היכונו להצבעה חיסונית על ידי ניתוח הסטריה וסקולריס מהעכבר והוסיפו את הרקמה לצלחת בת 24 בארות המכילה 200 מיקרוליטר של 4% פרפורמלדהיד ב-1X PBS. לדגור על הרקמה במשך 20 דקות בטמפרטורת החדר. בצע שתי שטיפות קצרות של 1X PBS על שייקר מסלול בסל"ד נמוך.
הסר את PBS, ולאחר מכן בצע חדירה וחסימה למשך שעה לפחות בטמפרטורת החדר ב 300 מיקרוליטר של תמיסת PBST. לאחר מכן, להכתים את הרקמה עם הנוגדן הראשוני במשך הלילה בארבע מעלות צלזיוס. לאחר מכן מוסיפים נוגדן משני ודגרים במשך שעתיים בטמפרטורת החדר על שייקר מסלולי, בסל"ד נמוך.
כסו את הצלחת כדי להגן על הנוגדן המשני המתויג פלואורסצנטית מפני אור. לאחר מכן, הכינו מיקרו-מגלשה גדולה יותר על ידי הנחת שני פסים קטנים של דבק לאורך ציר ה-25 מ"מ, רק קטנים יותר מהחלקת כיסוי זכוכית בגודל 18 על 18 מילימטר. מניחים טיפה אחת של מגיב הרכבה בין פסי הדבק.
באמצעות מספר 55 מלקחיים, gab כמה שפחות רקמה על קצה אחד של SV, ולהעביר אותו מ PBS למגיב הרכבה. הניחו קצה אחד של פתק הכיסוי על המגלשה שבה הונח פס דבק אחד. לאחר מכן שחררו בעדינות את החלקת הכיסוי כדי למנוע יצירת בועות אוויר.
אטמו את התושבת על ידי טבילת טיפה של לק שקוף בכל פינה של התושב. תייג את הדגימה על פתק כיסוי הזכוכית, הרחק משדה ההדמיה. דמיינו את רקמת SV תחת מיקרוסקופ דיסקציה כדי לוודא שהיא שוכבת שטוחה ולא ליד בועות אוויר.
אם רקמת ה-SV אינה מכוונת כראוי, נסו לדחוף החוצה בועות אוויר או להסיר בזהירות את החלקת כיסוי הזכוכית הקטנה יותר ולמקם מחדש את ה-SV. הר שלם של SV מעכבר P30 הוכן ובוצעה הדמיה קונפוקלית. ביטוי ZsGreen נצפה בתאי הביניים, GSIB4 מסומן בתאי אנדותל, ו- DAPI מסומן בגרעינים.
