הדמיית SEM של דגימות ביולוגיות

1. ללבוש כפפות ולנקוט באמצעי זהירות כדי למנוע זיהום בעת טיפול במדגם.
2. ודא כי המדגם בשקופית מיובש ואין זיהום על המדגם. הסיבה לכך היא SEM מודד אפיון פני השטח, ופגמים אלה יכולים לעכב קשות את האות.
3. אם המדגם נטען על שקופית זכוכית סטנדרטית, להקטין את גודל המדגם על ידי ניקוד השקופית עם חותך זכוכית עם קצה יהלום בקו ישר ולדחוף בעדינות על קו הניקוד הרחק מהגוף עד הזכוכית נשברת.
4. בהתאם לדגימה, בחר ציפוי שאין לו את אותו הרכב אלמנטרי (זה יעכב את האות שהתקבל על ידי EDS). להדגמה זו, נעשה שימוש בציפוי פלדיום מזהב.
5. השתמש במעיל המחבט לפי ההוראות. תן למכונה לרחוט את המדגם בסביבות 40 s לציפוי דק עם כיסוי הולם.
6. הר את הדגימה על ספח SEM באמצעות סרט פחמן דו-צדדי מוליך. יש למקם קלטת זו גם מהבמה לחלק העליון של השקופית שהוטחה לקרקע את המדגם אם היא מותקנת על שקופית שאינה מוליכת. שכבה דקה של צבע כסף מוליך יכולה לשמש גם כדי להגדיל את המוליכות של המדגם לשלב.
7. הר את הספח על הבמה ולהדק את הבורג בצד.

2. הליך הדמיה

1. תעמיסו את הבמה לתא. תסגור ותאטם את הדלת. לאחר מכן לחץ על כפתור "העברה" כדי לפתוח את המעבר מתא הטעינה אל הוואקום.
2. ברגע שלחצן ההעברה מפסיק להבהב ודלת הפנימית פתוחה, ניתן להעביר את הדגימה לתא הוואקום על ידי הברגה במוטות המתכת ולדחוף את הדגימה לתא.
3. פתחו את המוט, נסוגו ואבטחו את המוט במלואו לתא העומס, ולחצו על "לאחסן" כדי לסגור את תא העומס מתא הוואקום. המדגם נטען כעת ושאר התהליך מתבצע מתחנת העבודה של המחשב.
4. הזז את הבמה באמצעות הבקר ועל-ידי פתיחת לוח הניווט של השלב עד שהוא יהיה בשדה הראייה שלך.
5. הזז את המדגם אנכית עד מרחק העבודה הוא 5-10 מ"מ. בעת הזזת הבמה בכיוון z, הפעל את מצלמת התא כדי להבטיח שהדגימה שלך לא תגיע קרוב לאקדח האלקטרונים.
6. הפעל את קרן המתח הגבוהה הנוספת (EHT). שים לב שייתכן שתצטרך גם לפתוח את העמודה אם היא מבוטלת מזה זמן מה.
7. בחר את אות SE2 מאפשרויות הגלאי.
8. השתמש בהגדרת kV של כ- 5 kV להדמיה ראשונית ולאחר מכן הגדל ל- 20-30 kV לקבלת אות נוסף באמצעות מצב הפיזור האחורי. אם המדגם לא היה מצופה, שמור על keV נמוך כדי למנוע יותר מדי חפצי טעינה בתמונה ולמנוע נזק לדוגמה.
9. אם אין תמונה ברורה, סובב את המוקד, הבהירות וידיות הניגודיות עד שמבנה נראה לעין. זו תהיה התייחסות לעידון.
10. סובבו את ידית המיקוד במצב גס עד לתמונה גלויה. לאחר מכן עבור בסדר כדי למצוא את המיקוד הטוב ביותר.
11. השתמש בניווט שלבים (לא בכיוון z) ובהגדלה כדי למצוא אזור שממנו יש לשמור תמונה.
12. הקטינו את מהירות הסריקה והדליקו את הקו בממוצע כדי להשיג תמונה טובה יותר לשמירה.
13. שמור את התמונה על-ידי לחיצה ושמירה באמצעות לחצן העכבר הימני במיקום קובץ.
14. הכנס את ה- BSD והזז את הבמה בחזרה למיקום z שבו המדגם ממוקד.
15. חזור על שלבים 8-11 בעת חיפוש אזורי ניגודיות המצביעים על מספר אטומי גבוה יותר.
16. הסר את ה- BSD בסיום.
17. כאשר אתה מוכן להסיר את המדגם, לחץ על הכפתור "להחליף".
18. העבר את המדגם בחזרה לתא העומס ולוץ "חנות" ואז "פורקן".