התחילו בהנחת עכבר בהריון שהוקרב על גבו על לוח נתיחה. בעזרת מלקחיים, צובטים את קו האמצע של הבטן. בעזרת זוג מספריים חדים, חותכים את הבטן דרך העור ואת הצפק מאיבר המין לכלוב הצלעות מעל קו האמצע.
הסר את הרחם המכיל את העוברים והנח אותו מיד על קרח. חותכים בזהירות דרך שק החלמון בצידי השליה ומוציאים את העוברים. לאחר מכן, הניחו את הראשים העובריים הערופים בכלי קר המכיל סידן ו- HBSS חסר מגנזיום.
מניחים את הראש בכלי 35 מ"מ הפונה שמאלה. נוקב עין אחת עם קצה המלקחיים, מחזיק בחוזקה את הסנטר עם השני. קרעו בעדינות את עור הקרקפת מהעורף לאורך קו האמצע לכיוון החוטם.
השתמש במלקחיים הזוויתיים כדי להיכנס דרך חוט השדרה הסגלגל הלבן ולפצח את הגולגולת לאורך קו האמצע, לחשוף את המוח. מקלפים בעדינות את הגולגולת מהצדדים. לאחר מכן, הרימו את המוח מהגולגולת והשליכו את הגולגולת.
השתמש במלקחיים כדי להסיר את קרומי המוח. הכניסו את המוח לביז'ו המכיל שני מיליליטר של סידן ו-HBSS חסר מגנזיום. הוסיפו לביז'ו 250 מיקרוליטר של טריפסין פי 10.
לערבב את המוח על ידי ניעור bijou ולאחר מכן לדגור במשך 15 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, להוסיף שני מיליליטר של מעכב טריפסין סויה לכל bijou. נערו כדי לפזר את המעכב באופן שווה.
ללא צנטריפוגה, מעבירים שני מיליליטר של הסופרנאטנט מכל ביז'ו לצינור צנטריפוגה של 15 מיליליטר. באמצעות מחט 19 מד המחוברת מזרק חמישה מיליליטר, שואפים את התרחיף פעמיים כדי לשרוט את התאים הנותרים בביז'ו. חזור על השאיפה פעמיים עם מחט של 21 מד.
באמצעות מחט 23-G, מעבירים את התאים מהביז'ו לצינור הצנטריפוגה בקוטר 15 מיליליטר המכיל את הסופרנאטנט של התא והצנטריפוגה ב-200 גרם למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. באמצעות פיפטה סרולוגית של חמישה מילימטר, מעבירים את כל הסופרנאטנט לצינור צנטריפוגה חדש של 15 מיליליטר מבלי להפריע לכדורית. צנטריפוגה חוזרת.
מוסיפים 10 מיליליטר מאמצעי הציפוי לצינור המכיל את הכדוריות המשולבות משני שלבי הצנטריפוגה ומערבבים היטב ליצירת מתלה שלם. לצבוע את התאים עם טריפאן כחול ולספור באמצעות hemocytometer או מונה תאים. לוחית את התאים על ידי הוספת הנפח הנדרש של תרחיף תאי המוח העוברי E17 מורין לתוך צלחת באר.
לדגור על התאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס מתחת ל-5% עד 7% פחמן דו-חמצני למשך שעתיים עד ארבע שעות. לאחר הסרת המדיה, הוסף מדיית בידול חדשה לכל באר. לחץ כלפי מטה על כל החלקת כיסוי צפה באמצעות קצה פיפטה סטרילי.
שמרו על תרבויות על ידי הסרת חלק מהסופרנאטנט והחלפתו באמצעי בידול טרי שלוש פעמים בשבוע. תרביות הודגמו על ידי צביעה אימונופלואורסצנטית עבור NG2 ונסטין כסמנים התפתחותיים, SMI31, MBP ו-NeuN כסמנים עצביים, ו-CNP, GFAP ו-Iba1 כסמני גלייה זיהום של תרביות בנגיף יער סמליקי נוירוטרופי השפיע על האוליגודנדרוציטים ועל הנוירונים. מחקרי qRT-PCR של התאים הנגועים הדגימו שיפור בוויסות של הציטוקין הכימוטקטי Ccl5 mRNA בתרביות שטופלו באינטרפרון בטא.
מחקרי ELISA הראו עלייה ב-Ccl5 בסופר-נטנט, ובכך הראו מתאם בין mRNA לביטוי חלבונים. מחקרים ציטומטריים של זרימה של תרחיף חד-תאי הראו כי 70% מהתאים נותרו בני קיימא. מספר גדול של מיקרוגליה, נוירונים ואסטרוציטים היו נוכחים, בעוד אוליגודנדרוציטים היו הכי פחות נפוצים.
