JoVE Logo

Sign In

אלקטרופורזה נימית (CE)

Overview

מקור: המעבדה של ד"ר .B ג'יל וטון - אוניברסיטת וירג'יניה

אלקטרופורזה נימית (CE) היא טכניקת הפרדה המפרידה בין מולקולות בשדה חשמלי בהתאם לגודל ומטען. CE מבוצע בצינור זכוכית קטן הנקרא נימי מלא בתמיסת אלקטרוליטים. ניתוחים מופרדים עקב הבדלים בניידות אלקטרופורטית, המשתנה עם מטען, צמיגות ממס, וגודל. אלקטרופורזה מסורתית בג'לים מוגבלת בכמות המתח שניתן ליישם מכיוון שאפקטי חימום ג'ול יהרסו את הג'ל ואת ההפרדה. נימים יש יחס שטח נפח גדול ובכך לפזרים חום טוב יותר. לכן, המתחים החלים לניסוי אלקטרופורזה נימי הם די גדולים, לעתים קרובות 10,000-20,000 V.

אלקטרופורזה נימית שימושית להפרדות בעלות ביצועים גבוהים. בהשוואה לכרומטוגרפיה נוזלית, הפרדות CE הן לעתים קרובות מהירות ויעילות יותר. עם זאת, אלקטרופורזה נימית פועלת בצורה הטובה ביותר להפריד מולקולות טעונות, אשר אינו מגבלה של כרומטוגרפיה נוזלית. ל- CE יש קיבולת שיא גדולה יותר מאשר כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC), כלומר ההפרדות יעילות יותר וניתן לזהות פסגות נוספות. המכשור יכול להיות פשוט מאוד. עם זאת, HPLC הוא רב-תכליתי יותר ושלבים נייחים וניידים רבים פותחו עבור סוגים שונים של מולקולות.

Procedure

1. הגדרת מכשור CE

  1. הפעל את כלי ה- CE ואת המחשב. באמצעות תוכנת המחשב, הפעל את מקור האור לניתוח UV כדי לאפשר לו להתחמם. לתוכנה מסוימת יש מחוון כאשר המנורה מוכנה לשימוש (סמל המנורה הופך צבע).
  2. הפוך קובץ שיטות. הגדר את הפרמטרים החשובים להפעלת CE. בניתוח זה הטמפרטורות של מחסנית ואחסון מדגם הם 35 °C (5 °F). אורך הגל לגילוי UV הוא 214 ננומטר.
  3. כתוב תוכנית זמן. התוכנית מורכבת בדרך כלל של שלבי שטיפה (כדי לנקות את נימי לפני הניתוח), צעדי הזרקה, ולאחר מכן צעד אלקטרופורזה. לקבלת שלב השטיפה, בצע 2 שטיפות ב

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Results

אלקטרופרוגרמה שנאספו עבור דגימות פפסי ופפסי דיאט מוצגות באיורים 1 ו -2, בהתאמה. שלוש הפסגות של קפאין, אספרטיים וחומצה בנזואית נצפות בתזונה פפסי ויש להם זמני הגירה דומים לסטנדרטים. עבור פפסי רגיל, שיא הקפאין קיים אך לא פסגות אספרטיים וחומצה בנזואית. ניתוח CE מהיר מכיוון ש בז?...

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Application and Summary

אלקטרופורזה נימי משמש הפרדות מיוחדות רבות. לדוגמה, הוא משמש בתעשיית התרופות לבדיקות איכות, כדי לוודא שאין מוצרי צד או מפריעים. CE שימושי במיוחד להפרדת תרופות עם קבוצת אמינו בסיסית, כמו הקירות של נימי יכול להיות נייטרלי עם pH חומצי ולכן התרופה לא להיצמד נימי.

נעשה שימוש גם במצב ...

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Tags

Capillary ElectrophoresisCEChemical AnalysisSeparate MoleculesElectric FieldSizeChargeSub millimeter Diameter TubeCapillaryFlowing Electrolyte SolutionVelocityChargeSizeSolvent s ViscosityResolutionHigh performance Liquid ChromatographyEfficiencySensitivity

PLAYLIST

Loading...
JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved