלייה, וזמן ניתוח ירד. משימות אוטומטיות חדשות לספק מדד רגיש יותר להערכת מיומנות לאחר פציעה מאשר קונבנציונאלי משימות 8,10. בנוסף, הם מאפשרים אימונים אדפטיבית, בדיקות אשר חייטים האימונים ובדיקות קושי לביצועים של חיה. לבסוף, משימות אוטומטיות להפיק כמויות גדולות של נתונים, אשר מספקים שני יתרונות. ראשית, גידול בנתונים זוטא, במספר הניסויים מגדילה את כוחו סטטיסטי של מחקר. שנית, זה נותן מדעני מוח ערכת נתונים גדול שממנו ניתן ללמוד למידה מוטורית, הכשרה, פיצוי יותר robustly באמצעות ניתוח של מידע קינטי וברמות קינמטיות 11.
מספר קבוצות ניסו להפוך לאוטומטיות משימות מסורתיים. מצלמות מהירות גבוהה יכול לשמש כדי לאסוף נתונים קנטית מפעילויות כמו בגדר יחיד להגיע פעילות 12. Alaverdashvili ו- Wishaw השתמשו מצלמות מהירות גבוהה כדי ללכוד את תנועות להשיג ולנתח ספרות תנועות באמצעות תוכנת המדידה מסגרת תנועה שיא Motus 13. עם זאת, תוכנה זו אינה מזהה ספרות באמצעות ראייה ממוחשבת, אך במקום זאת דורש הנסיין לדיגיטציה נקודות נע על ידי הסמן. בנוסף, משימות מסוימות שימשו ביחד עם כדורים אקדחים סטרט וכן כלובים למיכון15,16 14,תהליך הכשרה.
קבוצות אחרות השתמשו בכוח חיישנים, כמו גם מצלמות מהירות גבוהה כדי להעריך התאמות המרחבי ואת כח forelimb מיומנים להגיע באמצעות מניפולציה פסטה, בעוד שאחרים עיצבו משימות כדי ללכוד תנועות מורכבות יותר 17. משימה אחת כזו היא משימה יד ולמשוך המשתמשת מכשיר רובוטי 3-מעלות-של-חופש כדי ללכוד תנועה מישורי, המסתובבת של עכברוש forelimb תנועות 18. יש לזה יתרונות של היכולת למדוד את קינטיקה של תנועות, אבל עם עלייה של המורכבות והעלות.
. הנה, נדגים פעילות forelimb חצי אוטומטי המודד גבון חולדות 8. Forelimb גבון הוא הרוטציה של הכפה של כף היד אל כף היד למעלה. גבון הוא סמן מעולה של פונקציה בדרכי corticospinal והן תנועה הרלוונטית קלינית בבני הנדרשת עבור כל יום חיה פעילויות 8,19,20. בנוסף, גבון היא רגישה מאוד פגיעה, איון, במיוחד בהשוואה לגלולה אחת להגיע 8. הפעילות גבון, שפותחה בשיתוף פעולה בין מכון המחקר הרפואי בורק לבין אוניברסיטת טקסס שבדאלאס, בתנועה סיבובית אמצעים אופקיות 8,10. חולדות ממוקמים בתוך קופסה התנהגותית (איור 1 א'), מאומנים לעשות שלושה פרקים (איור 1B): יד דרך צוהר מלבני; תופסים manipulandum כדורית; supinate לזווית המיועדים לכך.
הפעילות התנהגות נשלטת על ידי תוכנת מחשב (איור 1C). תוכנת השליטה שולחת הוראות מיקרו-בקר שמחובר אל אוטומטי-positioner, אנקודר אופטי, רמקול, מזין. את מיקרו וחיבורים היקפיים שלה מכונים תיבת מיקרו-בקר. מידע זורם מן אנקודר אופטי, מיקרו, ואז המחשב, וחוזר מיקרו-בקר. אם תוכנת השליטה יש לסמן מיקרו המשפט היה הצלחה, מיקרו מפעיל במזין לוותר גלולה. בתחילת כל מפגש, תוכנת השליטה ממסרים שהמידע הבמה מיקרו-בקר, אשר מנחה את auto-positioner כדי למקם את כפתור במרחק מוגדר של השלב הצמצם. Auto-positioner יכול גם להיות מופעל באופן ידני באמצעות מקשי החצים ממוקם על האוטומטי-positioner. אנקודר אופטי רשומות נתונים על שינויים 100 הרץ, אמצעים בזווית. כל הנתונים מאוחסנים בתבנית בינארית.
הנסיין משתמש אימונים רציפים שלבים בתוך התוכנה כדי לאמן את החולדה מ habituation supinating בקצב קבוע מראש זווית והצלחה. במהלך habituation, manipulandum הידית ממוקמת בתוך חלון צמצם ללא כל משקל. לאחר שבוע של אימונים מאוד תחת פיקוח, העכברוש משייכת את כפתור גמול ומתחילה להפוך את הידית באופן עצמאי. ברגע העכברוש הוא מסוגל לפנות באופן עצמאי, הידית מההצעה 1.25 ס מ 0.25 ס"מ במרווחים עד העכברוש יכולים להפוך באופן עצמאי ב 1.25 ס מ. משקל הוא ואז להוסיף במרווחים של 1 g החל דור 3 6 ג אוטומטית הכשרה שלבים רכבות החיה אל supinate הידית ב 6 g עד 75 מעלות. בשלב זה של אימון היא במידה רבה ללא השגחה; ברגע חולדות לאמץ את הפעילות עם הטופס המתאים (נדון להלן), הם ממשיכים supinate כראוי. ההכשרה הושלמה כאשר חולדות supinate 75 מעלות בשיעור הצלחה (אחוזי ההצלחה) של 75% 8. כאן, אנו מתארים פרוטוקול אימונים טיפוסי, נוכח פתרונות למספר בעיות נפוצות נתקלנו. אנו מדגימים את ההתקדמות של חולדות ושנכשלו נציג באמצעות פרוטוקול אימונים, ולהראות כי ניתן לשנות את המשימה להראות תיפקודי עם גירעונות עדינים או חמורות יותר.
פרוטוקול זה מתאר הגדרת המשימה של הקמת חי, האכלה תנאים, כמו גם אילוף בעלי החיים, בדיקות חיות לאחר פציעה, ניתוח התנהגות נתונים. ארבעת השלבים של אימון בעלי חיים מתוארים גם: habituation, פרס איגוד, משקל הדרכה, הכשרה קריטריון להפוך זווית. ניסויים בבעלי חיים כל אושרו על-ידי IACUC וייל קורנל לרפואה של אוניברסיטת טקסס בדאלאס.
1-הגדרת את the Task
2. החיים והתנאים האכלה
3. הדרכה הליך
הערה: סקירה כללית של ההליך ההדרכה מוצג באיור 3 א. לאורך כל הפרוטוקול, הרכבת העכברושים פעמיים ביום, פעם בבוקר, פעם בשעות אחר הצהריים. לחכות לפחות 3 שעות אחרי קורס הבוקר לפני תחילת במושב אחר-הצהריים.
4. הערכת לאחר פציעה
5. ניתוח נתונים
הערה: הנתונים נשמרים במיקום ברירת המחדל בכונן c: של מחשב. נתונים שנלכדו ב 100 הרץ במהלך חלון פגע ומאוחסנים בתבנית בינארית. כאן, הנתונים נותחו באמצעות תוכנית מותאמת אישית, הנקראת מיומנות. אנא שלח דואר אלקטרוני ד ר ג'ייסון כרמל לגישה זו תוכנה חופשית-
בתחילת האימון, הנסיין מבלה יותר זמן פעילות בעיצוב התנהגות חולדה. כמו החולדות לשייך עכברוש גבון עם פרס, הידיים על הזמן יורד (איור 3 א). במהלך habituation, פרס איגוד ולהדרכות משקל, אורך הפעלה מלאה (30 דקות) מושקע בפעילות. עם זאת, לאחר עכברוש הוא supinating עם משקל 6 g, הזמן בפעילות בהדרגה מפחית עד כ- 15 דקות כמו גבון זווית עליות של החולדה. לבסוף, החולדה מגיעה בסיסית, הזמן בפעילות הוא לכל הפחות; הנסיין צריך רק למקם את החולדה בתיבת התנהגותית, הפעלת התוכנית. המספר המרבי של חולדות שנסיינית יכול לעבוד עם בו זמנית בשני העכברושים במהלך פרס האגודה, חולדות ארבעה במהלך משקל הדרכה והכשרה בסיסית, כמו שיש כמה חולדות הארגזים במהלך הערכה בסיסית ובדיקה לאחר פציעה. על הממוצע, 75% של חולדות (n = 56) לרכוש את המשימה.
לאחר העכברוש המשויך גבון פרס, אין התקדמות חיובית בזווית של החולדה גבון (איור 3B). ב- 3B איור, העכברוש התקדם החל דור 3 6 גרם משקל מיום 3 ליום 7. אחרי משקל הדרכה, היה תקופה קצרה של אימונים אדפטיבית מיום 7 ליום 9, במהלך אילו גבון עלה מ 26 ל 30 מעלות. כי לא היה שינוי משמעותי, סף סטטי הועסק מיום 9 עד 18. במהלך תקופה זו, העכברוש בהתמדה עלה מ-30 מעלות ל 75 מעלות תוך 8 ימים. יש השתנות היומיומית במהלך אימונים, בפרט, ימים 12 ו-14. אבל באופן כללי, יש המגמה כלפי מעלה בזווית גבון. בסוף פוסט-habituation 17 יום, העכברוש הקליט שלה קו בסיס ראשון, ארבעה טיפולים מאוחר יותר, זה גמור. הערכה בסיסית. מ habituation להקלטה של תוכנית בסיסית הרביעי, פרוטוקול אימונים לוקח ממוצע של 20 ± 5 ימים.
בעוד במלונות של התקדמות אידיאלי באמצעות פרוטוקול אימונים חשוב, במלונות של התקדמות לא מוצלח הוא לא פחות חשוב (איור 4). איור 4A, הקו הכתום מראה חולדה שהשלימה בהצלחה הפרוטוקול, הקו הכחול מראה עכברוש לא מוצלח, קווים אפורים להראות עוד שישה חולדות מוצלחת. חולדות מצליח להגיע בסיסית ב 15 ± ימים 0.6 (n = 7). העכברוש מוצלחת נציג משתמש תפיסה בשעה 1, בעוד העכברוש כושל משתמשת תפיסה בשעה 3. חולדות הן לשייך את כפתור פרס 2 ימים. בנוסף, שני עכברושים להציג התקדמות זווית (איור 4A) גבון דומה בארבעת הימים הראשונים לאחר משקל נוסף. עם זאת, לאחר הנקודה הזו העכברוש מוצלח מתחיל להינתק מן החולדה לא מוצלח. זה בגלל תפיסתו של חולדה כושלים הצליח יתוקן לפני נקודה זו (ראה איור 2).
את העכברוש מוצלחת, יש עלייה תלולה בזווית גבון מתחיל מישור בין 50 ל- 60 מעלות, אך אז קורות חיים טיפוס וקולה לכיוון 75 מעלות. עם זאת, עבור העכבר לא מוצלח, יש עלייה הדרגתית יותר זווית גבון. כאשר העכברוש מישורים בסביבות 20 מעלות, העכברוש מקבל דחף כדי supinate יותר, אבל בסופו של דבר, הוא מאבד עניין הפעילות, אפילו עם האכלה ידנית, ואת הזווית גבון פוחת במהירות סביב habituation שלאחר ביום 15. אמנם יש התאוששות קלה לאחר habituation שלאחר יום 17, העכברוש מאבקים supinate יותר מ-25 מעלות. אם עכברוש לא מושגת בסיסית ביום 20, לנו לשקול את העכברוש הזה לא מוצלח ולהסיר את החולדה מן המחקר.
בנוסף זווית גבון, אחד יכול לבצע בדיקה חזותית של ואת גבון (איור 4B-D) את העכברוש ושנכשלו. בעת ביצוע בדיקה חזותית, אנחנו מחפשים מספר מאפיינים waveform: שיפוע של קו, השהיה, מספר פסגות בחלון הזמן למשפט. השיפוע של הקו מחושבת הנגזרת של העקומה בין תחילת העקומה הפסגה של העקומה. ההשהיה מחושבת הזמן בין אתחול של הניסוי העקומה עובר את הסף פגע. לבסוף, פסגות מחושבים באמצעות הנגזרת למצוא maxima המקומי בחלון למשפט. בעבר, אנו למצוא את השיפוע של קו או מהירות, הוא מדד חזקים של גבון קינטיקה, רגיש עדין קשב 8.
בשליש הראשון של האימונים לאחר תחילת supinate באמצעות 6 g (איור 4B), העכברוש מוצלחת (4B באיור1) מראה על waveform יחיד לשיא ליד 20 מעלות, ואילו החולדה לא מוצלח (4B איור2 ) מציגה פנייה כפולות, או שתי הפסגות, עם השיא הראשון ליד 10 מעלות, הפסגה השנייה בקרבת מקום ל- 5 מעלות. בשליש האמצעי של הדרכה (איור 4C), העכברוש מוצלחת (4C באיור1) מראה עלייה במחירי שיא זווית 20 מעלות ל 50 מעלות עם עקומה שיא מוגדר יותר, יחיד. העכבר לא מוצלח (4C באיור2), בינתיים, היחיד הופעות שולי: גידול שיא זווית 20 מעלות אבל השתפרה בצורה שלו; היא עכשיו משתמשת רק סיבוב אחד. על-ידי השלישי הסופי של אימונים (איור 4D), העכברוש מוצלחת (4D באיור1) מציג צורת גל יחיד בולט מאוד לשיא בסביבות 65 °, לעומת החולדה לא מוצלח (4D איור2) עם זווית שיא של 20 מעלות אבל עכשיו עם שיא נוסף-2 s של 15°. זהו אינדיקטור טוב נוסף עם הקושי הגובר הכשרה, העכברוש היתה אפשרות לתקן מאחיזתו בשעה 3, בתורו, אפשרות supinate כראוי. אפילו אם העכבר הזה לא נכללו במחקר, בסופו של דבר יכול לבצע עד 75 מעלות שאלות יישאר אם זה היה נכון גבון מול גבון עם פיצוי.
לבסוף, הפעילות גבון מזהה תיפקודי לאחר מספר סוגים של פציעה, לרבות פגיעה לחתוך דרכי corticospinal, מסלול ראשי התנועה הרצונית אצל אנשים forelimb motor cortex הנגע שבוצעה עם זריקות endothelin (איור 5) 8,10,22. חולדות בקבוצה pyramidotomy (סגול, n = 8) אומנו supinate לפחות 75° ב 6 g-שיעור הצלחה של 75% ומעלה, תוך חולדות בקבוצה הנגע בקליפת המוח (ירוק, n = 10) אומנו supinate ° 60 ב 7.5 גר' ל- 75% ומעלה. חולדות בשתי הקבוצות הראו ירידה חדה בשיעור הצלחה לאחר פציעה (איור 5A). שיעור ההצלחה של חולדות בקבוצה pyramidotomy ירד מ 90% ± 2% עד 14% ± 8%. Sucקצב להודעה חדשה עבור חולדות עם הנגע קורטיקלית ירד מ 76% ± 1% כדי 10% ± 3%. עד שבוע 6, שתי הקבוצות היו עדיין לקוי: הקבוצה pyramidotomy הייתה ב- 34% ± 11% בעוד הקבוצה הנגע קורטיקלית נותרה ב 16% ± 7%. באשר זווית גבון, שתי הקבוצות מציגות ירידה מ מראש כדי לאחר פציעה (איור 5B). עקב הזוויות גבון בסיסית קריטריונים שונים, הקבוצה pyramidotomy הייתה זווית משלפני גבון גבוה יותר (85° ± 2.9°) מאשר הקבוצה הנגע בקליפת המוח (67° ± 0.52°). הקבוצה pyramidotomy ירד 38° ± 10° ואילו הקבוצה הנגע קורטיקלית ירד עד 27° ± 2.9°.
איור 1: גבון פעילות תיאור. (א) החולדה ממוקמת בתוך קופסת פרספקס עם צמצם שדרכו זה מגיע וב -כפתור זה חייב לפעול ב גבון. הידית יש שתי תחנות כדי למנוע גבון זוויות גדול מ- 100°. הידית יש גם גלגלת עם משקל; זה יוצר מומנט זה העכברוש חייב להתגבר על supinate. הידית מחובר מקודד אופטי המודד זווית עם דיוק של 0.25°. אנקודר אופטי הזה מחובר מיקרו, אשר בתורו מחובר למחשב אשר שולטת הפעילות. המחשב מאותת מיקרו-בקר כאשר למשוב על ההדק אודיו-, לוותר על גלולה מ במזין אם קריטריון ההצלחה מושגת. מיקרו-בקר שולטת גם את positioner אוטומטי אשר עמדה בין 0 ל- 1.25 ס מ היא מוכתבת על ידי השלב האימונים שנקבעו על-ידי המחשב. (B) העכברוש מבצע את הפעילות בשלושה פרקים רצופים: להגיע דרך הפתח, אוחז את כפתור עם הבנה חשמל הממוקם ב 1 שעה, וגם supinating. (ג) כפתור גבון פעילות נשלטת על ידי תוכנת שליטה. הנסיין כניסות שם הנושא ובוחרת את שלב ההכשרה, ואילו התוכנית מגדירה את הפרמטרים המתאימים. גל של גבון מוצלחת יחיד ניסיון מוצג בכחול, ואילו הרצף של ניסויים שהצליחו ושנכשלו מוצגים ירוק ואדום, בהתאמה. משפט מסומן מוצלחת על ידי תוכנת שליטה אם הזווית גבון גדול יותר מהסף פגע בתוך חלון זמן מוגדר, בעוד משפט מסומן לא מוצלח. אם לא. תוכנית זו שולטת תיבה אחת. ארבע תוכניות ניתן להפעיל בו זמנית לכל מחשב. איור זה שונה מ- Sindhurakar. et al., 2017, Neurorehabilitation ותיקון עצבית8. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 2: גבון תנועות. דיאגרמות ותיאורים של תנועות נכונות ושגויות גבון נפוצות במהלך פרוטוקול אימונים. התנועות הנכונות לאפשר גבון נכון, בעוד תנועות שגויות כוללים מנגנונים לפיצוי שעלולה למנוע גבון אמיתי. כלולים הציע פתרונות לתיקון תנועות לא תקין. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 3 : פרוטוקול אימונים. ציר הזמן הסטנדרטי (A). ישנן חמש תקופות אימון שנמשך כ 25 ימים סה כ: Habituation (5 ד), פרס האגודה (ד 1-3), אימון משקולות (3-4 d), הכשרה בסיסית (8-12 ד) ולאחר הערכה בסיסית (ד 2-4). צורת הקו על ציר הזמן מייעד את הזמן הנדרש של הנסיין לבזבז על הפעילות בכל מפגש. כמו פרוטוקול אימון מתקדם, מקטין הזמן בפעילות. (ב) ההתקדמות הכללית של היכולת של עכברוש supinate מאגודת תגמול על בסיס הערכה. בסך הכל, יש התקדמות ליניארית חיובית של העכברוש לכיוון בסיסית, אך כפי שנצפו, יש השתנות בביצועים של עכברוש לאורך כל פרוטוקול אימונים. לאחר משקל הדרכה, יש תקופה של אימונים אדפטיבית, איפה סף זווית גבון משתנה כדי להתאים את הביצועים של החולדה. הכשרה זו מסתגלת ואחריו פרדיגמה סף סטטי עד העכברוש השיגה בסיסית. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 4: רכישת פעילות ושנכשלו. (א) התקדמות של גבון זווית במהלך אימון הפרוטוקולים של חולדות שמונה, שבע מוצלח ואף אחד לא מוצלח. עכבר נציג אחד המגיע קריטריון בסיסי (מוצלח, תפוזים), עכבר אחד לא מוצלח (כחול) משמשים בהמשך סיפורי מקרה. ב- 7 הימים הראשונים של האימון לאחר habituation, הן העכברוש ושנכשלו הראו התקדמות דומה בזווית גבון. מאת habituation לאחר 11 יום, העכברוש מוצלח היה supinating 55 ° ואילו החולדה לא מוצלח supinated 25 °. לאחר 15 יום שלאחר habituation, העכברוש מוצלחת הראו התקדמות חזקה כלפי מעלה, ואילו החולדה לא מוצלח ירדה ביצועים. בשליש האחרון של habituation שלאחר אימון, החולדה לא מוצלח היה plateaued ב- 30 מעלות ואילו החולדה מוצלח היה supinating 80 °. גל ממוצע (B) (קו שחור) עם בר-סמך 95% (כתום כחול מוצלח, עבור לא מוצלח) בשליש הראשון של הדרכה לאחר 6 גר' משקל נוסף. (B1) עכבר מוצלח - יחיד שיא בסביבות 20°. (B2) . עכברוש לא מוצלח - שיא כפול עם גלובלית לכל היותר 10° (ג) ממוצע waveform (קו שחור) עם בר-סמך 95% (כתום כחול מוצלח, עבור לא מוצלח) השלישי השני של הדרכה לאחר 6 גר' משקל נוסף. (C1) עכבר מוצלח - יחיד לשיא בגיל 45°. (C2) . עכברוש לא מוצלח - טופס משופר עם שיא אחד ליד 20°. גל ממוצע (D) (קו שחור) עם בר-סמך 95% (כתום כחול מוצלח, עבור לא מוצלח) השלישי הסופי של הדרכה לאחר 6 גר' משקל נוסף. (D1) עכבר מוצלח - מבוטא יחיד לשיא בגיל 65°. (D2) . עכברוש לא מוצלח - שיא כפול עם מקסימום גלובלי ב- 20°. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 5:חזק > פעילות רגישות מודלים שונים של פגיעה. חולדות בקבוצה pyramidotomy (סגול, n = 8) אומנו supinate ° 75 ב 6 g-שיעור הצלחה של 75% ומעלה, תוך חולדות בקבוצה הנגע בקליפת המוח (ירוק, n = 10) אומנו supinate ° 60 ב 6 g ל- 75% ומעלה. הנתונים המוצגים הם שגיאה סטנדרטית זאת אומרת ±. (א) להצלחה עבור pyramidotomy הנגע נגד הנגע קורטיקלית. שני הדגמים פציעה הראו ירידה חדה בשיעור הצלחה של טרום כדי לאחר פציעה (שבוע 1). שיעור ההצלחה של pyramidotomy ירד מ 0.90 ± 0.02 כדי 0.14 ± 0.08, ואילו שיעור ההצלחה של הנגע קורטיקלית ירד מ 0.76 ± 0.01. (ב) גבון זווית עבור pyramidotomy נגד הנגע קורטיקלית. שתי הקבוצות הראה ירידה מ מראש כדי לאחר פציעה: הקבוצה pyramidotomy ירד ל 38.2 ° ± 10.1 ° בעוד הקבוצה הנגע קורטיקלית ירד ל 27.1 ° ± 2.9 °. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
הפעילות גבון כפתור מוערך forelimb גבון בחולדות בשיטות כמותיות, חצי אוטומטי. כדי להשיג נקודות אלה, רבים מן הפרמטרים תוכנן עבור הפעילות, כולל כפתור היישור, עיצוב manipulandum והקריטריונים הדרכה, יש כבר iterated על פני מספר שנים. עבור כפתור היישור, אנחנו ניסויים עם שלושה מערכים שונים של הידית לגבי הפתח: שמאל בצד של הידית מיושר עם הצד השמאלי של הצמצם, הידית במרכז הצמצם, הצד הימני של הידית מיושר עם הצד הימני של perture. . סגרנו על הצד הימני של הידית מתואמים עם הצד הנכון של הצמצם, כמו זה חולדות המיוצר היו שאימן את כמות הזמן הקצר ביותר, מי supinated עם מנגנוני פיצוי מינימלי, באופן ספציפי, הפרעה ביד שמאל
לגבי עיצוב manipulandum, אנחנו שינו מספר תכונות עיצוב כדי למקסם את מפנה עם forelimb ולמזער את השימוש בגוף. בנוסף, אנו מדורגים הקושי של הפעילות חומרת הגרעון החזוי. לאחר pyramidotomy, גבון היא התנועה בעוצמה הרבה ביותר המושפע, אבל ירידת ערך היא עדיין יחסית עדין. לכן, אנחנו אומנו חולדות קריטריון בסיסי גבוה יותר (75°) כדי להבטיח כי גירעונות גדולים נצפו לאחר פציעה. נגעים קורטיקלית, שהן יותר ופוגע, 60 מעלות הסף ב 7.5 גר' היה די כדי להוכיח של גירעון משמעותי לאחר פציעה. פרמטרים נוספים היו ממוטבת דרך מגישה ניסוי וטעיה כוללות גודל הצמצם, כפתור במרחק הצמצם, חלון הזמן כדי להשיג משפט מוצלחת.
ישנם כמה נקודות קריטיות במהלך פרוטוקול אימונים הדורשים השגחה זהיר. כאשר הכשרה בסיסית, שיטת קביעת סף מסתגלת שימש בהצלחה לאמן חולדות 75° 10. עם זאת, עכברושים יכול מישור בשיא זווית פחות מ 75°; הביצועים נשארת זהה לאחר 4-5 מפגשים. כדי לשפר את הביצועים, סף סטטי יכול להיות מועסק. סף סטטי מתייחס הסף שנותרו על תואר קבע, אשר אינו תלוי ביצועים עכברוש, בניגוד הסף מסתגלת שינויים בהתבסס על הביצועים האחרונים. אם החולדה מישורים במהלך אימונים אדפטיבית, הנסיין אמור להשתנות סף סטטי. הכשרה סטטי שלבים נע בין 20 ל 70 מעלות במרווחים של 10°. (שלב K28 - קיי 33). בחר את הבמה סטטי מבוסס על זווית שיא ממוצע של החולדה במושבים 2 קודמות. לדוגמה, אם החולדה הוא ממוצע של 45°, בחר את הבמה סטטית עבור 50 מעלות (K31). בכל שלבי סטטי להגדיר את "אתחול. Thresh."ב- 5 °. במהלך ההכשרה, אם החולדה מאבד מוטיבציה, באופן ידני להאכיל את החולדה אם זה supinates קרוב אבל לא מעל הסף.
בנוסף, במהלך הערכה בסיסית, כ- 5% של חולדות לסגת 5-10 מעלות שלהם בזווית גבון ו 5-10% בשיעור הצלחה בין ההפעלות. אם זה קורה, החולדה לא לשחזר את הזווית שיא ממוצע 75° לאחר 3-4 מפגשים, ירידה במת סטטי בתוך 10 מעלות זווית הממוצע הנוכחי של החולדה לפני שחזר לשלב 3.5. חשוב לא להציג חולדה מחדש בשלבים מסתגלת ברגע זה הושם על שלבי ההכשרה סטטי.
ישנן כמה מגבלות על הפעילות. ברגע תפיסה שגויה העמדה הוקם, שינוי התנהגות וותרו (איור 2) יכול להיות קשה. לפיכך, גילוי מוקדם ותיקון חשוב. כדי לתקן אחיזה של עכברוש, ניתן לשנות את הצמצם על-ידי צמצום גודל הצמצם בכיוון אופקי או אנכי; בדרך כלל אנחנו להקליט את שקופית מזכוכית לקצה של הצמצם צריך התאמה. עבור רוב חולדות, זה משפר את הטופס תפיסתו שלהם כי זה מכריח אותם להבין את manipulandum באופן ספציפי. זה, בתורו, משפר את היכולת שלהם supinate כראוי.
בנוסף לאתגר זה, חולדות יכולים לפתח מנגנוני פיצוי supinate. אלה כוללים את השימוש בראש כדי לסייע forelimb של גבון; הורדת את המרפק ואת הכתף משותפת כדי לבטל את כפתור; שימוש ביד שמאל כדי לסייע סובב את כפתור או לוחץ הכפה להשיג. כל אלה התנהגויות יכול לשמש כדי להשלים את המשימה בהצלחה. כפי שהוזכר לעיל, ניתן לתקן התנהגויות המתייחסות לתפוס את בכך ששינה את הצמצם. מנגנוני פיצוי מחוץ לתפוס את, עם זאת, מחייבים השתתפות פעילה על ידי הנסיין לא לתגמל התנהגות מפצה. לאחר פציעה, הבחנו חולדות לוקח כמה מחקרים כדי למקם את הכפה לתנוחה הנכונה לפני supinating. אמנם לא ניתחנו אילו רכיבים של הפעילות עשוי לתרום האובדן של גבון, אלה כוללים איבוד אחיזה מדויק, ליקויי אפנון כוח, בין אפשרויות רבות.
הפעילות גבון חצי אוטומטיות לוקח, בממוצע, 20 ± 5 ימים לאמן חולדות בסיסית, ו 25% של בעלי חיים אינם יכולים לעבור הכשרה על הפעילות. לתרום זמן הכשרה היא העובדה כי אנחנו לא בחרנו באופן טבעי נכון-העדפה חולדות אך במקום לאלץ את כל החיות כדי להשתמש את כפותיהם נכון כמו שכיחה אצל רוב מבחני להשיג. לא ניסינו באמצעות שמאל-העדפה חולדות, אבל זה יהיה אדם מעניין גישוש תחילה לזהות כפת העדפה, ואז רכבת הכפה דומיננטי. כדי להכיל את זה, אנחנו צריכים להפוך את הכיוון של הדלתות כך הצמצם הוא הפוך; ניתן בקלות לבצע זאת.
לעומת פעילויות מסורתיות כמו איב או גלולה אחת להגיע, הפעילות גבון באופן כמותי ואובייקטיבי אמצעים להגיע forelimb. זה מראה רגישות לחבלה חמורה (קורטיקליים הנגע) ופציעה עדין (pyramidotomy), ניתן לשנות את שגרת האימונים בהתאם לחומרת המודל פציעה. כי זה חצי אוטומטיים, הפעילות מאפשרת הנסיין לאמן חולדות מרובים בו זמנית, בהתאם לשלב אימונים. זה משפר באופן משמעותי את היעילות והתפוקה עכברוש של הנסיין. המשימה היא לשחזור בין חולדות ואמין. על-ידי יצירת מדריך לפתרון בעיות (איור 2) עבור ניסויים להפנות במהלך פרוטוקול אימונים, לנו יש סטנדרטית מספר התנהגויות לא נכונים, כמו גם פתרונות כדי לתקן אותם. לבסוף, המשימה מציע אמצעי אינטואיטיבי לנתח כמויות גדולות של נתונים ונותן הנסיין היכולת להתעמק יותר עמוק קינטיקה של גבון.
בעתיד, אנו תשתמש הפעילות גבון חצי אוטומטיות כפלטפורמה כדי להעריך את סוג מנה, העיתוי של שיקום. המעבדה שלנו מעוניינת ההשפעות של גירוי על שיפור תפקודי לאחר פציעה. בנוסף, אנו מעונינים כמה טיפולים אשר לעורר עצבית לתקן או לשפר הולכה עצבית, תקשורת יכולים להשפיע על שיקום. גם אין לנו עניין שינוי הפעילות כך שיהיה תואם אלקטרופיזיולוגיה, כך נוכל ללמוד למידה מוטורית; חולדות עם הראשכמוסות באופן שגרתי לבצע את המשימה, הוספת קומוטטור הקלטה או גירוי יהיה פשוט לעשות. הפעילות, כפי שתואר, הוא על חולדות, אך ישנם גם מעבדות ניסויים בעזרת עכברים עבור הפעילות. באופן כללי, משימה זו יכול לשמש להערכת תפקוד forelimb אצל מכרסמים במגוון רחב של מודלים פציעה מצבי מחלה, בתורו, להערכת אסטרטגיות שיקומית. לנוע קדימה, שאנו נמשיך לשפר את הפעילות עם ליטושים כדי לעזור להפחית התנהגויות שגוי וכן לשפר את קצב רכישת פעילות וזמן ההכשרה.
Rennaker ד ר ד ר סלואן הבעלים של Vulintus בע מ, המייצרת הציוד בפרסום זה בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. שאין ניגודי אינטרסים הכריז למחברים אחרים.
מחקריו זכו למימון מחקר זה NIH-NINDS R03 NS091737.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Base Cage - Rat Model | Vulintus | MotoTrak Rat System | N/A |
Controller | Vulintus | MotoTrak Rat System | N/A |
Behavior Module | Vulintus | MotoTrak Rat System | Supination Task, Methacrylate Dual Stop Knobs |
Pellet Dispenser - 45mg | Vulintus | MotoTrak Rat System | N/A |
Autopositioner | Vulintus | MotoTrak Rat System | N/A |
45 mg, Chocolate Flavor, 50,000/Box | Bio-Serv | F0299 | N/A |
HP Z230 Tower WorkStation | HP | N/A | Intel Xeon CPU E3-1225 v3 @ 3.20 GHz, 16GB RAM, 1TB HDD. Min Requirements: 8GB RAM, Multi-Core Processor |
Dexterity | Burke Medical Research Institute | Matlab software for data analysis | |
Enviropak | WF Fisher and Son | N/A | N/A |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved