התחילו בשאיפת המדיה מהלוחות המכילים דבק גולמי 264.7. הוסף 10 מיליליטר PBS לכל צלחת 15 סנטימטר. השתמש במגרד תאים כדי לנתק את התאים ולמשוך אותם לתוך צינור 50 מיליליטר יחיד.
פיפטה את תרחיף התא למעלה ולמטה כדי הומוגניזציה. לאחר מכן, להעביר 5% מנפח תרחיף התא לתוך צינור חדש 1.5 מיליליטר. צנטריפוגה ב-300 גרם למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר.
השליכו את הסופרנאטנט והניחו את גלולת שבר התא הכוללת על קרח. לאחר צנטריפוגה של המתלה הנותר כפי שתואר קודם לכן, יש לשאוף את הסופרנאטנט ולהשהות מחדש את כדורית התא בחמישה מיליליטר של חיץ מיטוכונדריה קר כקרח. צנטריפוגו את המתלים ב-300G למשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס.
יש להשהות מחדש את הגלולה ב-0.5 מיליליטר של חיץ מיטוכונדריאלי קר. ולהעביר את המתלה לצינור 1.5 מיליליטר. לאחר מכן, הומוגניזציה של המתלים, עוקף אותו 30 פעמים דרך מחט 25 מד מותאם מזרק אחד מיליליטר.
לאחר מכן הוסיפו מיליליטר אחד של חיץ מיטוכונדריה קר לצינור וערבבו בהיפוך. לאחר צנטריפוגה של התאים, מעבירים מיליליטר אחד של הסופרנאטנט לצינור טרי על קרח. השהה מחדש את הגלולה במאגר והפוך את הגלולה להומוגנית על ידי מעבר דרך מחט 25 מד המותאמת למזרק של מיליליטר אחד.
משוך את כדורי התא ההומוגני ואת הסופרנאטנט מהצעדים הקודמים לתוך צינור יחיד של 1.5 מיליליטר. צנטריפוגר אותו ב 2, 000G במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס. אוספים את הסופרנאטנט ומחלקים אותו לארבעה צינורות 1.5 מיליליטר.
לפצות את הנפח בכל צינור ל 1.5 מיליליטר באמצעות חיץ מיטוכונדריאלי. הפוך את הצינורות כדי לערבב את תוכנם ולאחר מכן צנטריפוץ את הצינורות. מוציאים בזהירות את הסופרנאטנט ואת הגלולה התאית הלבנה העליונה.
שמור אחד מארבעת הצינורות המכילים את הגלולה המיטוכונדריאלית החומה על קרח כשבר מיטוכונדריאלי גולמי. משכו את הכדוריות הנותרות לתוך צינור חדש והפכו את הנפח הסופי למיליליטר אחד עם חיץ מיטוכונדריה. באמצעות פרוטוקול זה, סך התאים ושברים מיטוכונדריאליים גולמיים התקבלו מקו תאי המקרופאג הגולמי 264.7 ו-BMDM.
ניתוח דם חיסוני הראה כי סינתאז ציטראט מיטוכונדריאלי היה מועשר בחלק הגולמי. חלבונים מציטוזול, קרום פלזמה, גרעין, ליזוזום ורשתית אנדופלסמית נעלמו. ניתוח פרוטאום הראה העשרה של יותר מפי עשרה בחלק הגולמי.
ששת התאים האחרים התרוקנו במהלך הטיהור.
