להתחיל לחסן 2 מיליון תאי pan02 ב-12 מיליליטר DMEM, ולדגור ב-37 מעלות צלזיוס ו-95% לחות, 5% פחמן דו-חמצני ו-35% אוויר. לאחר 48 שעות צנטריפוגו את התרבית ב 28 גרם במשך 2 דקות ולזרוק את supernatant. תקן את התאים על ידי הוספת 1 מיליליטר של 2.5% גלוטראלדהיד בצינורות מיקרו צנטריפוגות 1.5 מיליליטר למשך הלילה ב 4 מעלות צלזיוס.
למחרת צנטריפוגו את הדגימות ב 1006 גרם במשך חמש דקות ושאפו את הקיבוע לפני שטיפת הדגימה פעמיים עם PBS טוחנת 0.1. לאחר מכן, שטפו את הדגימות פעמיים במים מזוקקים פעמיים במשך 10 דקות כל אחת. לאחר מכן, להוסיף תמיסה 50 מיקרוליטר של 1% osmium tetroxide ו 1.5% אשלגן ferrocyanide ביחס של 1 ל 1 לדגור ב 4 מעלות צלזיוס במשך 1 שעה.
צנטריפוגה ושטפו את הדגימות פעמיים עם PBS טוחנת 0.1 ופעם אחת עם מים מזוקקים כפול. לאחר מכן מוסיפים 1 מיליליטר של 1% thiocarbohydrazide ודוגרים בטמפרטורת החדר במשך 30 עד 60 דקות. לאחר הדגירה צנטריפוגה ולהשליך את supernatant לפני שטיפת הדגימות 4 פעמים עם מים מזוקקים כפול.
לאחר מכן, להוסיף 50 מיקרוליטר של 1% osmium tetroxide ולאפשר לו להיות קבוע בטמפרטורת החדר במשך 1 שעה. צנטריפוגה שוב ולשטוף את הדגימות 4 פעמים עם מים מזוקקים כפול. הוסיפו מיליליטר אחד של 2% אורניל אצטט ותנו לו להכתים ב-4 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
לאחר שטיפת הדגימות במים מזוקקים כפולים, מוסיפים מיליליטר אחד של תמיסת וולטון ודגרים בטמפרטורה של 60 מעלות צלזיוס למשך שעה. לאחר הדגירה יש לשטוף את התאים 4 פעמים במים מזוקקים פעמיים לפני התייבשות בסדרת אתנול מדורגת למשך 10 דקות כל אחת. לאחר מכן יש לייבש פעמיים במיליליטר אחד של 100% אצטון למשך 10 דקות כל אחת.
לאחר מכן, ערבבו 200 מיקרוליטר אצטון עם שרף אפוקסי Pon 812 ביחס של 3 ל-1, 1 ל-1 ו-1 ל-3. והשרו את הדגימות בשרף בטמפרטורת החדר למשך 2, 4 ו-4 שעות בהתאמה לאחר הדגירה המתאימה ספגו את הדגימות למשך הלילה בשרף אפוקסי 100% Pon 812. למחרת, מעבירים את הדגימות לתבנית הטבעה שטוחה ומפילמרים אותן בתנור בחום של 60 מעלות למשך 48 שעות.
לאחר פילמור, באמצעות אולטרה מיקרוטום, לאסוף רצועות פרוסות סדרתית בעובי 70 ננומטר על פרוסות סיליקון הידרוליזה ולייבש אותם בתנור 60 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות.
