בידוד של תאים רגנרטיביים שמקורם בשומן לטיפול בבעיות זיקפה בעקבות כריתת ערמונית רדיקלית

Summary

גילוי מדויק של שיטות ופרוטוקולים הוא חיוני לקליטה בקנה מידה גדול של טיפולים בתאי גזע. כאן אנו מציגים פרוטוקול לבידוד תאים רגנרטיביים שמקורם בשומן, המשמשים להזרקה תוך-תאית אחת כטיפול בבעיות זיקפה (ED) בעקבות כריתת ערמונית רדיקלית (RP).

Abstract

תאי גזע משמשים בתחומי מחקר רבים ברפואה רגנרטיבית, בין השאר משום שטיפולים אלה יכולים להיות מרפאים ולא סימפטומטיים. ניתן לקבל תאי גזע מרקמות שונות ותוארו מספר שיטות לבידוד. השיטה המוצגת לבידוד של תאים רגנרטיביים שמקורם בשומן (ADRCs) יכולה לשמש בתחומים טיפוליים רבים מכיוון שהשיטה היא הליך כללי, ולכן אינה מוגבלת לטיפול בבעיות זיקפה (ED). ED היא תופעת לוואי נפוצה וחמורה לכריתת ערמונית רדיקלית (RP) שכן ED לעתים קרובות אינו מטופל היטב עם טיפול קונבנציונלי. השימוש ב-ADRC's כטיפול ב-ED עורר עניין רב בשל התוצאות החיוביות הראשוניות לאחר הזרקה אחת של תאים לתוך הקורפורה cavernosum. השיטה המשמשת לבידוד של ADRC's היא תהליך פשוט, אוטומטי, הניתן לשחזור ומבטיח מוצר אחיד. יתר על כן, העקרות של המוצר המבודד מובטחת מכיוון שהתהליך כולו מתרחש במערכת סגורה. חשוב למזער את הסיכון לזיהום וזיהום מכיוון שתאי הגזע משמשים להזרקה בבני אדם. ההליך כולו יכול להיעשות תוך 2.5-3.5 שעות ואינו דורש מעבדה מסווגת אשר מבטלת את הצורך במשלוח רקמות לאתר מחוץ לאתר. עם זאת, להליך יש כמה מגבלות שכן הכמות המינימלית של lipoaspirate מנוקז עבור מכשיר הבידוד לתפקד היא 100 גרם.

Introduction

לתאי גזע יש את היכולת להתמיין לסוגי תאים שונים, והם מפרישים גורמי פרקרין שנחשבים כמעודדים את תהליך הריפוי ברקמה פגומה 1,2,3,4. הם, אם כן, אטרקטיביים בתחום הרפואה הרגנרטיבית, משום שהם יכולים לייצג טיפול מרפא אפשרי.

כריתת ערמונית רדיקלית (RP) היא הטיפול המרפא הזהוב לחולים עם סרטן ערמונית מקומי בסיכון נמוך/בינוני ותוחלת חיים > 10 שנים. מטרת הניתוח היא מיגור הסרטן, אך יש לו מספר תופעות לוואי. השכיחות של בריחת שתן לאחר כריתת ערמונית נעה בין 2-60% ותפקוד לקוי של זיקפה (ED) נחווה על ידי 20-90% מהמטופלים⁵. טכניקה חוסכת עצבים היא אופציה אצל חלק מהחולים (ציון גליסון < 7, סיכון נמוך למחלה חוץ-קפסולרית)⁵. טכניקה זו חוסכת את העצבים האחראים על הזקפה, אך למרות שזה אפשרי, חולים רבים עדיין מדווחים על ED לאחר הניתוח.

אפשרויות הטיפול בשיקום הפין לאחר RP מורכבות בעיקר מטיפול במעכבי PDE-5, טיפול בהזרקה או החדרה ומשאבות ואקום. תרופות המשמשות לשיקום הפין נבדלות זו מזו מבחינה פרמקולוגית, אך מנגנון הפעולה שלהן כולל הרפיה של תאי השריר החלקים במערות קורפוס. עם זאת, מטופלים רבים חווים כישלון טיפולי ולעולם אינם משיגים השפעה של התרופה המאפשרת קיום יחסי מין⁶.

ה- ED המתרחש לאחר RP נחשב כנובע משינויים בלתי הפיכים מבחינה מבנית⁷. שינויים אלה מתרחשים ברקמת המערה וכוללים אפופטוזיס של תאי השריר והאנדותל החלקים ופיברוזיס. מנגנון הוונו-חסימתי האחראי על חלק מרכזי של הזקפה, נפגע על ידי השינויים, וכתוצאה מכך מילוי וקשיות גרועים יותר של הפין⁷.

רבים מהמטופלים מדווחים כי ל-ED שהם חווים יש השפעה שלילית על איכות חייהם⁸. הם אינם מוכנים לוותר על פעילותם המינית לאחר הניתוח, ולכן, טיפול מרפא עבור ED הוא אטרקטיבי, כאשר הטיפולים הזמינים האחרים לשיקום הפין נכשלים.

בניסויים קודמים, כולל ניסויים בבעלי חיים ובפאזה 1 קטנה בבני אדם, תאי גזע הראו תוצאות מבטיחות כטיפול חלופי ל-2,9,10,11,12 ED. התוצאות מראות כי בטוח להשתמש ב- ADRCs, וכי תפקוד הזיקפה משופר באופן משמעותי לאחר הזרקה אחת לתוך קורפורה cavernosum 2,9,10,11,12. תאים רגנרטיביים שמקורם בשומן (ADRCs) נחשבים כתומכים בהתחדשות הרקמה על ידי מנגנוני פאראקרין באמצעות שחרור הורמונים מרובים, גורמי גדילה נוירוטרופיים ואחרים, ציטוקינים ואולי גם מיקרו-רנ"א¹³. בנוסף, ADRCs מסוגלים להתמיין למספר סוגי תאים בוגרים כולל תאי שריר אנדותל וכלי דם, תאי סחוס, אוסטוציטים ונוירונים^14,15. תכונות אלה הופכות את תאי הגזע למעניינים לפיתוח טיפול חדש וקבוע עבור ED.

תאי גזע מחולקים למספר קבוצות, בעצם אלה שמקורן בעובר המוקדם (תאי גזע עובריים) ואלה מרקמה בוגרת (תאי גזע בוגרים). תאי גזע בוגרים כוללים תאי גזע מזנכימליים (MSC) שהם מולטיפוטנטיים וניתן למצוא אותם במח העצם, ברקמת השומן, בדם טבורי, בשליה ובמוך שיניים¹⁷.

קל לגשת לתאי גזע מרקמת השומן, בניגוד לתאי גזע שמקורם במח העצם. קצירת תאי גזע ממח עצם היא הליך מסוכן וכואב בהשוואה לשאיבת שומן. מספר התאים שניתן יהיה לקצור ממח העצם יהיה מוגבל, בעוד שרק מחסני רקמת השומן של המטופל קובעים את הגבול למספר התאים שניתן לקצור. ניתן, אם כן, לבודד כמות גדולה של תאי גזע מרקמת השומן ללא צורך לאחר מכן לתרבית את התאים כדי לקבל כמות משביעת רצון. התאים הרגנרטיביים שמקורם בשומן, המכונים לעתים קרובות גם שבר כלי הדם הסטרומלי (SFV), מורכבים מסוגי תאים רבים, כולל MSCs, תאי אנדותל, פריקטים, תאי מערכת החיסון ואבות^{אבותיהם 18}. כל אלה עשויים למלא תפקיד בתהליך ההתחדשות.

מטרת המחקר הנוכחי היא לחקור את ההשפעה של תאי גזע על ED לאחר RP על ידי שימוש ב-4 מ"ל של ADRCs אוטולוגיים שבודדו מרקמת שומן שזה עתה נקטפה לאחר הזרקה לתוך קורפורה cavernosum.

Protocol

כל השיטות המתוארות בפרוטוקול אושרו על ידי ועדת האתיקה הלאומית הדנית (מס '37054), רשות הבריאות והתרופות הדנית (EUDRA-CT מספר 2013-004220-11) והסוכנות הדנית להגנה על נתונים (2008-58-0035). המחקר נרשם בכתובת ClinicalTrials.gov (NCT02240823). המחקר בוצע בהתאם להצהרת הלסינקי המנוטרת על ידי יחידת הפרקטיקה הקלינית הטובה (GCP) בבית החולים האוניברסיטאי אודנזה. הכנת ADRC בוצעה במפעל רקמות מורשה לטיפול ברקמות ותאים אנושיים בבית החולים האוניברסיטאי אודנזה (רשות הבריאות והתרופות הדנית, אישור מס '29035).

1. גיוס מטופלים/משתתפים

1. כדי להשתתף בניסוי לגייס חולים העומדים בקריטריונים הבאים להכללה.
   1. גייסו מטופלים מעל גיל 18, פעילים מינית לפני RP ואינם נגועים במחלות המועברות במגע מיני, למשל, זיהום בנגיף הכשל החיסוני האנושי, עגבת או הפטיטיס.
   2. ודא שהם סובלים מבעיות זיקפה לאחר RP אשר בוצע עקב סרטן הערמונית.
      הערה: במחקר זה, המטופלים נרשמו למחקר 5-18 חודשים לאחר ה- RP ונכללו ללא קשר לשיטת הניתוח: פתוח / רובוטי בסיוע או מורט עצבים / לא עצבים.
   3. ודא שהערך של אנטיגן ספציפי לערמונית (PSA) היה צריך להיות בלתי ניתן לגילוי במעקב הקליני לאחר ה- RP.
   4. ודא שהמטופלים היו פעילים מינית לפני ה- RP, ועדיין הביעו רצון להישאר פעילים מינית לאחר ה- RP. ודא כי התערבות פרמקולוגית עם מעכב פוספודיאסטראז מסוג 5 (מעכב PDE5 ) או אנלוגי סינתטי של פרוסטגלנדין E1 (PGE1) נוסו לפני ההשתתפות ונחשבו לא מספיקים.
   5. יתר על כן, ודא כי החולים יש מספיק שומן תת עורי על הבטן או הירך.
2. להוציא חולים מהניסוי, אם היו אירועים חמורים תחת ההרדמה במהלך RP או אם הם טופלו עם נוגדי קרישה.

2. שאיבת שומן

הערה: שאיבת שומן היא פעולה המסירה שומן או ליפוציטים מהאזור התת עורי. חלק זה של הפרוטוקול מבוצע כשאיבת שומן סטנדרטית וההליך מבוצע בתנאים סטריליים בחדר ניתוח. כל המכשירים המשמשים במסגרת ההליך חייבים להיות סטריליים ועל המנתח ללבוש קרצוף, שמלה כירורגית סטרילית, כפפות סטריליות, מסכה כירורגית וכובע.

1. להרדים את החולה.
   1. ודא כי החולה נמצא בהרדמה כללית במהלך ההליך, וחלק זה מבוצע על ידי רופא מרדים.
   2. יש לחטא את עור הבטן ושק האשכים עם כלורהקסידין 0.5% (רוח קלוהרקסידין, 96% אתנול תרופתי כלורהקסידין דיגלוקונט 77% W/W = 83% v/v). השתמש בסמן כירורגי כדי לצייר את האזורים על הבטן אם שאיבת שומן עומדת להתבצע. האזור יהיה בדרך כלל האזור שבין הסימפיזה לטבור.
2. בצע שני חתכים ברוחב 6 מ"מ בעור הבטן עם אזמל (מספר 11). מקם את החתכים בצורה סימטרית ולרוחבית מהאזור המוגבר של שאיבת שומן.
   1. שים מעט חומר סיכה כזה ג'לי נפט על החתכים, כדי לוודא שצינורית הסינון גולשת פנימה והחוצה מהחתכים בקלות במהלך שאיבת השומן.
3. הציגו צינורית חדירה בגודל 14 G דרך החתכים בעור. הזריקו תמיסת קלינס שונה באופן תת עורי באזורים המסומנים המקבילים לפני העור. להזריק כל כך הרבה מהתמיסה שהרקמה הממוקדת הופכת נפוחה ומוצקת, או מתפוררת.
   הערה: תמיסת Kleins שעברה שינוי מורכבת מתמיסה של 1,000 מ"ל רינגרים לקטט ו-1 מ"ג אדרנלין (אפינפרין (1:1,000,000)). אל תאשר הרדמה מקומית לפתרון, מכיוון שהיא עלולה להשפיע לרעה על ה- ADRCs.
   1. הזריקו נפח של תמיסת קלינס שונה התואמת את היחס 1:1 לרקמה השומן.
   2. המתן במשך 10 דקות כדי למקסם את השפעת האדרנלין ולהפחית את כמות הדם ברקמת השומן שנקטפה.
4. בצע שאיבת שומן סטנדרטית באמצעות שאיבת שומן בעירוי סילון כדי לקצור 200-300 מ"ל של רקמת שומן. השתמש בצינוריות קהות שהן חלולות, שאליהן משולבים צינור אינפוזיה וזרבובית. חברו את הצינורית למכשיר יניקה לשאיבת שומן.
   הערה: עירוי מים רציף בצורת מאוורר משחרר את רקמת השומן לרסיסים שניתן לשאוב בקלות דרך הפתח בצינורית.
   1. הציגו מזרק 3 מ"מ עם קצה קהה דרך החתכים על הבטן
5. אספו את רקמת השומן באספן ליפו כדי לשמר את הליפואספיראט בסביבה סטרילית. ה lipoaspirate יתחיל להיפרד משלב המים.
6. השתמשו במזרקים סטריליים של 50 מ"ל כדי למצוץ את ליפו-אספן ה lipoaspirate מאספן הלופו.
   1. ממזערים את נפח המים הנשאבים במזרקים ומבריגים תקע בקצה המזרקים כדי לשמור על רקמת השומן סטרילית.
7. מניחים מזרקים עם קצה כלפי מטה בשקית ניילון סטרילית כדי להתחיל בהפרדת ליפו-אספיראט משלב המים. מניחים את השקית במיכל סטרילי עדיין כשהקצוות פונים כלפי מטה כדי להמשיך בהפרדה.
   1. מכסים את המיכל עם וילון סטרילי כדי לאבטח את הסביבה הסטרילית במהלך ההובלה.
      הערה: על פי מדריך המשתמש של המכונה המשמשת לבידוד, ניתן לאחסן את lipoaspirate עד למקסימום של 4 שעות לפני בידוד של ADRCs עם זאת, אנו תמיד מעבדים אותו מיד.
8. סגור את החתכים בעור עם חומר התפר המועדף על המנתחים. מניחים בגד דחיסה, קלסר בטן, סביב הבטן כדי להפחית את הבצקת שלאחר הניתוח.
9. צור בלוק פין על ידי הזרקת 20 מ"ל bupivacaine 5 מ"ג / מ"ל המכיל 5 מיקרוגרם של אדרנלין.
   1. השתמשו במזרק של 20 מ"ל והגישו בקשה עם מחט של 23 גרם, באורך 1/4 אינץ'.
   2. יש למרוח 5 מ"ל של בופיוואקאין בכל רביע בתת-קוטים.
   3. הזריקו את הבופיוואקאין בשני אתרים, האחד ממוקם בגחון והשני באופן דורסני. מכניסים את המחט לכל אורכה ברקמה התת-עורית ומכוונים את המחט לרוחב ימינה ומזריקים את ההרדמה כשהמחט נסוגה לאחור. חזרו על ההזרקה המכוונת את המחט שמאלה.
      הערה: כעת ניתן להעיר את המטופל מההרדמה הכללית על ידי הרופא המרדים.

3. בידוד של ADRCs

הערה: תהליך הבידוד של ADRCs מתבצע כמתואר בפירוט במדריך למשתמש הבא אחר ההתקן (ראה טבלת חומרים). חשוב כי ההליך מבוצע בתנאים סטריליים כדי להבטיח כי lipoaspirate אינו חשוף למזהמים כלשהם במהלך טיהור של ADRCs. הזמן שלוקח לבידוד של ADRCs תלוי בנפח של lipoaspirate, אבל ההליך כולו ייקח בערך 2.5 שעות באמצעות המכשיר החצי אוטומטי כפי שמתואר כאן.

1. הניחו את כל החומרים המתכלים והאנזימים באופן אספטי על שולחן מכוסה במגבת כירורגית חד פעמית סטרילית.
   הערה: ערכת פרוצדורה מכילה את כל החומרים המתכלים והאנזימים הדרושים לבידוד של ADRCs ממטופל אחד. מלבד זאת, שלוש שקיות עירוי של 37-39 מעלות צלצלים מניקים חייבות להיות זמינות יחד עם בגדים סטריליים, כפפות ומגבות ואתנול לחיטוי. שימו לב לכל המספרים הרבים של חומרים מתכלים ואנזימים וגם את הטמפרטורה של הצלצולים המניקים, כאשר הם מחוברים למערכת.
   1. נגבו את המכשיר באמצעות אתנול ופעלו לפי הוראות היצרן
   2. טענו את הסט המתכלה על המכשיר וחברו למערכת שקית של מצלצלים מניקים.
   3. בצע את סדרת הבדיקות החצי אוטומטיות (בדיקת מערכת ובדיקת דליפה) לפני הוספת lipoaspirate.
2. תנו לליפואספיראט לעמוד בצינורות של 50 מ"ל בזמן שהצעדים ב-3.1 מבוצעים. זה יאפשר לשומן להיפרד מהשלב הנוזלי. שים לב לכמות הכוללת (במ"ל) של רקמת השומן והשתמש בה כדי להבטיח שכמות השומן הטעון תהיה בטווח קיבולת המכשיר.
3. טען את הרקמה כאשר המכשיר התבקש לעשות זאת. המכונה תנקז כעת את הנוזל העודף ותשקול את כמות רקמת השומן הטעונה לפני שהיא נשטפת עם מצלצלים מניקים.
   1. כאשר הרקמה נשטפה ונוקזה שוב, חברו שקית עירוי חדשה עם 37-39 מעלות צלצולים מניקים כאשר תתבקשו על ידי המכונה.
   2. שחזרו את האנזים הזמין מסחרית המכיל תערובת קולגן ופרוטאז ב-5 מ"ל רינגרים מניקים (בקבוקון אחד של אנזים מספיק לכמויות שומן של עד 270 מ"ל).
   3. ודא שהמכשיר מציג את כמות האנזים (בהתבסס על משקל הרקמה) כדי להזריק לתוך המכל עם רקמת השומן. לאחר הזרקת, העיכול האנזימטי המתבצע תחת תסיסה יימשך כ -20 דקות.
4. לאחר עיכול הרקמות, תנו למתסיס לעצור ולבדוק שהתכולה מופרדת לשני שלבים: פאזה צהובה המכילה שומנים עליונים ושכבה ורודה תחתונה המכילה את ה-ADRCs. תנו לשכבה האחרונה להתנקז לתוך תא עיבוד התאים (שנכנס לצנטריפוגה המובנית של המכשיר) של הסט המתכלה, תוך השארת שכבת השומנים מאחור.
5. תן ל-ADRCs להתרכז בתא עיבוד התאים במהלך סבבים מרובים של צנטריפוגה. כעת הוסיפו 10 מ"ל של Intravase (מכיל DNase, המסייע למנוע גושים בהשעיית ה-ADRC הסופית) המשוחזרת ב-Disabilited Ringers. התגובה האנזימטית נמשכת 10 דקות ולאחר מכן ה- ADRCs נשטפים.
   הערה: שלב זה הוא אוטומטי לחלוטין, והמכונה תודיע כאשר התהליך יסתיים.
6. כאשר הבידוד של ADRCs הושלם, החייאת התאים ב -5 מ"ל של רינגר לקטט. שאפו את התמיסה למזרק של 5 מ"ל.
7. הרכיבו נקבת לואר-לוק תלת-כיוונית על מזרק 5 מ"ל המכיל את ה-ADRCs, ושאפו 4 מ"ל של ADRCs למזרק סטרילי נוסף של 5 מ"ל.
8. העבר את 1 מ"ל האחרונים למזרק של 1 מ"ל. השתמש ב-1 מ"ל זה לאפיון ADRC, למשל, ספירת תאים, כדאיות תאים, ניתוח סמני פני השטח לפי ציטומטריית זרימה ויכולת התמיינות ADRC.
9. יש ללבוש מחט 25 גרם על מזרק 5 מ"ל המכיל את 4 מ"ל של ADRC לפני שהוא ארוז בוילון סטרילי. השתמש ב- ADRCs להזרקה למושתל. במקרה זה, הפתרון של ADRCs יכיל בממוצע 8.4-32.7 מיליון תאים.

4. השתלת ה-ADRCs לתוך קורפורה cavernosum

הערה: זהו הליך סטרילי. כל המכשירים חייבים להיות סטריליים, והאדם המזריק את התמיסה המכילה את תאי הגזע לתוך קורפורה cavernosum חייב ללבוש כפפות סטריליות. החולה ער במהלך הליך זה ויקבל תאי גזע משלו. ה-ADRCs מוזרקים מבלי לספור את התאים לפני ההזרקה.

1. שמור על הפתרון של ADRCs הומוגני על ידי הטיית המזרק בעדינות עד שהוא מוזרק לתוך cavernosum corpora.
2. מניחים עטיפת צמצם על הפין. הניחו חוסם עורקים בשורש הפין באמצעות לולאת כלי סיליקון. מהדקים את הלולאה ומהדקים אותה עם מלקחיים מעוקלים. הפוך את חוסם העורקים חזק מספיק כדי לעצור את זרימת הדם מהפין.
3. השתמש בשתי החלפות חיטוי כדי לחטא את עור הפין באתר ההזרקה (אתר רוחבי של קורפורה cavernosum). הזריקו 1 מ"ל של התמיסה המכילה ADRCs, בזווית ישירה לתוך קורפורה cavernosum בצד ימין בשני מקומות שונים, לחזור על צעד זה לאחר מכן בקורפורה השמאלי cavernosum. הנפח הכולל של ADRCs מוזרקים הוא 4 מ"ל.
4. המתן 30 דקות ולאחר מכן הסר את חוסם העורקים.
5. שחררו את המטופל לאחר שעתיים של תצפית לאחר הזרקת ADRCs, כדי להבטיח שהחולה יתאושש היטב לאחר ההרדמה.

5. טיפול לאחר הניתוח

1. ממליץ למטופל לא לבצע כל ביצוע פיזי שיכול להעלות את לחץ הדם בשבוע הראשון, כדי למנוע התפתחות של המטומות.
2. ממליץ למטופל ללבוש את קלסר הבטן במשך 24 שעות במשך 14 הימים הראשונים לאחר הניתוח ולאחר מכן במשך 14 יום במהלך היום.
3. טפל בכאבים פוסט-כירורגיים עם פרצטמול פומי (למשל, אקמול; 1,000 מ"ג, 4 פעמים ביום) ונוגדי דלקת דרך הפה (למשל, איבופרופן; 400 מ"ג 3 פעמים ביום).

תוצאות

ההליך שהוצג שימש לניסוי קליני שלב 1 עם תווית פתוחה הכולל 21 מטופלים^{בני 19}. נקודת הסיום העיקרית של הניסוי הייתה בטיחות השימוש ב-ADRC's בבני אדם ונקודת הקצה המשנית הייתה ההשפעה של ADRC's על פונקציית הזיקפה.

21 גברים נכללו בניסוי עם גיל ממוצע של 60 שנה (טווח 46-69) וזקפה רגילה וחיי מין פעילים לפני ה- RP עקב סרטן הערמונית. כולם סבלו מ- ED לאחר ה- RP, ללא סימני החלמה מתרופות זמינות לשיקום הפין. שישה גברים סבלו מבריחת שתן כתופעת לוואי ל-RP. כל הגברים קיבלו זריקה תוך-מוחית אחת של ADRC's המבודדים בשיטה המוצגת.

כל 21 הגברים היו במעקב עם 4 ביקורים במרפאת החוץ ב-1,3,6 ו-12 חודשים לאחר ההזרקה. התפקוד המיני הוערך באמצעות שאלונים מאומתים – המדד הבינלאומי של תפקוד הזיקפה-5 (IIEF-5) וציון קשיות הזקפה (EHS) (מצורף כנספחים).

לא התרחשו אירועים חמורים בזמן התצפית. שמונה גברים דיווחו על אדמומיות חולפת ונפיחות באתרי ההזרקה, שלושה דיווחו על תגובה באזור הפין. דווח על שמונה אירועים קלים הפיכים שחוו הקשורים לשאיבת שומן, כגון אי נוחות קלה בבטן והמטומות בטן קלות. אף מטופל לא דיווח על אי נוחות במעקב של חודש אחד. שמונה מתוך 15 (53%) בקבוצה היבשתית דיווחו שתפקוד הזיקפה הספיק לקיום יחסי מין לאחר 12 חודשים. הקבוצה של 6 גברים חסרי שליטה לא הראתה כל שיפור בתפקוד הזיקפה.

	יבשת	בריחת שתן
כולל מטופלים	15	6
השפעה משמעותית	8	0

טבלה 1: הטבלה מציגה את ההבדלים בהשפעה המשמעותית של הטיפול בין חולים יבשתיים לחולים בריחת שתן.

Discussion

ההליך המוצג לבידוד ADRCs אינו מוגבל לשימוש רק לטיפול ב- ED, אלא ניתן להשתמש בו בצורות רבות אחרות של טיפול וניסויים. הניסוי שלנו הראה כי ADRCs אוטולוגיים ומבודדים טריים בטוחים לשימוש, והטיפול נסבל היטב במעקב של 12 חודשים.

לפני השימוש בהליך יש כמה שיקולים שיש לעשות. החיסרון של הליך זה הוא כי המטופל חייב להיות תחת הרדמה כללית במהלך שאיבת שומן. ניתן לבצע שאיבת שומן בהרדמה מקומית, אך ניסוי קודם הראה כי שילוב של הרדמה מקומית ואדרנלין עשוי להשפיע לרעה על צמיחת התאים של פיברובלסטים²⁰. הסיכון להיות תחת הרדמה כללית הוא בדרך כלל נמוך, אבל תוצאה שלילית עדיין נראה. יש לקחת בחשבון סיכון זה כאשר המטופלים נבחרים לטיפול. שאיבת שומן היא הליך כירורגי ולכן תמיד תישא בסיכון לסיבוכים. כמו בכל ההליכים הכירורגיים האחרים, קיים סיכון לדימום לאחר הניתוח וכתוצאה מכך להיווצרות המטומות וסיכון לזיהום. חלק מהמטופלים שלנו דיווחו גם על רגישות מופחתת חולפת של עור הבטן. סיבוך מיידי לשאיבת שומן הוא דימום. זה ידוע כי חולים מסתכנים מקבלים סיבוכים מערכתיים כאשר כמויות גדולות של רקמה מוסרת. שאיבת השומן בהליך זה הייתה קטנה יחסית ולכן לא נחשבה לגורם סיכון.

סיבוכים להזרקת תאים מדווחים כאדמומיות חולפת, רגישות והמטומות.

ההתקן המשמש לבידוד של ה- ADRCs, נבחר מכיוון שהמערכת מאושרת על ידי CE. בדנמרק, חובה להשתמש בציוד שאושר על ידי CE מכיוון שהרשויות מסווגות טיפול בתאי גזע כניסוי לבדיקת סמים, כאשר ה- ADRC משמש להזרקה בבני אדם.

למכשיר יש יתרונות כגון שכל ההליך מתוקנן ומבוצע בסביבה סטרילית סגורה ללא צורך במעבדה מסווגת ביותר. הסיכון לזיהום הוא, אם כן, מופחת. זה מבטיח כי ההליך הוא אחיד וניתן לשחזור, וכי איכות המוצר הסופי הוא תמיד זהה בכל פעם (עם זאת, זה גם תלוי באיכות של רקמת קלט). ביצוע הבידוד במכשיר הוא קל ואינו דורש מפעילים משכילים במיוחד.

מגבלה אחת של המכשיר היא שהקלט המינימלי למכונה הוא 100 גרם ליפואספיראט מרוקן. מכיוון ששאיבת שומן מסתיימת לחלוטין לפני תחילת עיבוד התא (ובמקרה שלנו, במיקום אחר, לא ב- OR) מניסיוננו, זה ידרוש שכמות lipoaspirate תהיה לפחות 125 מ"ל באמצעות המדידה הגסה של מזרקי 50 מ"ל. אחרת יש סיכון שלא יהיה מספיק חומר למכונה להמשיך איתו. כמו כן, שימוש במגבלת הקצה העליונה (הקלט המרבי הוא 425 מ"ל) יגרום להליך בידוד ארוך מאוד.

נראה כי לתאי גזע בוגרים הן מרקמת השומן והן ממח העצם יש יכולת להתחדשות עצמית והתמיינות כמו תאי גזע עובריים. אחד היתרונות של ADRCs על פני תאי גזע המופואיטיים הוא תפוקה גבוהה פי 100-500 לכל נפח רקמה בהשוואה למח עצם^21,22, ולכן, ADRCs אינם צריכים להיות בתרבית. יתר על כן, תאי גזע המופואיטיים קשים וכואבים יותר לקטיף מהחולה מאשר רקמת שומן. במצבים רבים, רקמת השומן היא רק מוצר פסולת לאחר הניתוח. ניתן תרבית תאי גזע כדי לתת תשואה גבוהה יותר המתאימה לאנגיוגנזה, אולם ל-ADRC's המבודדים הטריים עשוי להיות פוטנציאל אנגיוגני גבוה יותר מאשר^{לתרבית 23}.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Liposuction
Abdominal Binder	Dale		Size depent of the patient
Adhessive OP-towel	Mölnlycke Health Care	906677	90x75 cm
Adrenalin 1 mg/ml	Amgros I/s	74 44 23	1 ml
Basic OP supplies	Mölnlycke Health Care	97010873-07
Carbon Steel blade 11	Swann-Morton
Chlorhixidine Ethanol	Faarborg Pharma	5% colored
Disposable set Lipocollector 3	Human Med	670200
Extension hoses	Extrudan		5.8/8.3 mm, Ch 25, 3,5 M long
Gaze Rags	Barrier	175201	30x45 cm
Jelonet	Smith and Nephew Medical Ltd	90509225	10 x 10 cm
Marcaine 5 mg/ml + Adrenaline 5 micrigram	Astra Zeneca		20 mL
Mesorb Bandage	Mölnlycke Health Care	677001	10x13 cm
Microlance	Becton Dickinson	304622	18 G + 23 G
Monocryl suture	Ethicon		04:00
Ringer-lactat	Fresinus Kabi
Sterile gloves	Gammex	330052065
Surgical Gown	Mölnlycke Health Care	690103-01
Surgical Marker	Richard-Allan
Surgical Mask	3M
Syringe	Codan Medical	6,28,402	50/60 ml cath tip
Syringe	Becton Dickinson	700016181	1 ml
WAL- Applikator for cannulae 25/30 cm	Human Med	REF 500001
Isolation of ADRC's
1 ml Syringe	Becton Dickinson	REF 303172
3 way stopcock	One Med	REF 10554-01
Adhesive OP-towel	Mölnlycke Health Care AB	REF 906677	90x75 cm
Cytori Celution 800IV device	Cytori
Desinfection swaps	Mediq Danmark	3340010
Microlance	Becton Dickinson		25G (0,5*25 mm)
Nitril Gloves	Abena		Powder free
OR drape Sheet, 2 layers	Lohmann & Rauscher	REF 33005
Ringers Lactate	Fresinus Kabi	06756 (DK)
Sterile gloves
Sterile gown
Supplemental kit for Cytori Celution 800IV devise	Cytori
Termometer	Thomas Scientific		traceable
Injection of ADRC's
Aperture drape	One Med	REF1565-01	75*90 cm
Desinfection swap	Mediq Danmark	3340010
Pean	Leibinger	32-01257
Silicone Vessel Loop	Purple Surgical	REF PS3203
Sterile gloves	Sempermed		Or Use your favorite