השתמש בנר ביצים כדי לעקוב לאורך היקף כיס האוויר מעל העובר E14 או E15 עם עיפרון ולכסות את האזור המתואר עם סרט שקוף. בעזרת מספריים מעוקלים או עדינים, גזור בעדינות סביב האזור המסומן. היזהר לא לחתוך לתוך קרום העובר או כלי הדם.
לאחר מכן השליכו את החתיכה העליונה של הקליפה. לאחר עריפת ראשו של עובר האפרוח, הניחו את הראש בכלי של 10 ס"מ עם תמיסת CMF קרה וסטרילית. באמצעות מלקחיים עדינים סטריליים, לקלף את העור המכסה את המוח כדי לחשוף את dura mater הבסיסי.
הסר את עצמות הגולגולת היוצרות בצד שמאל וימין של המוח. עצמות הגולגולת היוצרות עדיין אינן מכסות את רוב המוח. השתמשו בעדינות במלקחיים עדינים ומחודדים כדי לקרוע את קרומי המוח, מעל מרכז המוח ולקלף אותו לכל צד כדי לחשוף את המוח.
בעזרת מלקחיים מעוקלים עדינים, גרפו את המוח למעלה מהחזית התחתונה ומשכו אותו בעדינות מתוך החלל שלו. נתחו את המוח לשלושת חלקיו העיקריים המוח הקדמי, המוח התיכון או טקטה אופטית והמוח הקטן. הוציאו את הפייה מאטר מהטקטה בעזרת מלקחיים עדינים והניחו את אזורי המוח המנותחים בכלי סטרילי קטן על קרח.
להטמעה ולחיתוך המוח, הרימו בעדינות את הטקטום האופטי או את אזור המוח הקדמי בעזרת מלקחיים מעוקלים ככף מדידה וכתם מעט על גזה סטרילית כדי להסיר נוזלים מיותרים. הכינו תבנית פשוטה על ידי יצירת רדיד אלומיניום סביב חפץ בגודל מתאים. כאן, בלוק רקמה רוטטת מתכת קטנה משמש כאובייקט.
משתמשים בפיפטת העברה סטרילית וממלאים את התבנית באגרוז נמס נמוך. מקם במהירות את אזור המוח באגרוז ותן לו להתמצק במשך כארבע עד חמש דקות על קרח. חותכים את החלקים על חותך רקמות רוטט באמצעות סכין ספיר.
השתמשו במרית הסטרילית כדי לגרוף ולהסיר את הפרוסה מהמגש. החליקו בעדינות את החלק מהמרית אל תוך ממברנה בעזרת מרית סטרילית נוספת. הניחו את שש הבארות של פרוסות המוח על תוספות קרום באינקובטור תרבית התא בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני.
למחרת הציפוי, השתמשו בפיפטת פסטר סטרילית כדי לשאוב את המדיה מתחת לאינסרט והוסיפו מיליליטר אחד של מצע פרוסה טרי לכל באר מתחת לממברנה. לאחר מכן, כדי להחדיר את תאי GBM לפרוסות המוח, הסר ספרואידים אחד או כמה מצלחת התרבית שלהם באמצעות מיקרו פיפטה של 20 מיקרוליטר המוגדרת לחמישה מיקרוליטר. מוציאים בעדינות את המדיה עם הספרואידים אל פרוסת המוח הרצויה ומאפשרים לכדוריות להתרבות על הפרוסה במשך יומיים עד חמישה ימים.
תוצאות הכדאיות של פרוסות טקטום אופטי x vivo לאחר שבוע בתרבית מוצגות באיור זה. התמונות הקונפוקליות של פרוסת מוח מוכתמת לגרעינים עם ביסבנזימיד ומוכתמת חיסון ללמינין מראות בבירור כלי דם תקינים ושלמים חתוכים אופטית בתצורות שונות. תמונת ההקרנה המקסימלית של ערימת Z קונפוקלית של פרוסת המוח המוכתמת עבור גורם שעתוק SOX 2 וסך גרעינים עם ביסבנזימיד מוצגת כאן.
תוצאות אלה מצביעות על כך שניתן לגדל פרוסות מוח של עוברי אפרוח בתרבית על תוספות קרום במשך כשבועיים ולהישאר בנות קיימא עם הופעת כלי דם תקינים וביטוי גורמי שעתוק.
