A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

מטריצת הטחול הדה-צלולרית (DSM) טומנת בחובה יישומים מבטיחים בתחום הנדסת רקמת הכבד. פרוטוקול זה מתאר את ההליך להכנת DSM של חולדות, הכולל קצירת טחול של חולדות, דה-צלולריזציה שלהם באמצעות זילוח והערכת ה-DSM המתקבל כדי לאשר את מאפייניו.

Abstract

השתלת כבד היא הטיפול העיקרי במחלת כבד סופנית. עם זאת, המחסור והאיכות הלקויה של איברים מתורמים מחייבים פיתוח טיפולים אלטרנטיביים. כבדים ביו-מלאכותיים (BALs) המשתמשים במטריצת כבד דה-צלולרית (DLM) התגלו כפתרונות מבטיחים. עם זאת, מיקור DLM מתאים נותר מאתגר. השימוש במטריצת טחול דה-צלולרית (DSM) נחקר כבסיס ל-BALs, ומציע חלופה זמינה. במחקר זה, טחול חולדות נקצר ועבר דה-צלולריזציה באמצעות שילוב של מחזורי הקפאה-הפשרה וזילוח עם ריאגנטים של דה-צלולריזציה. הפרוטוקול שימר את המיקרו-מבנים והרכיבים של המטריצה החוץ תאית (ECM) בתוך ה-DSM. תהליך הדה-צלולריזציה המלא ארך כ-11 שעות, והתוצאה הייתה ECM שלם בתוך ה-DSM. ניתוח היסטולוגי אישר את הסרת רכיבי התא תוך שמירה על מבנה ECM והרכבו. הפרוטוקול המוצג מספק שיטה מקיפה להשגת DSM, ומציע יישומים פוטנציאליים בהנדסת רקמות כבד ותרפיה תאית. ממצאים אלה תורמים לפיתוח גישות חלופיות לטיפול במחלת כבד סופנית.

Introduction

השתלת כבד נותרה הטיפול הסופי היחיד למחלת כבד סופנית 1,2,3. עם זאת, המחסור הקריטי והאיכות הירודה של תרומת איברים הגבירו את הצורך בטיפולים אלטרנטיביים4. בתחום הרפואה הרגנרטיבית, כבדים ביו-מלאכותיים (BALs) המשתמשים במטריצת כבד דה-צלולרית (DLM) התגלו כפתרונות מבטיחים 5,6,7. ה- DLM משמר את מבנה הכבד המקורי, כולל הרשת המיקרו-וסקולרית המורכבת שלו ורכיבי ה- ECM, ומציע פיגום ליצירת BAL להשתלה שעשויה להקל על מחלות כבד.

למרות ההבטחה, אימוץ טכנ....

Protocol

מחקר זה אושר על ידי הוועדה לאתיקה של ניסויים בבעלי חיים של אוניברסיטת שיאן ג'יאוטונג ובוצע בהתאם להנחיות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה.

1. קציר טחול

  1. השתמשו בחולדות Sprague Dawley זכרים במשקל 250-280 גרם. שכן את החולדות בחדרים עם טמפרטורה ולחות מבוקרים, וספק להן מזון ומים עד ללידה, למעט צום לפני ניתוח.
  2. תת עורית להזריק buprenorphine (0.05 מ"ל / ק"ג) כמו משכך כאבים 1 שעה לפני הניתוח. מרדימים את החולדה בשאיפת איזופלורן. יש להשתמש בקצב זרימה של 1.5 ליטר/דקה של 5% איזופלורן להרדמה אינדוקציה בקופסת פרספקס ולשמור על הרדמה עם קצב זרימה של 0.6-0.8 ליטר/דקה של 2% איזופלורן דרך מסכה. אשר את עומק ההרדמה על ידי צ....

תוצאות

פרוטוקול זה השתמש בשילוב של מחזורי הקפאה-הפשרה חוזרים ונשנים וזילוח עם ריאגנטים של דה-צלולריזציה לדה-צלולריזציה של טחול חולדה. דה-צלולריזציה מלאה של הטחול הושגה תוך כ-11 שעות (איור 2A). במהלך תהליך הדה-צלולריזציה, צבע הטחול השתנה בהדרגה מאדום עמוק לאדום מנומר ובהיר, ובסופו של .......

Discussion

ה- BALs מייצגים גישה יעילה לטיפול במחלת כבד סופנית, במיוחד במקרים בהם השתלת כבד מעוכבת על ידי המחסור הנוכחי באיברים תורמים6. אפשרות מבטיחה ליצירת BALs היא שימוש ב- DLM, המשמר את ה- ECM הטבעי של הכבד המקומי ואת מבנה כלי הדם. עם זאת, המחסור ב-DLM אנושי והסיכונים הפוטנציאליים של זיהום ואימונ?.......

Disclosures

המחברים לא הצהירו על ניגוד עניינים.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82000624), תוכנית המחקר הבסיסית במדעי הטבע של שאאנשי (2022JQ-899 &; 2021JM-268), תוכנית התמיכה ביכולת חדשנות במחוז שאאנשי (2023KJXX-030), תוכנית מפתח מו"פ של מחוז שאאנשי פרויקט מפתח משותף של האוניברסיטה (2021GXLH-Z-047), הקרן המוסדית של בית החולים המסונף הראשון של אוניברסיטת שיאן ג'יאוטונג (2021HL-42 ו- 2021HL-21).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Anesthesia MachineHarvard Apparatustabletopanimal anesthesia
bubble trapShandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd.pore diameter: 5 μmprevent air bubbles
BuprenorphineTIPR Pharmaceutical Responsible Co.,Ltdan analgesic
Hemostatic ForcepsShanghai Medical Instruments  Co., LtdJ31020surgical tool
Heparinized SalineSPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co., LTD prevent the formation of thrombosis 
IsofluraneRWD life Science Co.anesthetic:for the induction and maintenanceof anesthesia
Penicillin-Streptomycin Beyotime Biotechnology Co., Ltd.C0222antibiotics in vitro to prevent microbial contamination
Peristaltic PumpBaoding Longer Precision Pump Co., Ltd.BT100-1L
Phosphate-Buffered SalineShanghai Titan Scientific Co., Ltd.4481228phosphoric acid buffer salt solution
Silicone TubeBaoding Longer Precision Pump Co., Ltd.2.4×0.8mm
Silk SutureYangzhou Jinhuan Medical Instrument Factory6-0 and 3-0ligate blood vessels
Sodium Dodecyl SulfateShanghai Titan Scientific Co., Ltd.151-21-3ionic detergent, dissolves both cell and nuclear membranes
Syringe PumpShenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., LtdBeneFusion SP5intravenous infusion
Triton X-100Shanghai Titan Scientific Co., Ltd.9002-93-1non-ionic detergent, disrupts lipid-lipid, lipid-protein, and DNA-protein interactions
Venous CatheterB. Braun Company24Ginserting the spleen artery

References

  1. Xu, X. State of the art and perspectives in liver transplantation. Hepatobiliary Pancreat Dis Int. 22 (1), 1-3 (2023).
  2. Hautz, T., et al. Immune cell dynamics deconvoluted by single-ce....

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE204

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved