Microfluidic Shear Apparatus Setup for Single-Cell Fluid Shear Assay

התחל את הפרוטוקול על ידי הכנת מדיית הזרימה הצמיגה של בדיקת הגזירה. לשם כך, חממו מראש את תרבית הבסיס למשך כ-10 עד 20 דקות בטמפרטורה של 60 עד 70 מעלות צלזיוס באמצעות ערבוב מגנטי או פלטה חשמלית. תוך ערבוב מתמשך של המדיה, הוסיפו לתוכה מתילצלולוז בעדינות כדי לעזור לחלקיקי המתילצלולוז להתפזר במהירות מבלי להתקרש.

אפשר לתהליך זה להימשך כ-15 עד 24 שעות כדי להבטיח תערובת הומוגנית ברורה של מדיה ותאית. כדי להתקין את מנגנון הגזירה, חברו אטם גומי לנתיב הזרימה כדי להדק את החיבור בין תא הזרימה לצלחת הפטרי, ולהבטיח זרימה אחידה מבוקרת של תאים בודדים. אטם הגומי מגיע בגדלים שונים בהתאם לפרופיל הזרימה הרצוי ולאזור התצפית.

לאחר מכן, הגדר את מערכת בדיקת הגזירה הכוללת מזרקים כפולים של 60 או 100 מיליליטר המחוברים למשאבת מזרק ניתנת לתכנות לעירוי ונסיגה של אמצעי התרבית הצמיגיים. ממלאים מזרק באמצעי הזרימה הצמיגי המוכן ומחברים את המזרק הממולא למיקומו המתאים על משאבת המזרק. לאחר מכן, חבר מזרק ריק למיקום המזרק השני במשאבת המזרק.

באמצעות מחברי צינורות וצינורות בגודל 1/16 אינץ ', חבר את שני המזרקים לתא הזרימה. תכנת את המשאבה להחדיר ולמשוך נפח מסוים של נוזל בקצב ייעודי, ובחר את המזרקים המתאימים. תוכנית לדוגמה מוצגת על המסך.

שאפו את תרבית התאים מצלוחית הפטרי להתכונן לגזירה. לאחר מכן, הכנס וקבע את תא הזרימה עם אטם הגומי על צלחת הפטרי המכילה את התאים המחוברים. הניחו את תא הזרימה המיקרופלואידי המותאם עם התאים בצלחת על מיקרוסקופ הפוך המחובר לצג תצוגה.

ההתקנה מוכנה כעת להפעלת לחץ גזירה נוזלי על תא בודד ולניטור אופטי של העיוות התאי שנוצר.