ההליך הבא מספק שלבים מפורטים הדרושים לאיסוף תמונות VIVO ו- ex vivo NIRF מבעלי חיים קטנים:

1. התקנה ניסיונית

1. חבר מקור אור סיב אופטי למערכת הדמיית הפלואורסצנטיות באמצעות מדריך אור סיבים אופטיים.
2. בחר את מסנן העירור המתאים עבור הניסוי. מסנן העירור קובע את אורך הגל של האור שיש להעביר למדגם ויש לבחור אותו כדי להתאים את ספקטרום העירור של הפלורופור שהוכנס לדגימה.
3. בחר את מסנן הפליטה המתאים. מסנן הפליטה חוסם רכיבים ספקטרליים לא רצויים, אשר עשויים להיות מיוחסים autofluorescence, ויש לבחור כדי להתאים את ספקטרום הפליטה של הפלורופור.

2. הכנת מדגם

1. ב-Vivo
   1. מרדים את החיה בתא אינדוקציה באמצעות איזופלוראן בריכוז של 3-4% בחיוג מד הזרימה.
   2. מעבירים את החיה לקונוס אף קבוע בשלב ההדמיה, ושומרים על איזופלוראן בריכוז של 1-2%. מקור חום אינו נחוץ מכיוון שבעלי החיים בדרך כלל מצפים רק לפרק זמן קצר (> 5 דקות), וטמפרטורת הגוף שלהם אינה יורדת באופן משמעותי.
   3. אבטחו את כפותיו של בעל החיים כדי למזער את חפצי התנועה. הסר את השיער מאזור העניין על ידי החלת קרם depilatory.
   4. יש למרוח קרם דפילטורי על האזור הקטן ביותר הדרוש. אחרי 30, לנגב אותו עם כרית גזה. לנגב את האזור בפעם השנייה עם כרית גזה לחה אתיל אלכוהול כדי להסיר לחלוטין את קרם depilatory.
   5. יש למרוח משחה עיניים על העיניים כדי למנוע ייבוש הקרניות.
   6. הזריקו את הגשושית המולקולרית הפלואורסצנטית להחיות. עבור יישום ספציפי זה, בדיקות MMP2 הפעלה הוזרקו תוך ורידי לתוך הווריד הזנב. בשלב זה, ניתן לדמיין את העכבר. המשך ל"זיכוי תמונה " של פרוטוקול זה כדי להמשיך. לעקוב אחר החיה לנשימה סדירה לאורך כל ההליך הקצר.
2. אקס ויוו
   1. לאחר הזרקת הגשושית הפלואורסצנטית, המת חסד את החיה בצורה הומאנית על פי הנחיות AVMA לשנת 2013 לאותניה של בעלי חיים. פחמן דו חמצני (CO₂₎מנת יתר היא נוהג מקובל להרדים בעלי חיים קטנים.
   2. לחלץ בניתוח את הרקמה או איבר עניין בזהירות להסיר רקמת שומן עודף עם מלקחיים.
   3. לשטוף את הרקמה מלוחים חוצץ פוספט כדי להסיר את שאריות הדם ומניחים את המדגם ישירות על שלב ההדמיה.

3. רכישת תמונות

1. פתח את תוכנת ההדמיה המולקולרית והדליק הן את מקור האור הסיבים האופטיים והן את מערכת הדמיית הפלואורסצנטיות.
2. פתח את חלון הרכישה וציין את סוג החשיפה המתאימה למחקר. החשיפות הזמינות כוללות: חשיפה סטנדרטית ללכידת תמונה בודדת, חשיפה לשקיעת זמן ללכידת סדרה של תמונות לאורך מרווח זמן קבוע וחשיפה מתקדמת ללכידת רצף רציף של חשיפות בזמני חשיפה שונים.
3. בחר UV-Transillumination כמקור התאורה.
4. באמצעות התמונה בתצוגה מקדימה כהפניה, התאם את מוקד העדשה, את שדה הראייה ואת f-stop/צמצם בתא מערכת הלכידה כדי למטב את איכות התמונה שנדגמה. התאם את זמן החשיפה ואת המיקום של המדגם.
5. סגור את חלון התצוגה המקדימה וודא שכל הפרמטרים בחלון הרכישה תואמים להגדרות המצלמה והסינון.
6. לחץ על 'חשוף' כדי לרכוש ולשמור את התמונה.
7. תוכנת הדמיה מולקולרית סטנדרטית מספקת בדרך כלל מגוון כלים אנליטיים, מדידה ותיקון תמונה כדי לכמת אותות פלואורסצנטיים לניתוח תמונה.
8. בסוף מפגש ההדמיה, הסר את הדגימה/החיה, כבה את המערכת ונקה את שלב ההדמיה כדי למזער את הנזק למערכת.