כדי להתחיל את הכתם המערבי של דגימות ה- DNA המעוכלות המנורמלות, הוסף מאגר דגימת 4X Laemmli והרתיח את הדגימה במשך חמש דקות. טען חמישה עד שישה מיקרוגרם של דגימה מעוכלת על ג'ל פוליאקרילאמיד 4% עד 20% ובצע SDS-PAGE כדי לפתור שינויים ללא שינוי ולאחר תרגום או DPC מצומד PMT. לדגור על הג'ל עם כתם כחול קומאסי למשך הלילה בטמפרטורת החדר.
שטפו את הג'ל במים מזוקקים פעמיים במשך שעתיים לפני רכישת התמונה. כדי לזהות ubiquitylation, SUMO-1 או SUMO-2 ו 3 שינוי, ריבוסילציה ADP, סך הכל TOP1, TOP2 אלפא, או TOP2 בטא DPC, לדלל את הנוגדנים המתאימים כפי שמוצג בטבלה. לאחר מכן, מעבירים את הג'ל בדילול מתאים של נוגדן ראשוני בחיץ חוסם ודגרים על הקרומים למשך הלילה בארבע מעלות צלזיוס.
לאחר סיום, לדגור PBST שטף ממברנה עם נוגדן משני מדולל 5, 000 קפל בחיץ חוסם במשך 60 דקות בטמפרטורת החדר לפני פיתוח הממברנה עם מגיב chemiluminescence משופר. קבל תמונה באמצעות מערכת ההדמיה. החשיפה לקמפטוטצין גרמה להיווצרות DPCs TOP1.
היווצרות ה-DPCs של TOP1 הגיעה לשיאה לאחר 20 דקות של חשיפה לקמפטוטצין בדומה לשינוי האנטי-SUMO-2 וה-3. השיא של שינוי SUMO-1 ו ubiquitylation נצפתה גם. DPCs והשינויים שלהם SUMO-2 ו -3 TOP1 פחתו באופן תלוי מינון camptothecin.
TOP2 DPCs המושרה אדיפוציט ושינוי SUMO-2 ו -3 הגיעו לשיא לאחר 20 דקות ולאחר מכן ירדו. לשם השוואה, השינויים ב-SUMO-1 וביוביקוויטין הגיעו לשיא של 60 דקות. ה-DPCs המושרים בפורמלדהיד וה-SUMO-2 וה-3 שלהם, SUMO-1 והיוביקוויטילציה נוצרו והצטברו באופן תלוי מינון.
הזיהוי הכמותי של PARylation של TOP1 DPC באמצעות נוגדן anti-PAR, TOP1 DPC PARylation לא היה ניתן לגילוי אלא אם כן נוסף מעכב PARG לתא, דבר המצביע על כך ש- PARylation מתרחש במהירות והוא דינמי מאוד.
