התחל על ידי הכנת כמות מספקת של תערובת electroporation עבור הבקרה ואת הגן של עניין. חבר את תא אלקטרודת צלחת פטרי לאלקטרופורטור. לאחר מכן באמצעות קצוות Microloader, למלא מחטי microinjection עם 8 מיקרוליטר של כל תערובת electroporation.
חותכים את קצות המחטים לפני השימוש כדי להשיג זרימה יציבה באמצעות מספריים עדינים. הקפידו להסיר רק חלק קטן מהקצה מכיוון שקצה קהה ורחב עלול לגרום נזק חמור לאורגנואידים. תחת מיקרוסקופ, בחר חמישה אורגנואידים מוחיים עם גבולות חלקים ומבנים דמויי חדרים גלויים.
לאחר מכן העבירו אותם לצלחת תרבית תאים בקוטר 35 מ"מ המכילה DMEM/F-12 שחומם מראש באמצעות קצה פיפטה חתוך של 1000 מיקרוליטר. כעת, הכניסו בזהירות את המחט דרך הדופן של מבנה דמוי חדר והכניסו אותה לתערובת האלקטרופורציה עד למילוי גלוי. אין להפעיל לחץ מוגזם על מבנים דמויי חדרים כדי למנוע התפוצצות.
העבר אורגנואיד מוחי אחד מוזרק מיקרו לתא אלקטרודות צלחת פטרי עם כמות קטנה של DMEM/F-12. סדרו את האורגנואיד כך שהמשטחים של המבנים דמויי החדרים המוזרקים פונים לכיוון האלקטרודה המחוברת לקוטב החיובי של האלקטרופורטור. כעת, אלקטרופוזציה של אורגנואידים מוחיים אחד אחד באמצעות חמישה פולסים של 80 וולט למשך 50 אלפיות השנייה כל אחד עם מרווח של שנייה אחת.
אם המיקרו-הזרקה והאלקטרופורציה בוצעו בתנאים לא סטריליים, העבירו את האורגנואידים המחושלים מתחת למכסה מנוע זרימה למינרית לצלחת תרבית תאים חדשה בקוטר 35 מ"מ מלאה ב-DMEM/F-12 שחומם מראש. לאחר מכן תרבית את האורגנואידים המחושמלים ב-DM עם ויטמין A על שייקר אורביטלי ב-55 סל"ד באטמוספירה הוחה של 5% פחמן דו-חמצני ו-95% אוויר ב-37 מעלות צלזיוס. למחרת, לאחר התחשמלות, בדוק את האורגנואידים המוחיים עבור אלקטרופורציה מוצלחת תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך קונבנציונאלי.
מעבירים את האורגנואידים המחושמלים לצינור צנטריפוגה חרוטי של 15 מיליליטר באמצעות קצה פיפטה חתוך של 1000 מיקרוליטר ומסירים עודפי תווך. הוסיפו כמות מספקת של 4% פרפורמאלדהיד ב-DPBS ודגרו במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. בסוף הדגירה, שואפים את paraformaldehyde.
לאחר מכן להוסיף 5 מיליליטר של DPBS, לנער בעדינות, ולשאוף את DPBS. אחסנו את האורגנואידים ב-DPBS בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עד לשימוש נוסף. יומיים לאחר ההתחשמלות, תאים חיוביים ל-GFP ממוקמים כמעט אך ורק באזור החדר וחיוביים ל-Pax6, מה שמצביע על כך שתאים אלה הם אבות אפיים או אבות בסיסיים שזה עתה נולדו.
לאחר 10 ימים, התאים החיוביים ל- GFP ממוקמים באזורים הבסיסיים. תאים אלה חיוביים גם עבור Pax6 או NeuN, אשר מעיד על אבות בסיסיים או נוירונים, בהתאמה. מוצג שחזור תלת-ממדי של אורגנואידים מוחיים מחושמלים כדי להתרשם מההתפלגות התלת-ממדית של התאים החיוביים ל-GFP.
